- •Вирусология. Этапы развития и связь с другими науками.
- •2. Природа и происхождение вирусов, уникальные черты, отличающие вирусы от других инфекционных агентов.
- •3.Место и роль вирусов в биосфере, сходство с другими формами жизни, роль в патологии животных и человека.
- •5. Химический состав вирионов вирусов.
- •6. Структура вирионов (нуклеоид, нуклеокапсид, капсид, капсомеры, суперкапсид, Моболочка). Типы симметрии вирусных частиц, простые и сложные вирионы.
- •7. Нуклеиновые кислоты вирусов, их строение и функции, отличие от клеточных. Типы вирусных геномов.
- •8. Вирусные белки, их виды, свойства и функции, отличие от клеточных.
- •9. Основные принципы систематики и номенклатуры вирусов.
- •10. Краткая характеристика семейств безоболочечных днк-содержащих вирусов.
- •11.Краткая характеристика семейств оболочечных днк-содержащих вирусов.
- •12.Краткая характеристика семейств безоболочечных рнк-содержащих вирусов.
- •13.Краткая характеристика семейств оболочечных рнк-содержащих вирусов с позитивным геномом.
- •14.Краткая характеристика семейств оболочечных рнк-содержащих вирусов с негативным геномом.
- •15.Стадии репродукции вирусов: адсорбция, проникновение, депротеинизация.
- •1. Начало инфекции (эклипс-фаза, теневая фаза)
- •16.Стадии репродукции вирусов: экспрессия вирусного генома (транскрипция, трансляция вирусных белков, репликация генома).
- •2. Экспрессия вирусного генома
- •17.Стадии репродукции вирусов: сборка вирионов и выход их из клетки.
- •18.Культивирование вирусов в организме естественно восприимчивых и лабораторных животных.
- •19.Культивирование вирусов на куриных эмбрионах.
- •20.Культивирование вирусов на культурах клеток и тканей, преимущества клеточных культур перед лабораторными животными и куриными эмбрионами, значение в вирусологии.
- •21.Виды культур клеток: органные, первично-трипсинизированные, диплоидные и перевиваемые; их свойства, особенности, области применения.
- •22.Действие на вирусы физических и химических факторов (температура, ультрафиолетовое облучение, кислоты, щелочи, жирорастворители, антибиотики). Методы уничтожения и консервации вирусов.
- •23.Пути и формы циркуляции вирусов в природе, сохранение популяции вирусов в межэпизоотический период.
- •24.Влияние антропогенных факторов на циркуляцию вирусов (загрязнение окружающей среды, использование вакцин, химиопрепаратов, пестицидов, концентрация животных и др.).
- •25.Генотип и фенотип вирусов. Наследственность, изменчивость, эволюция вирусов, генофонд вирусной популяции.
- •26.Генетические и негенетические взаимодействия вирусов.
- •27.Спонтанные и индуцированные мутации вирусов. Методы селекции и клонирования вирусов, отбор мутантов и их использование в профилактике вирусных болезней.
- •28. Классификация вирусных инфекций на уровне клетки. Цитопатология зараженной клетки.
- •29. Тропизм вирусов, проникновение в организм и распределение в нем. Классификация вирусных инфекций на уровне организма.
- •30. Клеточные и гуморальные факторы противовирусного иммунитета, их формирование, взаимодействие, значение для организма.
- •31. Иммунный ответ хозяина на вирусную инфекцию, особенности противовирусного иммунитета. Типы вирусных антигенов.
- •32. Иммунопатология вирусных инфекций, способы "ускользания" вирусов от иммунной защиты организма.
- •33.Интерферон: виды, свойства, индукторы. Применение интерферона и его индукторов в лечении вирусных заболеваний.
- •34.Специфическая профилактика вирусных болезней животных. Типы вирусных вакцин, их достоинства, недостатки, контроль вакцинных препаратов.
- •35.Химиотерапия вирусных болезней животных. Основные группы химиотерапевтических веществ.
- •36.Общая схема лабораторной диагностики вирусных инфекций: экспресс-методы, выделение вируса из патологического материала, идентификация вируса и доказательство его этиологической роли.
- •1. Устройство вирусологической лаборатории.
