35.Химиотерапия вирусных болезней животных. Основные группы химиотерапевтических веществ.

Трудность противовирусной химиотерапии заключается в создании препаратов, избирательно подавляющих репродукцию вируса и не затрагивающих процессы жизнедеятельности клеток и всего организма в целом.

Поиск антивирусных препаратов идет по двум направлениям: направленный поиск и скрининг. В первом случае предпринима­ются попытки использовать известные свойства химических со­единений для целенаправленного воздействия на тот или иной этап репродукции вируса. Второй путь опирается на скрининг (отбор, просеивание), предполагая вылавливание активных препаратов среди широкого спектра химических соединений различного класса.

Выделяют три основные группы препаратов, подавля­ющих начальные (адсорбция, проникновение и депротеинизация), средние (синтез компонентов) и заключительные (сборка и выход) стадии взаимодействия вирусов с клетками.

Индукторами выработки ин­терферона в организме являются многие вещества: вакцины, иммуномодуляторы, лекарственные препараты. Силь­ной интерфероногенной активностью обладают бактерии, препараты нуклеиновых полимеров, низкомолекулярные полифенолы и низкомолекулярные ароматические уг­леводороды.

При применении химиотерапии для лечения вирусных болезней необходимо помнить о возможности появления резистентных штаммов.

36.Общая схема лабораторной диагностики вирусных инфекций: экспресс-методы, выделение вируса из патологического материала, идентификация вируса и доказательство его этиологической роли.

Диагностика играет важную роль в системе мероприятий по борьбе с болезнями животных вирусной этиологии. Основным звеном в постановке диагноза являются результаты лабораторного исследования, которые оформляют в виде экспертизы официального документа, выдаваемого ветеринарными лабораториями.

Для постановки диагноза требуется сбор, изучение, анализ и сопоставление целого комплекса различных данных.

Постановка диагноза на вирусные инфекции состоит из двух этапов:

1. Предварительный диагноз сначала используют данные, полученные непосредственно в хозяйстве – эпизоотологические данные (эпизоотическая ситуация в хозяйстве, вид и возраст животных, широта охвата болезнью, скорость распространения и территориальное распространение болезни, летальность (%), сезонность, вакцинопрофилактика и др.), клинические признаки, патологоанатомические изменения.

2. Окончательный диагноз (лабораторный) производится в ветеринарной лаборатории. Зависит от правильности взятия материала, его транспортировки, консервации, качества приготовления и техники исследования. Наиболее важна лабораторная диагностика, т.к. многие вирусные болезни протекают схоже. Материал для исследований нужно брать как можно быстрее, исходя из патогенеза предполагаемого заболевания.

Индикация вируса в патматериале

Эксперсс-методы:

1. обнаружение вирионов (электронная и световая микроскопия);

2. обнаружение вирусных антигенов (РИФ, ИФА, РСК, РДП, РНГА);

3. обнаружение телец-включений (световая и люминесцентная микроскопия);

4. обнаружение вирусных нуклеиновых кислот (ПЦР, ДНК-зонды);

5. обнаружение гемагглютининов в РГА;

6. обнаружение инфекционной активности вируса (биопроба на тест-объектах).

Выделение вируса. При отрицательном результате индикации проводят изоляцию (выделение) вируса методом биологической пробы. С этой целью суспензией патологического материала, хранящегося в замороженном состоянии, заражают лабораторную живую тест-систему, чувствительную к предполагаемому вирусу (культуру клеток, куриные эмбрионы, лабораторных животных).

Выделение вируса из патматериала проводят на чувствительных тест-системах и очень редко на естественно-восприимчивых животных.

Выделение вирусов на естественно-восприимчивых животных проводится редко и только для воспроизведения типичных клинических признаков, характеризующих данную болезнь (ящур, чума КРС и свиней, оспа МРС и кур, ИНАН). Подозрительный на наличие вируса материал вводят с учетом тропизма естественно-восприимчивому животному, за которым ведут наблюдение. В период максимального развития болезни берут патматериал.

