2. Правила работы с вируссодержащим материалом.

1. Необходимо быть очень внимательным, собранным и аккуратным;

2. Входить в помещение лаборатории и выходить из него только в халате, переодеваясь в гардеробе;

3. Работать только в халате с застегнутыми манжетами, шапочке и марлевой маске;

4. В лаборатории соблюдать чистоту и порядок. Нельзя курить и есть;

5. Материалы и инструменты для работы дежурный получает у лаборанта кафедры и раздает студентам;

6. Пользоваться только стерильными инструментами и посудой;

7. Открывать и закрывать сосуды (пробирки, флаконы, чашки и т.п.) у пламени горелки;

8. Не брать пипеток в рот;

9. Отработанные инструменты, включая шприцы, складывать в стерилизатор для обезвреживания и кипячения;

10. Отработанные пипетки в сосуд с дезраствором;

11. Твердые и жидкие отходы (вата, бумага и т.д.) собирать в специальные контейнеры для последующей стерилизации;

12. Запрещается выливать или сбрасывать отходы в унитазы и раковины;

13. Если студент случайно разольет вируссодержащий материал, обязан немедленно сообщить об этом преподавателю и вместе с ним обеззаразить рабочее место;

14. В конце занятия привести в порядок свое рабочее место.

3. Учет, хранение и этикетирование вирусного сырья в лаборатории

Вируссодержащие материалы в пробирках и других сосудах должны быть снабжены этикеткой, где указаны вирус, штамм, дата получения, номер пассажа, объем и другие сведения. Данные этикеток должны полностью соответствовать записям в журнале штаммов лаборатории. Штаммы вирусов хранят в холодильнике под замком с пломбой или печатью. Вирусы выделенных штаммов, как и стандартных, необходимых для сравнения и серологических исследований, следует хранить в условиях, обеспечивающих их максимально длительную жизнеспособность.

Консервация вирусов:

1. При хранении вирусного материала (кусочки органов или тканей) часто используют глицерин (50 % раствор на физрастворе), обладающий бактериостатическим действием и в то же время защищает вирусы. В этом случае вирус можно хранить при 4 °С несколько месяцев;

2. Вирусы хранят в холодильниках при -20, -30, -70 °С. При этой температуре некоторые вирусы без добавки защитных веществ сравнительно быстро теряют инфекционность. Хорошее защитное действие при замораживании и хранении вирусов оказывает добавка одного из следующих компонентов: инактивированной сыворотки крови, обезжиренного молока (от 10 до 30 %), желатина (0,5-1,5%), ДМСО (10 %) и др. При быстром замораживании вируса до -196 °С (жидкий азот) с последующим хранением при этой температуре титр вируса в течение нескольких месяцев не снижается. Вирусы, чувствительные к низким значениям рН, следует замораживать в жидкостях, не содержащих однозамещенных фосфатов (NaН₂PО₄ или КН₂РО₄), обладают кислой реакцией и имеют более низкую точку замерзания, чем двузамещенные фосфаты (Na₂HP0₄ или К₂НРО₄) с щелочной реакцией. Скорость оттаивания вируса существенно не влияет на его активность. Размораживать вирусы можно как при комнатной температуре, так и в водяной бане при температуре 37°С. Необходимо хранить маленькими порциями, достаточными для одноразового титрования или использования.

3. Лиофилизация, т.е. высушивание в замороженном состоянии в условиях вакуума хороший способ консервирования вирусов. На стойкость лиофилизированного вируса влияет не только выбор соответствующего наполнителя, но и состав газа в ампуле (уже 0,5 % кислорода вызывают быструю гибель вируса, в то время как влажность в границах 2-3 % существенно не влияет) и температура хранения лиофилизата не выше 4 °С. Лиофилизированные вирусы могут храниться несколько лет.

Документирование проводимых исследований

В ходе проводимых исследований необходимо обязательно фиксировать промежуточные и конечный результаты.

Основным документом является прошнурованный, пронумерованный и опечатанный рабочий лабораторный журнал. Записи производят аккуратно, четко в заранее определенном неизменном порядке.

Вирусологическая лаборатория должна иметь следующую документацию:

1. Журнал вирусологических исследований (экспертиз, сельхозучета, формы № 13-вет);

2. Журнал учета зараженных животных;

3. Журнал учета выделенных вирусов и их уничтожения;

4. Журнал учета движения производственных или музейных штаммов и другие книги учета согласно утвержденной инструкции.