- •2. Правила работы с вируссодержащим материалом.
- •3. Учет, хранение и этикетирование вирусного сырья в лаборатории
- •4. Виды патологического материала и общие принципы его отбора.
- •5. Упаковка, транспортировка, хранение и консервирование вируссодержащего материала.
- •6. Подготовка вируссодержащего материала для исследования.
- •7.Вирусоскопия как метод диагностики вирусных инфекций. Световая, электронная, иммуноэлектронная микроскопия.
- •8. Устройство и принцип работы электронного микроскопа, приготовление препаратов для электронной микроскопии.
- •9. Тельца-включения при вирусных заболеваниях: морфология, состав, расположение в клетке, диагностическое значение.
- •10.Цели использования в вирусологии лабораторных животных, их виды, требования к ним, животные-гнотобиоты, спф-животные. Латентные инфекции лабораторных животных.
- •11.Методы экспериментального заражения лабораторных животных, признаки размножения вируса в их организме, "слепые пассажи".
- •12. Порядок и основные принципы вскрытия лабораторных животных, отбор патматериала.
- •13. Цели использования в вирусологии кэ, их строение и требования, предъявляемые к ним.
- •14.Методы экспериментального заражения куриных эмбрионов.
- •15.Культивирование зараженных кэ и признаки размножения вирусов в них.
- •16.Порядок вскрытия куриных эмбрионов и отбор вируссодержащего материала.
- •17. Способы и техника культивирования эукариотических клеток вне организма (монослойный, роллерный, суспензионный, на микроносителях), преимущества и недостатки каждого метода.
- •18. Питательные среды и растворы для культивирования эукариотических клеток.
- •19.Хранение, консервирование и транспортировка кк. Проблема контаминации клеточных культур и ее решение.
- •20. Культивирование вирусов в кк: подбор культуры, заражение, культивирование зараженных культур.
- •21. Методы индикации вирусов в культуре клеток.
- •22. Получение первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •23. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса в инфекционных единицах локальных повреждений.
- •24. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса в инфекционных единицах 50%-ного действия на чувствительные объекты.
- •25. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса по гемагглютинирующей активно-
- •26. Ртга (задержки): принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •27. Рнга (пассивной): принцип реакции, компоненты, контро-ли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •28. Рн: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •29. Рдп: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •30. Метод флюорохромирования, принцип метода, приготовление препаратов, диагностическая ценность. Люминесцентная микроскопия, устройство и принцип работы люминесцентного микроскопа.
- •31. Метод флюоресцирующих антител (мфа): принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •32. Иммунопероксидазная (гистохимическая) реакция: принцип, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •33. Твердофазный иммуноферментный анализ: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •34. Реакция связывания комплемента: принцип реакции, компоненты, контроли, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •35. Метод днк-зондов: принцип метода, получение днк-зондов, постановка реакции, цели применения, достоинства и недостатки метода.
- •36. Полимеразная цепная реакция (пцр): принцип метода, компоненты, постановка реакции, цели применения, достоинства и недостатки метода.
- •Вирус бешенства.
- •2. Вирус ящура.
- •3. Вирус оспы.
- •4. Вирус болезни Ауески.
- •5. Вирусы гриппа.
- •6. Возбудители губкообразной энцефалопатии.
- •7. Вирус чумы жвачных.
- •8. Вирус ирт крс. Инфекционного ринотрахеита
- •9. Вирус парагриппа-3 крс.
- •10.Респираторно-синцитиальный вирус крс.
- •11.Возбудитель вирусной диареи крс.
- •12.Возбудитель аденовирусной инфекции крс.
- •13.Вирус лейкоза крс.
- •14.Вирус катаральной лихорадки овец.
- •15.Вирус контагиозной эктимы овец.
- •16.Вирус ачс. Африканской чумы свиней
- •17. Вирус кчс. Вирус классической чумы свиней
- •18. Вирус болезни Тешена.
- •19. Вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней.
- •20.Вирус респираторно-репродуктивного синдрома свиней.
- •21.Вирус ачл. Африканской чумы лошадей
- •22. Вирус инан. Инфекционной анемии лошадей
- •23. Вирус ньюкаслской болезни.
