1. Аденовирусная инфекция. Характеристика возбудителей. Лабораторная диагностика.

Семейство Adenoviridae включает пять родов:

· Mastadenivirus (вирусы млекопитающих) – только они имеют медицинское значение, остальные так для интереса.

· Aviadenovirus (вирусы птиц), Atadenovirus (геном этих вирусов обогащен А-Т-парами)

· Siadenovirus (содержит ген сиалидазы)

· Ichtadenovirus (вирусы рыб)

Известно более 100 серотипов, из которых около 50 патогенны для людей. Наиболее типично субклиническое и инаппарантное течение аденовирусной инфекции, связанное с поражением респираторной, гастроинтестинальной и зрительной систем.

Вирион аденовирусов имеет форму икосаэдра (диаметр 90 нм). Оболочки нет. Капсид заключает двунитевую линейную ДНК, связанную с белками. Капсид состоит из 252 капсомеров, из них 240 (гексоны) образуют грани, 12 (пентоны) образуют вершины капсида; От каждого пентона отходит гликопротеиновая нить (фибрилла), которая является прикрепительным белком и гемагглютинином. Аденовирусы человека делят на шесть групп (A–F).

Антигенная структура:

• нуклеокапсид – комплементсвязывающий антиген, идентичный у всех сероваров;

• А-антиген (гексоны) – группоспецифический антиген;

• В-антиген (пентоны) – антиген подгрупп (всего 3);

• С-антиген (фибры) – типоспецифический (определяет серовар).

Репродукция. Прикрепляются к рецепторам поверхности клетки с помощью гликопротеиновых фибрилл. Проникает в клетку клатринопосредованным эндоцитозом. Депротеинизация вирионов начинается в цитоплазме и заканчивается в ядре клетки. Репликация вирусной ДНК происходит в ядре клетки. Белки капсида образуются в цитоплазме и затем транспортируются в ядро, где собираются вирионы. Вирус выходит из клетки в результате ее дегенерации и лизиса. Возможна латентная инфекция (в лимфоидных клетках).

Жизненный цикл (по порядку):

ü адсорбция с помощью фибров

ü проникновение

ü депротеинизация НК у ядерной мембраны и проникновение в ядро

ü синтез мРНК РНК-полимеразой

ü синтез ранних вирусоспецифических белков

ü репликация вирусной ДНК

ü репликация поздних мРНК

ü синтез поздних вирусных белков

ü выход из клетки с ее лизисом

Эпидемиология. Источником инфекции являются больные люди с острой или латентной формой заболевания. Чаще болеют дети до 14 лет. Механизмы распространения — респираторный и контактный. Кишечные аденовирусы имеют фекально-оральный механизм передачи. Заболеваемость характеризуется осенне-зимней сезонностью. Отмечаются вспышки и спорадическая заболеваемость.

В окружающей среде аденовирусы более устойчивы, чем большинство других вирусов человека. Они инактивируются при 56 qС в течение 30 мин; сохраняют активность в течение 7 сут при 36–37 qС, сохраняются при лиофилизации; устойчивы при рН 5,0–9,0.

Инкубационный период составляет 4–5 суток. Первичная репродукция аденовирусов происходит в эпителиальных клетках слизистой оболочки дыхательных путей и кишечника, в конъюнктиве глаза и в лимфоидной ткани (миндалины и мезентериальные узлы). После появления первых симптомов возникает короткая вирусемия.

По типу поражений клеток различают:

· продуктивная инфекция сопровождается гибелью клетки после выхода из нее до 1 млн вирионов (у некоторых хозяев наблюдается низкий выход вирионов — низкопродуктивная инфекция, либо абортивная инфекция);

· персистирующая инфекция (протекающая хронически, бессимптомно) возможна при замедленной скорости репродукции вируса, что позволяет клеткам исправлять повреждения, наносимые вирусом;

· трансформирующая инфекция возникает при заражении аденовирусами человека новорожденных мышей, крыс, хомяков; у них возникают опухоли.

