ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЕ ВОПРОСЫ ПО ВИРУСОЛОГИИ

ТЕОРЕТИЧЕСКИЙ КУРС

1. Вирусология. Этапы развития и связь с другими науками.

2. Природа и происхождение вирусов, уникальные черты, отличающие вирусы от других инфекционных агентов.

3. Место и роль вирусов в биосфере, сходство с другими формами жизни, роль в патологии животных и человека.

4. Основные причины преобладания вирусных болезней над болезнями другой этиологии. Экономический ущерб, наносимый вирусными заболеваниями, значение диагностики и профилактики в борьбе с вирусными заболеваниями.

5. Химический состав вирионов вирусов.

6. Структура вирионов (нуклеоид, нуклеокапсид, капсид, капсомеры, суперкапсид, Моболочка). Типы симметрии вирусных частиц, простые и сложные вирионы.

7. Нуклеиновые кислоты вирусов, их строение и функции, отличие от клеточных. Типы вирусных геномов.

8. Вирусные белки, их виды, свойства и функции, отличие от клеточных.

9. Основные принципы систематики и номенклатуры вирусов.

10. Краткая характеристика семейств безоболочечных ДНК-содержащих вирусов.

11.Краткая характеристика семейств оболочечных ДНК-содержащих вирусов.

12.Краткая характеристика семейств безоболочечных РНК-содержащих вирусов.

13.Краткая характеристика семейств оболочечных РНК-содержащих вирусов с позитивным геномом.

14.Краткая характеристика семейств оболочечных РНК-содержащих вирусов с негативным геномом.

15.Стадии репродукции вирусов: адсорбция, проникновение, депротеинизация.

16.Стадии репродукции вирусов: экспрессия вирусного генома (транскрипция, трансляция вирусных белков, репликация генома).

17.Стадии репродукции вирусов: сборка вирионов и выход их из клетки.

18.Культивирование вирусов в организме естественно восприимчивых и лабораторных животных.

19.Культивирование вирусов на куриных эмбрионах.

20.Культивирование вирусов на культурах клеток и тканей, преимущества клеточных культур перед лабораторными животными и куриными эмбрионами, значение в вирусологии.

21.Виды культур клеток: органные, первично-трипсинизированные, диплоидные и перевиваемые; их свойства, особенности, области применения.

22.Действие на вирусы физических и химических факторов (температура, ультрафиолетовое облучение, кислоты, щелочи, жирорастворители, антибиотики). Методы уничтожения и консервации вирусов.

23.Пути и формы циркуляции вирусов в природе, сохранение популяции вирусов в межэпизоотический период.

24.Влияние антропогенных факторов на циркуляцию вирусов (загрязнение окружающей среды, использование вакцин, химиопрепаратов, пестицидов, концентрация животных и др.).

25.Генотип и фенотип вирусов. Наследственность, изменчивость, эволюция вирусов, генофонд вирусной популяции.

26.Генетические и негенетические взаимодействия вирусов.

27.Спонтанные и индуцированные мутации вирусов. Методы селекции и клонирования вирусов, отбор мутантов и их использование в профилактике вирусных болезней.

28. Классификация вирусных инфекций на уровне клетки. Цитопатология зараженной клетки.

29. Тропизм вирусов, проникновение в организм и распределение в нем. Классификация вирусных инфекций на уровне организма.

30. Клеточные и гуморальные факторы противовирусного иммунитета, их формирование, взаимодействие, значение для организма.

31. Иммунный ответ хозяина на вирусную инфекцию, особенности противовирусного иммунитета. Типы вирусных антигенов.

32.Иммунопатология вирусных инфекций, способы "ускользания" вирусов от иммунной защиты организма.

33.Интерферон: виды, свойства, индукторы. Применение интерферона и его индукторов в лечении вирусных заболеваний.

34.Специфическая профилактика вирусных болезней животных. Типы вирусных вакцин, их достоинства, недостатки, контроль вакцинных препаратов.

35.Химиотерапия вирусных болезней животных. Основные группы химиотерапевтических веществ.

36.Общая схема лабораторной диагностики вирусных инфекций: экспресс-методы, выделение вируса из патологического материала, идентификация вируса и доказательство его этиологической роли.

ЛАБОРАТОРНО-ПРАКТИЧЕСКИЙ КУРС

1. Устройство вирусологической лаборатории.

2. Правила работы с вируссодержащим материалом.