- •24. Вирус инфекционного ларинготрахеита птиц.
- •25.Вирус болезни Марека.
- •26.Вирус инфекционного бронхита кур.
- •27.Вирус инфекционного бурсита кур.
- •28.Аденовирусная инфекция птиц.
- •29.Вирусы лейкоза птиц.
- •30.Вирус чумы плотоядных.
- •31.Вирус алеутской болезни норок.
- •32.Вирус инфекционного гепатита собак. Болезнь рубарта
- •33.Вирус панлейкопении кошек.
- •34.Вирус инфекционного перитонита кошек.
- •35.Вирус миксоматоза кроликов.
- •36.Вирус геморрагической болезни кроликов.
1. Устройство вирусологической лаборатории.
Размещать лабораторию желательно в 2-хэтажном здании или в изолированном отсеке. На 1 этаже располагаются гардероб с индивидуальными шкафами, санпропускник, санузлы, склад лабораторного оборудования, материалов и посуды, приемник канализационных вод с установкой для их обезвреживания, виварии для здоровых и подопытных животных с вытяжными шкафами, автоклавная и моечное помещение. 2 этаж отводят под лабораторные помещения: для культивирования культур клеток, для серологических и вирусологических исследований, для аппаратуры, под термостатную, комнаты для заведующего лабораторией и сотрудников. Здание, состоящее не менее чем из 5-6 комнат. Под лабораторию отводят светлое помещение. Комнаты, где работают с вирусным материалом, должны быть хорошо освещены и состоять из двух отделений (предбоксника не менее 4 м2 и бокса не менее 9 м2), разделенных стеклянной перегородкой с дверью. В боксах: только столы, стулья и принадлежности для работы. Поверхность столов покрывают стеклом, пластиком или нержавеющей сталью, а над рабочим местом устанавливают бактерицидные лампы, у входа в бокс резиновый дезковрик, пропитанный дезраствором. В предбокснике стерильные халаты, шапочки, косынки, маски и тапочки, оборудование, соответствующее назначению бокса (термостат, микроскоп и инвертированный микроскоп, холодильник, водяную баню, центрифугу и пр.).
Площадь лаборатории делят на «заразную» зону осуществляются манипуляции с патогенными биологическими агентами и их хранение, и «чистую» зону не проводятся манипуляции с патогенными биологическими объектами.
В «чистой» зоне располагаются: гардероб для верхней одежды; помещения для проведения подготовительных работ (препараторская, моечная, приготовление и розлив питательных сред и др.); стерилизационная; помещение с холодильной камерой или холодильниками для хранения питательных сред и диагностических препаратов; комната отдыха и приема пищи; комната для работы с документацией и литературой; кабинет заведующего; комната для надевания рабочей одежды; подсобные помещения; туалет.
В «заразной» зоне располагаются: помещение для приема и регистрации материала; боксы; комнаты для проведения бактериологических исследований; комнаты для проведения микологических исследований; комнаты для проведения серологических исследований; комната для люминесцентной микроскопии; комната для проведения зооэнтомологических работ; комната для гельминтологических исследований; термостатная комната; автоклавная для обеззараживания.
Пол всех лабораторных помещений покрывают легко моющимся материалом
пластиком или линолеумом, а стены покрывают кафельной плиткой или окрашивают в светлые тона масляной краской. Окна и двери помещений «заразной» зоны лаборатории должны быть герметичными. На окна цокольного и первого этажей следует устанавливать металлические решетки, не нарушающие правил пожарной безопасности.
Основное рабочее помещение оборудуют лабораторными столами, шкафами и полками для хранения аппаратуры, посуды и реактивов. Лабораторная мебель в
«заразной» зоне должна иметь покрытие, устойчивое к действию моющих и дезинфицирующих средств. Поверхность столов не должна иметь швов и трещин.
Большое значение имеют боксы биологической безопасности (БББ), обеспечивающие защиту персонала, материалов и окружающей среды лаборатории. В них проводят всю лабораторную работу, связанную с посевом микроорганизмов и изучением их свойств, а также работу с животными (заражение, вскрытие), содержание инфицированных животных, центрифугирование патогенных биологических агентов, сушку, дезинтеграцию, другие операции с вероятным образованием аэрозоля, заражение культуры клеток и куриных эмбрионов, приготовление суспензий.
