17 Иммунодиагностика (серодиагностика) инфекционных заболеваний. Принципы и диагностические критерии.

Серодиагностика – выявление антител в сыворотке (парных сыворотках) обследуемого. Относится к непрямым методам диагностики инфекционных заболеваний. (Выявление антигенов – прямой метод – экспресс-диагностика).

В основе любых иммунологических реакций – взаимодействие АГ и АТ.

Антиген - любое вещество, которое организм рассматривает как чужеродное или потенциально опасное и против которого организм обычно начинает вырабатывать собственные антитела (иммунный ответ).

Строение АГ – белковая молекула или простое в-во, соединенное с белками организма (гаптен).

Свойства АГ – антигенность, специфичность, иммуногенность

Иммуногенность – способность АГ вызывать иммунный ответ в макроорганизме.

Специфичность – способность АГ реагировать с определенными АТ или клоном лимфоцитов

АГ микроорганизмов:

Группоспецифические – есть у разных видов одного рода или семейства

Видоспецифические – есть у различных представителей одного вида

Типоспецифические – образуют серологические варианты – серовары и антигеновары внутри одного вида

Серовар – группа МО со сходной антигенной структурой (определяется серологическими методами)

Антитела – это крупные глобулярные белки плазмы крови, выделяющиеся плазматическими клетками иммунной системы и предназначенные для нейтрализации клеток патогенов (бактерий, грибов, многоклеточных паразитов) и вирусов, а также белковых ядов и некоторых других чужеродных веществ.

Моноклональные АТ – иммуноглобулины синтезируемые одним клоном клеток (из одной плазматической клетки-предшественницы) Связываются только с 1 АГ детерминантой на поверхности белка.

Поликлональные антитела — антитела, образующиеся в сыворотке крови в разных клонах B-лимфоцитов и связываются с различными антигенными детерминантами (эпитопами) молекулы-мишени (антигена).

Специфичность АТ определяется аминокислотной последовательностью вариабельных областей иммуноглобулинов.

Тут видимых проявлений нет! Но она специфична!

Аффинность иными словами – прочность, авидность – жадность (для запоминания).

Не специфична, но чувствительная и быстрая!

Чувствительность реакций – минимальное кол-во в-ва, которое может быть ей обнаружено.

Специфичность – способность НЕ давать ложноположительные результаты.

Серодиагностика – выявление антител в сыворотке (парных сыворотках) обследуемого.

КРИТЕРИИ СЕРОДИАГНОСТИКИ:

1) Диагностический титр – максимальное разведение сыв-ки пациента, в котором реакция еще положительна. Титр пациента сравнивается с диагностическим.

Достоинства – быстрый, легкий, количественный

Недостатки – может отражать постинфекционный или поствакцинный периоды

2) Нарастание титра АТ – повышение содержания АТ в сыв-ке пациента, что говрит о текущем заболевании. Исследуются парные сыв-ки.

Достоинства – говорит о текущем заболевании

Недостатки – долгое время исследования

3) Авидность иммуноглобулинов G (как-то мы про это не очень говорили, но оно есть)

Высокая авидность говорит о длительно текущем заболевании.

Задачи решаемые при помощи серодиагностики:

- Обнаружение IgM, IgG, IgA, авидности АТ

- Диагностика инфекционного заболевания

- Определение его периода

- Дифференцировка свежего от перенесенного заболевания

- Контроль эффективности лечения

Кратко о насущном

Развернутая РА – готовят серию разведений сыворотки больного (с АТ). К каждой пробирке добавляют диагностикум (взвесь убитых микробов – АГ). Инкубация. Положительная реакция – агглютинация. Отрицательная – равномерная муть.

Развернутая РНГА – аналогично. Эритроцитарный диагностикум – эритроциты с нагруженными на них АГ. «+» - зонтик, «-« - пуговка.

РСК – исследуемая сыв-ка (АТ) + известный АГ + комплемент (сыв-ка морских свинок)

Если в сыв-ке больного были АТ, тогда образуется комплекс АГ-АТ-комплемент.

Если после этого добавить эритроциты барана и гемолитическую сыв-ку (АТ против эритроцитов барана), то гемолиза не произойдет, ибо комплемент уже связан.

«+» - НЕТ гемолиза, «-« - есть гемолиз.

Непрямая РИФ – АГ бактерий (диагностикум) + сыв-ка больного (АТ) + люминесцирующая сыв-ка против Ig. Положительная реакция – зеленой свечение в люминесцентном микроскопе (сифилис).

ИФА – известный АГ фиксированный на носителе + сыв-ка больного с АТ + АТ против АТ больного, меченные ферментом + хромогенный субстрат.

Положительная реакция – изменение цвета.

Иммуноблотинг – по сути ИФА, но различные АГ нанесены в разных участках на одну бумажную полоску (диагностика ВИЧ)