Экзамен по микробиологии 2021

Блок 1

1. Аллергические пробы in vivo и in vitro, их сущность, применение.

Аллергические пробы – это биологические реакции, используемые для диагностики ряда заболеваний, основанные на повышенной чувствительности организма, вызванной аллергеном.

При многих инфекционных заболеваниях за счет активации клеточного иммунитета развивается повышенная чувствительность организма к возбудителям и продуктам их жизнедеятельности. В некоторых случаях инфекция может быть единственным фактором сенсибилизации, являясь причинно-значимым аллергеном и источником аллергического заболевания. В других случаях, при полисенсибилизации, инфекционные аллергены могут быть одним из многих этиологических факторов. Аллергические пробы помогают выявить наличие бактериальных, вирусных, протозойных инфекций, микозов и гельминтозов (нередко они бывают положительными у переболевших и привитых).

Все аллергические пробы подразделяют на две группы — пробы in vivo и in vitro. К первой группе относятся кожные пробы, осуществляемые непосредственно на пациенте. Аллергические пробы in vitro основаны на выявлении сенсибилизации вне организма больного. Их применяют тогда, когда по тем или иным причинам нельзя произвести кожные пробы, либо в тех случаях, когда кожные реакции дают неясные результаты.

Для проведения аллергических проб используют аллергены. Инфекционные аллергены представляют собой очищенные фильтраты бульонных культур, реже взвеси убитых м/о или АГ, выделенные из них.

Кожные пробы: Прик-тест; Внутрикожная; Скарификационная и Аппликационная пробы.

Основным методом кожного тестирования при специфической аллергодиагностике является проба уколом (prick – укол). Этот метод аллергодиагностики принят повсеместно.

Внутрикожные пробы более чувствительны, чем скарификационные, но и менее специфичны. Применяют их для выявления сенсибилизации к аллергенам бактериального и грибкового происхождения. Техника выполнения: в среднюю треть передней поверхности предплечья специальной тонкой иглой вводят 0,1 мл аллергена.

Скарификационные тесты отличаются довольно высокой специфичностью, но всё-таки они чаще могут давать ложноположительные реакции. Методика постановки: накожно, путем втирания аллергена в скарифицированные (поврежденные) участки кожи.

Методика постановки аппликационной пробы: на кожу предплечья наносят каплю аллергена или накладывают кусочек марли, смоченный раствором аллергена, фиксируют ее лейкопластырем.

Во всех тестах доп. ставят пробы с тест-контрольной жидкостью – отрицательный контроль, например, изотонический р-р хлорида натрия; и гистамином в качестве положительного контроля. Результаты учитывают по величине папулы, наличию отека и зуда.

Кожные пробы на наличие ГЗТ широко применяют для выявления инфицированности людей микобактериями туберкулеза (проба Манту), возбудителями бруцеллеза (проба Бюрне), лепры (реакция Митсуды), туляремии, сапа, актиномикоза, дерматомикозов, токсоплазмоза, некоторых гельминтозов и др.

Пробы in vitro – анализ крови на аллергию.

Эти методы исследования безопасны для больного, достаточно чувствительны, позволяют количественно оценить уровень реактивности организма. В настоящее время разработаны тесты для определения сенсибилизации, основанные на реакциях Т- и B-лимфоцитов, тканевых базофилов, выявлении общих специфических IgE в сыворотке крови и др.

Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ). Сенсибилизированные к определенному АГ лимфоциты резко снижают скорость подвижности в среде, в которую вносят этот АГ. Реакция осуществляется при непосредственном взаимодействии АГ-специфических рецепторов с АГ, а также через воздействие фактора, ингибирующего миграцию клеток, выделяющегося при контакте со специфическим АГ. Показатель торможения миграции выра­жают в процентах по сравнению с контролем (сравнивается площадь миграции). Уменьшение площади миграции свиде­тельствует о наличии фактора, ингибирующего ее.

Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТ). В основе этой реакции лежит способность нормальных лимфоцитов периферической крови вступать в митоз и превращаться в бластные формы (юные) при культивировании их in vitro под действием специфических факторов — аллергенов. К лимфоцитам, выделенным из крови пациента, добавляются радиоактивная метка Н³-тимидин.

Реакция специфического розеткообразования. Розетки — характерные образования, возникающие in vitro в результате прилипания эритроцитов к поверхности иммунокомпетентных клеток. Тимусзависимые Т-лимфоциты и др. иммунокомпетентные клетки имеют рецепторы для эритроцитов барана (CD2 АГ), которые выступают, таким образом, маркером для их распознавания. Этот феномен воспроизводится также и в том случае, если используют эритроциты, на которых фиксированы соответствующие аллергены.

Реакция дегрануляции тканевых базофилов. Методика основана на том, что под действием аллергена происходит дегрануляция тканевых базофилов крысы, предварительно сенсибилизированных цитофильными AT из сыворотки крови больного.

Базофильный тест Шелли. Известно, что базофильные гранулоциты человека или кролика дегранулируются в присутствии сыворотки больного и аллергена, к которому чувствителен данный пациент. Базофильные лейкоциты крови подобно тканевым тучным клеткам принимают участие в освобождении гистамина, гепарина, медленно реагирующей субстанций и серотонина. Считают, что реакция дегрануляции базофилов крови свидетельствует о наличии реакции аллерген — АТ.

Определение АТ класса IgE in vitro. Лабораторная диагностика заболеваний, в основе которых лежит ГНТ, основана на определении аллергенспецифических IgE. При использовании радиоактивной метки метод носит название радиоаллергосорбентного теста (PACT), но чаще в качестве метки используют фермент или флюоресцирующее вещество (ФАСТ). Время анализа — 6 — 7 ч. Принцип метода: фиксированный на твердой основе известный аллерген инкубируют с сывороткой крови больного; находящиеся в сыворотке специфические IgE связываются с аллергеном и, таким образом, остаются фиксированными на основе и могут вступать в специфическое взаимодействие с добавляемыми мечеными анти-IgE.