3. Учет, хранение и этикетирование вирусного сырья в лаборатории

4. Виды патологического материала и общие принципы его отбора.

5. Упаковка, транспортировка, хранение и консервирование вируссодержащего материала.

6. Подготовка вируссодержащего материала для исследования.

7. Вирусоскопия как метод диагностики вирусных инфекций. Световая, электронная, иммуноэлектронная микроскопия.

8. Устройство и принцип работы электронного микроскопа, приготовление препаратов для электронной микроскопии.

9. Тельца-включения при вирусных заболеваниях: морфология, состав, расположение в клетке, диагностическое значение.

10. Цели использования в вирусологии лабораторных животных, их виды, требования к ним, животные-гнотобиоты, СПФ-животные. Латентные инфекции лабораторных животных.

11. Методы экспериментального заражения лабораторных животных, признаки размножения вируса в их организме, "слепые пассажи".

12. Порядок и основные принципы вскрытия лабораторных животных, отбор патматериала.

13. Цели использования в вирусологии КЭ, их строение и требования, предъявляемые к ним.

14.Методы экспериментального заражения куриных эмбрионов.

15.Культивирование зараженных КЭ и признаки размножения вирусов в них.

16.Порядок вскрытия куриных эмбрионов и отбор вируссодержащего материала.

17. Способы и техника культивирования эукариотических клеток вне организма (монослойный, роллерный, суспензионный, на микроносителях), преимущества и недостатки каждого метода.

18. Питательные среды и растворы для культивирования эукариотических клеток.

19.Хранение, консервирование и транспортировка КК. Проблема контаминации клеточных культур и ее решение.

20. Культивирование вирусов в КК: подбор культуры, заражение, культивирование зараженных культур.

21. Методы индикации вирусов в культуре клеток.

22. Получение первично-трипсинизированной культуры клеток.

23. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса в инфекционных единицах локальных повреждений.

24. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса в инфекционных единицах 50%-ного действия на чувствительные объекты.

25. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса по гемагглютинирующей активно-

26. РТГА (задержки): принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.

27. РНГА (пассивной): принцип реакции, компоненты, контро-ли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.

28. РН: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.

29. РДП: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.

30. Метод флюорохромирования, принцип метода, приготовление препаратов, диагностическая ценность. Люминесцентная микроскопия, устройство и принцип работы люминесцентного микроскопа.

31. Метод флюоресцирующих антител (МФА): принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.

32. Иммунопероксидазная (гистохимическая) реакция: принцип, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.

33. Твердофазный иммуноферментный анализ: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.

34. Реакция связывания комплемента: принцип реакции, компоненты, контроли, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.

35. Метод ДНК-зондов: принцип метода, получение ДНК-зондов, постановка реакции, цели применения, достоинства и недостатки метода.

36. Полимеразная цепная реакция (ПЦР): принцип метода, компоненты, постановка реакции, цели применения, достоинства и недостатки метода.

ЧАСТНАЯ ВИРУСОЛОГИЯ

1. Вирус бешенства.

2. Вирус ящура.

3. Вирус оспы.

4. Вирус болезни Ауески.

5. Вирусы гриппа.

6. Возбудители губкообразной энцефалопатии.

7. Вирус чумы жвачных.

8. Вирус ИРТ КРС.

9. Вирус парагриппа-3 КРС.

10.Респираторно-синцитиальный вирус КРС.

11.Возбудитель вирусной диареи КРС.

12.Возбудитель аденовирусной инфекции КРС.

13.Вирус лейкоза КРС.

14.Вирус катаральной лихорадки овец.

15.Вирус контагиозной эктимы овец.

16.Вирус АЧС.

17. Вирус КЧС.

18. Вирус болезни Тешена.

19. Вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней.

20.Вирус респираторно-репродуктивного синдрома свиней.

21.Вирус АЧЛ.

22. Вирус ИНАН.

23. Вирус ньюкаслской болезни.

24. Вирус инфекционного ларинготрахеита птиц.

25.Вирус болезни Марека.

26.Вирус инфекционного бронхита кур.

27.Вирус инфекционного бурсита кур.

28.Аденовирусная инфекция птиц.

29.Вирусы лейкоза птиц.

30.Вирус чумы плотоядных.

31.Вирус алеутской болезни норок.

32.Вирус инфекционного гепатита собак.

33.Вирус панлейкопении кошек.

34.Вирус инфекционного перитонита кошек.

35.Вирус миксоматоза кроликов.