Выделение вирусов на лабораторных животных. Чаще всего используют белых мышей, белых крыс, золотистых хомячков, морских свинок и кроликов. Методы заражения различны, но чаще применяют в/м, п/к, в/бр, в/в, и/н и и/ц. Выбор метода заражения зависит от тропизма исследуемого вируса и вида животного. После заражения за животными устанавливают контроль. Материал для вирусологических исследований от таких животных берут как можно быстрее после появления четких специфических клинических признаков или после гибели. Признаками размножения вирусов в организме лабораторных животных служат клинические симптомы, гибель и патологоанатомические изменения. Для установления патологоанатомических изменений и одновременно получения вируссодержащего материала для идентификации вируса зараженных животных вскрывают. Использованных животных обезвреживают автоклавированием или сжиганием в специально печи.

Выделение вирусов на развивающихся куриных эмбрионах. Куриные эмбрионы чувствительны к большинству вирусов птиц и к некоторым вирусам млекопитающих. Куриные эмбрионы используют 5-12 дневного возраста. Вирусы в них могут репродуцироваться в клетках самого зародыша, на ХАО и амниотической, в стенках желточного мешка и т.д. Метод заражения куриного эмбриона выбирают в зависимости от вида вируса и места введения материала. Признаки размножения вируса в куриных эмбрионах: гибель (устанавливают путем овоскопии), патологические изменения в зародыше или во внезародышевых оболочках (устанавливают на вскрытии) и наличие гемагглютининов (для гемагглютинирующих вирусов – РГА).

Выделение вирусов на культурах клеток. Это наиболее универсальная лабораторная система для идентификации и изоляции вирусов. Лучше выделять вирус путем заражения культур клеток, полученных из органов животного того же вида, от которого был взят патматериал, т.к. вирус в патматериале уже адаптирован к клеткам определенного вида животных, можно надеяться получить ЦПД относительно быстро. Следует помнить, что характер ЦПД зависит не только от вируса, но и от типа клеток. Признаки размножения вирусов в культурах клеток различны: ЦПД, РГАд, бляшкообразование, тельца-включения, РИФ, ИФА. Часто размножающиеся в культурах клеток вирусы выходят в культуральную среду при разрушении клеток, которая и используется как готовая суспензия вируса. Если не все клетки культуры разрушились в результате размножения в них вируса, то их разрушают путем 2-3-х кратного замораживания и оттаивания либо ультразвуком.

Идентификация вируса. Выделенный вирус необходимо опознать, т.е. установить семейство, род, вид. Идентификацию неизвестного вируса проводят при помощи серологических реакций. Выделенный вирус используют как антиген и к нему добавляют известные специфические сыворотки. Та сыворотка, с которой выделенный вирус даст положительную реакцию и укажет, какой это вирус.

Выбор серологической реакции определяется тем, какая реакция наиболее пригодна для работы с данным вирусом и определяется свойствами самого вируса. Так, если вирус проявил гемагглютинирующие свойства, его идентификацию можно осуществить в РТГА, РНГА. Если вирус выделяли на культурах клеток, и он проявил гемадсорбирующие свойства, есть смысл идентифицировать его в РГАд.

При отсутствии названных свойств у выделенного вируса надежно идентифицировать его можно в РН на том лабораторном объекте, на котором он был обнаружен. Можно воспользоваться РСК и РДП при наличии в лаборатории соответствующих диагностикумов. Но наиболее универсальна РН. Она позволяет обнаруживать вируснейтрализующие антитела, которые создают в организме защиту против вирусов. Считается, что нарастание титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой в 4 раза и более свидетельствует об активном инфекционном процессе в период взятия у него крови. При этом болезнь была вызвана тем возбудителем, к которому были найдены антитела в парных сыворотках.

Доказательство этиологической роли выделенного вируса

РН, РТГА, РИФ, ИФА, РСК, РДП, РНГА и др. В реакциях антиген выделенный вирус, антитело – в парных сыворотках крови. При увеличении титра антител во вторых пробах крови в 4 раза по сравнению с первыми положительный результат.

ЛАБОРАТОРНО-ПРАКТИЧЕСКИЙ КУРС