Задача 30.

У пациента жжение в полости рта, повышение температуры тела. На слизистой видны пузырьки, некоторые из которых изъязвляются. Диагноз - герпетическое поражение внутренних поверхностей щек. В числе прочих препаратов больному назначен «Интерферон лейкоцитарный (ИФН)».

Вопросы:

1. Что содержится в препарате?

Интерферон лейкоцитарный (ИФН) – иммуномодулирующий препарат с противовирусным действием. Содержит натуральные альфа-интерфероны из лейкоцитов крови человека.

2. Как получен препарат?

Для приготовления интерферона используют лейкоциты свежеполученной донорской крови. Под воздействием вируса - интерфероногена лейкоциты, находящиеся в культуральной среде, синтезируют интерферон. Затем лейкоциты удаляют центрифугированием, вирус инактивируют. Препарат является нативным интерфероном. Для получения концентрированного препарата нативный интерферон дополнительно очищают методом хроматографического разделения на колонках с сефадексом.

Генноинженерный лейкоцитарный интерферон получают в прокариотических системах (кишечной палочке). Биотехнология получения интерферона включает следующие этапы:

1. обработка лейкоцитарной массы индукторами интерферона;

2. выделение из обработанных клеток смеси иРНК;

3. получение суммарных комплементарных ДНК (кДНК) с помощью обратной транскриптазы;

4. встраивание к ДНК в плазмиду кишечной палочки и ее клонирование;

5. отбор клонов, содержащих гены интерферона;

6. включение в плазмиду сильного промотора для успешной транскрипции гена;

7. экспрессия гена интерферона, т.е. синтез соответствующего белка;

8. разрушение прокариотических клеток и очистка интерферона с помощью аффинной хроматографии с использованием моноклональных антител к интерферону.

3. Показания к применению и способ применения.

Интерфероны применяются для профилактики и лечения ряда вирусных инфекций. Их эффект определяется дозой препарата. Интерфероны широко применяются при гриппе и других острых респираторных заболеваниях. Препарат эффективен на ранних стадиях заболевания, применяется местно, например путем закапывания или введения с помощью ингалятора в верхние дыхательные пути. При конъюнктивитах интерферон применяют в виде глазных капель. Интерфероны оказывают терапевтическое действие при гепатите В, герпесе, а также при злокачественных новообразованиях. При этих заболеваниях назначают более высокие концентрации. Препарат применяется парентерально - внутривенно и внутримышечно. Более высокие дозы оказывают побочное действие (повышение температуры, головная боль, выпадение волос, ослабление зрения и т.д.). Интерферон может вызвать также лимфопению, задержку созревания макрофагов, у детей - тяжелые шоковые состояния, у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями - инфаркт миокарда. Очистка интерферона значительно снижает его токсичность и позволяет применять высокие концентрации.

4. Механизм противовирусного действия препарата.

Интерферон связывается с клеточными рецепторами, находящимися на плазматической мембране, что служит сигналом для дерепрессии соответствующих генов. В результате индуцируется синтез особой протеинкиназы PKs, которая присутствует в следовых количествах во всех клетках млекопитающих и активируется низкими концентрациями двунитчатой РНК, а в зараженных вирусами клетках - вирусными репликативными комплексами.

Протеинкиназа фосфорилирует а-субъединицу инициирующего фактора трансляции eIF-2, и фосфорилирование блокирует активность инициирующего фактора. В результате иРНК, связанная с инициирующим комплексом, не может связаться с большой рибосомальной субъединицей, и поэтому ее трансляция блокируется. Инициирующий фактор eIF-2 в одинаковой степени необходим для трансляции как клеточных, так и вирусных иРНК, однако преимущественно блокируется трансляция вирусных иРНК, связанных с вирусными двунитчатыми РНК-структурами, в результате локальной активации протеинкиназы.

В обработанных интерфероном клетках индуцируется синтез фермента - синтетазы, которая катализирует 2,5-олигоадениловую кислоту, переключающую действие клеточных нуклеаз на разрушение вирусных иРНК. Таким образом, вирусные иРНК подвергаются разрушению нуклеазами. Блокирование интерфероном стадии инициации трансляции и разрушение иРНК обусловливают его универсальный механизм действия при инфекциях, вызванных вирусами с разным генетическим материалом.

Иммуномодулирующее действие интерферона альфа связано со стимулированием активности макрофагов и NK (Natural killer) клеток, которые, в свою очередь, участвуют в иммунном ответе организма.