Клиника: Аденовирусы — одни из возбудителей ОРВИ, катаральные проявления, фарингоконъюнктивиты, возможно тяжелое воспаление роговицы с потерей зрения. У детей младшего возраста могут развиваться гастроэнтериты. В закрытых организованных коллективах (школьники, военнослужащие) возможны эпидемические вспышки с тяжелыми осложнениями (пневмония, энцефалит). К редким аденовирусным инфекциям относятся менингоэнцефалиты и геморрагические циститы. Иммунитет — типоспецифический, клеточно-гуморальный, стойкий.

Диагностика: В зависимости от клинической формы болезни исследуют отделяемое носоглотки, зева, конъюнктивы и фекалии. Возможно выделение аденовирусов на культуре эпителиальных клеток человека (ЦПД, внутриядерные включения) и идентификация с помощью РИФ (экспресс метод), ИФА, РСК, РН, ИФМ. Серологический метод: с помощью РСК, РН, РНГА определяют нарастание титра антител в сыворотке крови. Молекулярно-генетический метод: ДНК вируса выявляют с помощью ПЦР. Специфическая идентификация по РТГА и РН.

Лечение симптоматическое, возможно применение рибавирина, интерферона и его индукторов. Разработаны пероральные живые тривалентные вакцины, назначаются по эпидпоказаниям.

2. Актиномицеты. Актиномикозы, диагностика и принципы лечения

Морфология. Род Actynomyces Ветвящиеся бактерии.

Ветвящиеся грамположительные некислотоустойчивые неспорообразующие бактерии. Они полиморфны и могут быть палочковидной неправильной формы, прямыми или слегка изогнутыми с утолщениями на концах.

В мазках располагаются одиночно, парами Y-, V-образно или в виде палисада. Часто образуют нити длиной 10–50 мкм и хорошо развитый истинный несептированный мицелий (у одних видов — длинный редко ветвящийся, у других — короткий и сильноветвящийся).

Не содержат в клеточной стенке хитина, стенка имеет строение грамположительных бактерий. Мицелий имеет вид тонких прямых палочек, образуют нити.

Все морфологические формы способны к истинному ветвлению, особенно на тиогликолевой полужидкой среде. По Граму окрашиваются плохо, часто образуют зернистые либо четкообразные формы; некислотоустойчивы.

Типовой вид — Actinomyces bovis.

Культуральные свойства: Облигатные и факультативные анаэробы. Капнофилы (6–10% СО2). Для хорошего роста необходимы среды, содержащие витамин K3, гемин, 5% СО2. Растут на тиогликолевой среде, сердечно-мозговом бульоне, агаре Шелдона. Растут медленно, посевы следует культивировать 7 сут. Температурный оптимум роста 37 С. Некоторые штаммы дают α-β-гемолиз на средах с кровью. Некоторые виды формируют нитчатые микроколонии, напоминающие мицелий, на 7е сутки образуют S-формы колоний, иногда окрашенные в желтый/красный цвет. A odontolyticus на кровяном агаре образует красные колонии с зоной β-гемолиза.

Биохимическая активность. Хемоорганотрофы. Ферментируют углеводы образованием кислоты без газа, продукты ферментации — уксусная, муравьиная, молочная и янтарная кислоты. Наличие каталазы и способность восстанавливать нитраты в нитриты, индол не образуют.

Антигенная структура. В ИФА выделяют 6 cepoгpyпп: A, B, C, D, E и F

Чувствительность к антимикробным препаратам. Чувствительны к пенициллинам, тетрациклину, эритромицину, но резистентны к антимикотикам. Чувствительны к действию обычно применяемых антисептиков и дезинфектантов.

Эпидемиология: Источник инфекции — почва. Механизм передачи — контактный, а путь передачи — раневой. Наиболее часто отмечается эндогенный путь инфекции. Характерна множественность механизмов, путей и факторов передачи. Восприимчивость к актиномицетам, как ко всем условно-патогенным микробам, низкая. Колонизируют слизистую оболочку полости рта человека и млекопитающих.

Патогенез. Вызывают оппортунистическую инфекцию. Наиболее частым возбудителем которой является A. israelii.