В БББ не должно быть не одного лишнего предмета. Столы в БББ оборудуют металлическими нержавеющими крышками для легкости стерилизации, а также газовыми горелками и обеспечивают подводку электроэнергии.
Вход в БББ устраивают через шлюз с раздвижной дверью предбоксник, это исключает резкое перемещение воздуха.
В зависимости от степени биологической опасности различается три типа боксов:
БББ I класса предназначены для проведения стандартных микробиологических исследований с микроорганизмами низкого и среднего классов опасности (оборудованы системой отрицательного давления воздуха преобладание притока над вытяжкой и системой вентиляции);
БББ II класса предназначены для выполнения микробиологических процедур, требующих 2-го или 3-го уровня биобезопасности (оборудованы вертикальной системой потока воздуха со встроенными высокоэффективными сухими воздушными фильтрами, обеспечивающими защиту от внешней контаминации материалов, с которыми осуществляются манипуляции в БББ);
БББ III предназначены для проведения манипуляций, требующих 3-го и 4го уровня биобезопасности (полностью изолированные газонепроницаемые комнаты, обеспечивающие максимально возможный уровень защиты персонала и окружающей среды, необходимо использование средств индивидуальной защиты персонала).
Лабораторию обеспечивают холодной и горячей водой и вентиляцией с подачей стерильного воздуха. Для регистрации поступающего патологического материала есть приемная, где несколько столов, обитых оцинкованной жестью, и емкости с дезрастворами (3 %-ным хлорамина, или 5 %-ным фенола). В комнате для предварительной обработки материала вскрывают трупы и отбирают материал для дальнейшего исследования. Выполняют это на специальном столе. Должны быть сосуды с дезрастворами, стеклянный шкаф для инструментария и стерильная посуда для сбора материала, а также шкаф для спецодежды. В боксе для получения культур клеток работать с вируссодержащим материалом запрещается. В автоклавной стерилизуют посуду, питательные среды, аппаратуру, приборы и обезвреживают инфекционный материал. Необходимо иметь 2 автоклава для чистых и для инфицированных материалов; бак для сбора инфицированного материала, сушильные шкафы, дистилляторы и шкафы для стерильной посуды. Моечная для мытья посуды, аппаратуры и приборов. Посуду, пипетки и инструменты, загрязненные инфицированным материалом, моют после обезвреживания. Виварий имеет комнаты для здоровых и экспериментальных животных, для мытья и дезинфекции клеток, для инвентаря и спецодежды, для приготовления кормов, кладовую, фуражную, трупосжигательную печь и др. Лабораторные животные содержатся в клетках. На каждой клетке вывешивают паспорт, где отмечают дату поступления в виварий, массу. В паспорте на клетках с подопытными животными дополнительно отмечают дату заражения и вид вируссодержащего материала, номер экспертизы и число зараженных животных. Должен быть настольный бокс или лучше бокс с ламинарной подачей воздуха.
Требования: 1) обеспечить безопасность сотрудников; 2) предупредить контаминацию исследуемого материала микрофлорой; 3) предупредить вынос инфекции за пределы лаборатории.
Основные правила работы в лаборатории:
Вход в помещения посторонних лиц, и сотрудников без халата и сменной обуви запрещен;
Запрещено выходить за пределы лаборатории в халатах и спецобуви или надевать верхнюю одежду на халат, курить, принимать пищу в производственных помещениях и хранить в них продукты питания. В боксе работают в стерильном халате, маске, шапочке, при необходимости надевают резиновые перчатки и очки. Обязательно меняют обувь;
Весь материал, поступающий в лабораторию на исследование, должен рассматриваться как инфицированный. Рабочее место на столе покрывают слоем марли, увлажненной 5 % раствором хлорамина. Инструменты, бывшие в употреблении, обеззараживают, погружая в 5 % раствор хлорамина, фенола, лизола или серной кислоты;
По окончании работы рабочее место приводят в порядок и тщательно дезинфицируют. Патматериал ставят на хранение в холодильник и опечатывают;
Очень важное значение имеет тщательная и прочная маркировка посуды, содержащей инфекционный материал.