21. Учение о группах крови. Природа и свойства агглютиногенов и агглютининов. Обозначение групп крови.

Группы крови — передающиеся по наследству признаки крови, определяемые индивидуальным для каждого человека набором специфических веществ, получивших название групповых антигенов, или изоантигенов. На основании этих признаков кровь всех людей подразделяют на группы вне зависимости от расовой принадлежности, возраста и пола.

Учение о группах крови возникло в связи с проблемой переливания крови. В 1901 г. К. Ландштейнер обнаружил в зритроцитах людей агглютиногены А и В. В плазме крови находятся агглютинины a и b(гамма-глобулины). Согласно классификации К.Ландштейнера и Я.Янского в зависимости от наличия или отсутствия в крови конкретного человека агглютиногенов и агглютининов различают 4 группы крови. Эта система получила название АВО, Группы крови в ней обозначаются цифрами и теми агглютиногенами, которые содержатся в эритроцитах данной группы.

Агглютиногены — антигены, вызывающие в организме образование агглютининов (изоантител).

Агглютиногены содержатся в клетках (например, в эритроцитах человека) и обозначаются прописными латинскими буквами А и В.

Агглютинины — антитела, вызывающие агглютинацию, то есть наступающее под действием иммунной сыворотки склеивание антигенов (клеток, микробов), а также растворимых антигенов, адсорбированных на эритроцитах или частицах инертного носителя, вследствие чего образуются комочки, выпадающие в осадок. Агглютинины принадлежат к иммуноглобулинам классов M и G.

Обозначение групп крови I группа (О) – в эритроцитах агглютиногенов нет, в плазме содержатся агглютинины a и b ;

II группа (А) – в эритроцитах содержится агглютиноген А, в плазме – агглютинин b ;

III группа (В) – в эритроцитах находится агглютиноген В, в плазме – агглютинин a ;

IV группа (АВ) – в эритроцитах обнаруживаются агглютиногены А и В, в плазме агглютининов нет.

22. Методы определения групп крови и резус-фактора. Профилактика возможных ошибок.

Определение групп крови с помощью цоликлонов. Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам М. Цоликлоны изготовляются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител.

Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 5 — 10 мл. Цоликлон анти-А — желтого цвета, анти-В — синего, анти-АВ — бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия.

Техника определения групп крови. Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта, в том числе из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на пластине или планшете, определение производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 — 25С*.

1. Наносят на пластину или планшет индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.

2. Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 — 0,03 мл).

3. Смешивают кровь с реагентом, покачивая планшет.

4. Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3 — 5 секунд, но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

5. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агтлютипаты видны в виде мелких красных агретатов, быстро смешивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

6. Интерпретация результатов по табл.

! при + резултате со всеми цоликлонами нужно исключить спонтаную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешивают каплю крови с каплей физ р-ра. Кровь относится к 4 гр только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физ р-ре. Группа исследуемой крови Стандартные эритроциты

Анти-А Анти-В Анти-АВ

0(I) _ _ -

А(II) + - +

В(III) - + +

АВ(IV) + + +

Определение групп крови по стандартным эритроцитам. В лунки планшета наносят большие капли плазмы исследуемой крови. Рядом с каждой каплей плазмы последовательно наносят по небольшой капле стандартных эритроцитов групп 0(1), А(II), В(III). Капли перемешивают покачиванием планшета. Через 5 минут к каждой капле смеси добавляют по 1 капле физиологического раствора и учитывают результат. Группа исследуемой крови Стандартные эритроциты

0(I) А(II) В (III)

0(I) - + +

А(II) - - +

В(III) - + -

AB(IV)- - -

Определение групп крови перекрёстным способом – одновременное распознавание агглютиногенов в эритроцитах исследуемой крови с помощью цоликлонов и выявление агглютининов в сыворотке с помощью стандартных эритроцитов.

Профилактика ошибок: 1)ошибки возникают из-за слабой агглютинабельности эритроцитов 2)из-за неспецифической агглютинации (агглютинация с оликлонами всех групп). - Она может быть при исследовании эритроцитов, которые сенсебилизированны тепловыми или холодовыми антителами, при этом может возникнуть аутоагглютинация (сворачивание крови в пробирке после взятия крови). В таких случаях перед определением гр крови поводят элюцию аутоантител – эритроциты отмывают теплым изотоническим физ раствором (37С – при аличии холодовых аутоантител, 56С- тепловых аутоантител. - При инфекционных заболеваниях, сопровождающихся септицемией – феномен полиагглютинабельности. Протеолитические ферменты некоторых МО способны активировать Т-агглютиноген эритроцитов и они приобретают способность агглютинироваться анти-Т-агглютининами, которые содержаться в сыворотке крови (панагглютинация). - При инфицировании и неправильном хранении цоликлонов 3) Температурные условия – в сыворотке содержится небольшое кол-во холодовых агглютининов, которые при низкой t вызывают неспецифич агглютинацию эритроцитов. Высокая tвызывает снижение агглютинационных свойств. Определение гр крови проводят при температуре 15-25С. 4) Соотншение тестовых реактивов и исследуемой крови. Стандартное соотношение эритроцитов и цоликлонов 1:10. Если много эритроцитов – агглютинация может быть незамечена, если мало – агглютиация медленно появляется. 5) Длительность наблюдения – агглютинация проявляется в течении 10-30 сек, но наблюдение нужно проводить в течении 5 минут, чтобы выявить слабый агглютиноген А2, обладающий замедленной агглютинацией. 6)Псевдоагглютинация – образование монетных столбиков эритроцитов при исследовании свежей крови, особенно если пластинку долго оставляют лежащей а столе без покаливания.После добавления капли изотонического физ р-ра и покачивания они обычно исчезают. Отличить их от истинной агглютинации – микроскопирование. 7)Агглютинация, маскированная гемолизом – сыворотки некоторых людей содержат активные гемолизины анти-А (редко анти-В), они могут лизировать стандартные эритроциты, что моно спутать с явлением агглютинации. Это предотвращают путем разведения исследуемой сыворотки в изотоническом физ р-ре в течении 30 мин при t 56С 8)Агглютинация из-за наличия в сыворотке АТ другой групповой системы. Обнаруживаются при перекрестном методе определения, когда в крови содержаться полные АТ, относящиес другой групповой системе, но способные реагировать с соответствующими эритроцитами на проскости при комнатной t. (анти-Н). 9)Выпадение фибрина наблюдается при исследовании свежей цельной крови, связанное с избытком хлорида калия в тестовых реактивах. Забор крови осуществляют заново. 10)Особенности крови у новорожденных. У них агглютиногены А и В сформированы недостаточно.Используют реактивы с высоким титром изогемагглютининов. Пробу с сывороткой не проводят, т.к аглютинины альфа и бетта отсутствуют в течении 1 года жизни. 11)Кровянные химеры – одновременное наличие в крови 2х популяций эритроцитов, отличающихся по гр крови и другим антигенам.

Трансфузионные химеры	Истинные химеры
Возникают из-за многократного переливания эритроцитов универсальной гр крови 1(0) реципиентам с другой группой крови Носят трансфузионный характер, после прекращения трансфузий быстро исчезают	У гетерозиготных близнецов, у которых в период внутриутробного развития из-за межплацентарных анастомозов возможен обмен родоначальными кроветворными клетками. Может наблюдаться в течении всей жизни. После пересадки аллогенного ККМ