Вокруг возбудителя формируются уплотнения, которые постепенно размягчаются с образованием множественных абсцессов, сливающихся между собой. В гное и тканях образуются «серные» гранулы (тельца Боллингера) — сферические бледно-желтые шаровидные частицы диаметром 1–2 мм, содержащие друзы микроба. Характерно распространение воспалительного процесса по направлению к поверхности кожи с образованием свищей. Одновременно отмечается фиброз. В образовании нагноений также играет роль присоединение вторичной, преимущественно стафилококковой инфекции. Антигены актиномицетов приводят к специфической сенсибилизации и аллергической перестройке организма.

Клиника. Актиномикоз.

Актиномицеты вызывают актиномикоз — хроническое гнойно-воспалительное заболевание с образованием гранулем.

Микробиологическая диагностика: Материал для исследования - мокрота, ликвор, гной из свищей, биопсия тканей.

Для диагностики используют бактериоскопический, бактериологический, серологический и аллергологический методы.

По обнаружению в исследуемом материале друз актиномицетов, имеющих вид мелких желтоватых или серовато-белых зернышек с зеленоватым отливом. По Граму споры окрашиваются в темно-фиолетовый, мицелий — в фиолетовый, а друзы — в розовый цвет.

Для подавления роста сопутствующей микрофлоры гной и мокроту перед посевом центрифугируют в растворе пенициллина и стрептомицина. Засевают на питательные среды (сахарный агар) и культивируют в аэробных и анаэробных условиях. У выделенных культур определяют способность сворачивать и пептонизировать молоко — признак, характерный для актиномицетов. Выделение анаэробных видов подтверждает диагноз актиномикоза.

Для серодиагностики ставят РСК с актинолизатом. Реакция недостаточно специфична, поскольку положительные результаты могут отмечаться при раке легкого и тяжелых нагноительных процессах. Применение в качестве АГ вместо актинолизата внеклеточных белков актиномицетов повышает чувствительность РСК. Этот же АГ можно использовать и для постановки РИГА. Аллергическую пробу проводят с актинолизатом. Диагностическое значение имеют положительные пробы.

Лечение. Лучшие результаты дает сочетание этиотропной терапии (антибиотики) и иммунотерапии актинолизатом. Применение пенициллина, тетрациклина, эритромицина, клиндамицина.

Профилактика. Специфическая профилактика - нет. Неспецифическая - повышение иммунного статуса.

Источники: Mkb_-_teoriaA.pdf, Уч. Микробиология _Зверев

3. Аспергиллез. Морфология возбудителей. Методы и критерии диагностики.

К возбудителям аспергиллеза относят несколько видов несовершенных плесневых грибов из рода Aspergillus. Наиболее часто ими являются следующие виды Aspergillus: A. fumigatus, реже A. flavus, A. niger, A. terreus, еще реже A. glaucus, A. nidulans и другие, всего 15 условно патогенных для человека видов.

Экология и эпидемиология. Все аспергиллы – космополиты, сапрофиты, обитающие в почве, споры этих грибов всегда можно обнаружить в окружающем воздухе, в домашней и строительной пыли. Заболевание распространено повсеместно. Механизм инфицирования аэрогенный, споры гриба попадают на слизистые оболочки дыхательных путей. Гораздо реже заражение происходит в результате травматической имплантации возбудителя – в том числе и при инфицировании мест инъекций, при хирургических вмешательствах. Внутрибольничные вспышки аспергиллеза возникают, как правило, там, где рядом с больницей или внутри нее проводятся строительные работы, во время которых вместе со строительной пылью в воздух высвобождается огромное количество спор. Описаны внутрибольничные вспышки, причиной которых было загрязнение аспергиллами систем вентиляции, кондиционеров. С грибами рода Aspergillus встречаются чаще люди следующих профессий: сельскохозяйственные рабочие, птицеводы, строители, мусорщики, работники хлопкоочистительных и ткацких фабрик, ферментных производств.

Морфология и физиология. Грибы рода Aspergillus растут очень быстро, их колонии созревают за 3–4 сут. Типичные колонии вначале светлые, а затем темнеют. Колонии A. fumigatus имеют серые с зеленоватым или синеватым оттенком, A. flavus – желтые, A. niger – черные при созревании конидий.

Характерным для всего рода Aspergillus является конидиальная головка. Конидиеносец располагается на особой клетке-ножке. Верхушка конидиеносца утолщена, на ней в один или несколько рядов располагаются конидиогенные клетки-фиалиды, а на них образуются округлые конидии. Виды Aspergillus различают по особенностям взаиморасположения фиалид и конидий.

