11. Возбудители гнойно-септических инфекций. Принципы лабораторной диагностики.

ГСИ (гнойно-септические инфекции) – это инфекции, вызываемые различными микроорганизмами и сопровождающиеся воспалительной реакцией с образованием гноя.

Возбудители гси

I. Грибы. Н-р, грибы р. Candida способны контаминировать раны, переходя с открытых участков кожи, вызывать катетер-ассоциированные инфекции.

II. Бактерии.

A. Аэробы и факультативные анаэробы:

- Грамположительные кокки (стафилококки, стрептококки, энтерококки);

- Грамотрицательные кокки (представители семейства Enterobacteriaceae (E. Coli, клебсиеллы); род Pseudomonas; род Acinetobacter и др.). о

B. Облигатные анаэробы:

- Спорообразующие – род Clostridium, семейство Bacillaceae (возбудители газовой гангрены, столбняка, ботулизма, псевдомембранозного колита и т.д.);

- Неспорообразующие – род Bacteroides, род Prevotella, род Porphyromonas.

Принципы лабораторной диагностики гси, вызванных аэробными и факультативно-анаэробными бактериями

1. Бактериологическое исследование крови

1 день. Забор венозной крови→посев крови у постели больного на жидкие питательные среды в соотношении 1/10-1/60, чтобы путем разведения ослабить бактерицидные свойства крови. При этом используют следующие питательные среды:

- для аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (сахарный бульон(МПБ+глюкоза) и двухфазная среда (МПБ+глюкоза+МПА));

- Для облигатно-анаэробных бактерий – тиогликолевая среда;

Посевы доставляют в лабораторию и помещают в термостат.

2-36 день. Посевы инкубируют до 6 недель ежедневным просмотром первые 8 дней.

Есть видимый рост→делают мазки и окрашивают по Граму→в зависимости от результатов, делают высевы на соответствующие питательные среды→выделяют чистую культуру→идентификация

Нет видимого роста→с сахарного бульона на 3 и 5 день делают высев на кровяной агар→при отрицательном результате дают предварительный отриц. Результат.

2. Бактериологическое исследование отделяемого раны

На 1 этапе проводится микроскопия мазка по Граму с дальнейшим высевом на питательные среды (инкубация в термостате 5 суток с ежедневным просмотром):

- Кровяной агар – для выделения широкого круга возбудителей (стафилококк, стрептококк, энтерококк)

- Сахарный бульон – те же м-ы. Но в модификации (с 2-4%глюкозой – среда Сабуро) оптимален для выделения дрожжей

- Среда для контроля стерильности – для выделения облигатных анаэробов и факультативных анаэробов;

На 2 этапе выделяют чистую культуру, проводят идентификацию. На 3 этапе определяют АБ-резистентность (метод стандартных дисков) и при необходимости проводят внутривидовое типирование.

Лабораторная диагностика анаэробных инфекций

Бактериоскопический метод. Исследуемый материал - мазки, приготовленные из раневого отделяемого, отечной жидкости, некротизированной ткани. Проводится микроскопия данных мазков окрашенных по Граму, Цилю-Нильсену и Гинсу-Бурри. Обнаружение в препаратах крупных прямых грамположительных палочек, образующих капсулы и центрально или субтерминально расположенные споры - газовая гангрена.

Экспресс диагностика - прямой метод иммунофлюоресценции.

Бактериологический метод. Исследуемый материал аналогичен. На 1 этапе производят посев на обогащенную тиогликолевую среду с желчью и канамицином. Далее выделяют чистую культуру (2 этап). Производят высев со среды обогащения на среду с анаэробным агаром Цейсслера (анаэробный кровяной МПА). Производится инкубация посевов в анаэробной атмосфере. Данная атмосфера достигается 3-мя способами:

1. Физический – культивирование в микроанаэростате;

2. Химический – использование веществ, поглощающих кислород(пирогаллол), использование восстановителей для снижения ок.-восст. Потенциала (цистеин, тиогликолят натрия)

3. Биологический – культивирование совместно с анаэробами; в толще плотной среды; заливка высоким слоем вазелинового масла/парафина.

На 3 этапе производится учет культуральных свойств на среде Цейсслера (через сутки регистрируются– шероховатые (реже – гладкие), крупные, плоские сероватые колонии с зоной гемолиза.) Осуществляется микроскопия мазка по Граму с дальнейшим отколом колонии на анаэробные агары с углеводами.

На 4 этапе происходит изучение биохимических свойств и токсигенности. Далее производится окончательная идентификация культуры.

Далее представлена информация по стафилококкам с дополнениями Ниловой, что соответствует вопросу №49. Для более полного ответа см. вопросы №49, 50, 7, 26 (они все относятся к теме).