Aspergillus fumigatus и многие другие аспергиллы – термотолерантные грибы, способные расти при 40(С более высоких температурах. Для идентификации аспергилл используется специальная синтетическая среда Чапека-Докса.

Факторы патогенности. Среди факторов патогенности аспергилл выделяют инвазивный рост, способность выживать во внутренней среде человека и наличие ферментов-протеиназ, в частности – кератиназ и эластазы, способной разрушать эластические волокна легких. A. flavus является токсигенным, выделяя экзотоксины (афлотоксины, или флавотоксины)

Патогенез и иммунитет. Попадание спор Aspergillus на слизистые оболочки дыхательных путей само не приводит к разрушению тканей. Прорастание спор контролируется макрофагами, и локальная недостаточность их функции позволяет колонизацию слизистой. При СПИД описана особая изолированная форма инфекции – аспергиллез бронхов. Нейтропения различного происхождения – основная причина развития инвазивных и диссеминированных форм аспергиллеза. При достаточном числе нейтрофилов проникшие грибы Aspergillus могут колонизировать, без инвазии, поверхности измененных в результате предшествовавшего патологического процесса тканей, а также существующие (придаточные пазухи носа), или сформировавшиеся в результате другого заболевания полости. Так развивается аспергиллема. Контакт с антигенами Aspergillus может привести к развитию аллергии – инфекционно-зависимой бронхиальной астме (реакции гиперчувствительности I типа), экзогенному аллергическому альвеолиту (реакции IV типа) и аллергическому бронхолегочному аспергиллезу (реакции I и III, а возможно, и IV типа).

Гифы Aspergillus обладают свойством прорастать стенки сосудов, вызывая тромбозы, кровотечения. В части случаев инвазивного аспергиллеза легких наступает гематогенная диссеминация – в головной мозг, почки, сердце, кости, кожу и другие органы. Диссеминация может возникать не только из очагов в легких, но и при травматической имплантации возбудителя – через кожу, роговицу глаза, при оперативных вмешательствах. Грибы рода Aspergillus вызывают также кератомикозы, возникающие вследствие травмы глаза, и отомикозы – поражения наружного слухового прохода.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат: при легочном аспергиллезе – мокрота, смывы с бронхов; при диссеминированных поражениях – кровь, биоптаты, а также моча и спинномозговая жидкость. Можно использовать также смывы из пазух носа, соскобы с некротических поражений кожи. Выделенный в культуре гриб, принадлежащий к роду Aspergillus, не всегда означает лабораторное подтверждение диагноза аспергиллеза, поскольку грибы рода Aspergillus являются самыми распространенными контаминантами культуры. Культура гриба, полученная при посеве материала из стерильных сред (кровь, ликвор), обычно является результатом загрязнения из воздуха. Диагностическое значение имеет обнаружение или выделение Aspergillus spp. из мокроты пациента с выраженной нейтропенией, входящего в группу риска (больные лейкозами, получающие цитостатическую и кортикостероидную терапию), в этом случае немедленно назначается лечение.

ЗВЕРЕВ

РЯБИНИН

Иммунологическая диагностика. В диагностике инвазивных и аллергических форм аспергиллемы, используется обнаружение антител методом иммунопреципитации: иммунодиффузии в агаре и иммуноэлектрофореза. В диагностике инвазивных и диссеминированных форм аспергиллеза, на фоне нейтропении используют тест на обнаружение растворимого галактоманнанового антигена клеточной стенки Aspergillus, латекс-агглютинации, или иммуноферментный. Кожные пробы с антигенами Aspergillus используются в диагностике аллергических форм. В настоящее время для диагностики аспергиллеза разработана и внедряется методика ПЦР.

Лечение и профилактика. В лечении аспергиллеза используются два препарата: амфотерицин В и итраконазол. Предпочтение отдают новым липидным формам амфотерицина («амбизом»). Проходит испытания каспофунгин («кандикас»). Профилактическое назначение амфотерицина проводят предрасположенным больным при нейтропении. Внутрибольничное инфицирование предупреждается контролем стерильности оборудования и чистоты воздуха.