36.Вирус геморрагической болезни кроликов.

1. Вирусология. Этапы развития и связь с другими науками.

Вирусология наука о вирусах. Современная вирусология подразделяется на общую и частную. Общая вирусология изучает основные принципы строения, размножения вирусов, их взаимодействия с клеткой-хозяином, происхождение и распространение вирусов в природе. Один из важнейших разделов общей вирусологии молекулярная вирусология, изучающая структуру и функции вирусных НК, природу устойчивости организмов к вирусным заболеваниям, молекулярную эволюцию вирусов. Частная вирусология исследует особенности определения групп вирусов человека, животных и растений и разрабатывает меры борьбы с вызываемыми этими вирусами болезнями.

Этапы развития вирусологии:

1) Уровень организма. В 30 40 гг. XX в. в качестве основной экспериментальной модели использовали лабораторных животных, которые были чувствительны к ограниченному количеству вирусов. В 40-е гг. XX в. благодаря исследованиям австралийского вирусолога и иммунолога Ф.М. Бернета и американского вирусолога Дж. Херста в вирусологию в качестве экспериментальной модели вошли развивающиеся куриные эмбрионы. Использование этой модели позволило исследователям открыть и культивировать много новых вирусов: кори, инфекционного ларинготрахеита птиц, оспы птиц, ньюкаслской болезни и др.

2) Уровень клетки. Подлинно революционным событием для вирусологии было открытие возможности культивировать клетки в искусственных условиях. В 1952 г. Д. Эндерс, Т. Уэллер и Ф. Роббинс получили Нобелевскую премию за разработку метода культуры клеток. Использование культур клеток позволило повысить эффективность выделения и клонирования многочисленных новых вирусов, изучения их взаимодействия с клеткой и получения культуральных вакцин.

3) Уровень молекулярный. В 60—70-е гг. XX в. стали широко использовать методы молекулярной биологии, которые позволили изучать первичные структуры нуклеиновых кислот и белков. В 1972 г. в США опубликована первая работа П. Берга с сотрудниками о создании рекомбинантной молекулы ДНК. Авторы «сшили» фрагменты геномов двух вирусов, относящихся к различным таксономическим группам. Это положило начало эре генной инженерии. Появилась возможность получения большого количества нуклеиновых кислот и белков путем введения рекомбинантных ДНК в состав генома прокариот и эукариот. Одним из основных практических приложений нового метода стало получение дешевых препаратов белков, имеющих значение в ветеринарии, медицине и сельском хозяйстве.

4) Уровень субмолекулярный. 70-е г. Был открыт фермент вирусов: обратная транскриптаза. Осуществляет синтез ДНК на матрице РНК. [РНК ДНК РНК белок].

2. Природа и происхождение вирусов, уникальные черты, отличающие вирусы от других инфекционных агентов.

По поводу происхождения вирусов выдвинуто три теории (1990 г., Виктор Михайлович Жданов (1914-1987).

Регрессивная теория предполагает происхождение вирусов от бактерий и других одноклеточных организмов, претерпевших дегенеративную (регрессивную) эволюцию. Наиболее ярким ее примером может служить происхождение некоторых клеточных органелл у эукариот от симбиотических бактерий. На основании изучения гомологии нуклеиновых кислот можно считать установленным, что хлоропласты простейших и растений происходят от предков современных синезеленых водорослей, а митохондрии – от предков пурпурных бактерий. Среди бактерий, грибов, простейших можно найти немало форм, ставших строгими внутриклеточными паразитами. Из простейших достаточно вспомнить группу споровиков, а из бактерий – риккетсий и хламидий. Среди одноклеточных организмов есть симбиотические формы. Лишайники можно считать примером симбиоза грибов и водорослей. У термитов бактерии-симбионты стали своеобразными органеллами, помогающими усваивать клетчатку. ДНК у вирусов происходят от ДНК прокариот и эукариот.

Прогрессивная теория предполагает, что вирусы это потомки неких древних доклеточных форм жизни, перешедших к паразитическому способу существования. Данная теория основана на том, что мир вирусов слишком многообразен, чтобы признать возможность дегенеративной эволюции. Разнообразие генетического материала у вирусов (однои двунитевые РНК и ДНК, линейные, циркулярные, фрагментированные) служит одним из аргументов в пользу происхождения вирусов от доклеточных форм. Природа как бы испробовала на вирусах все варианты генетического материала, прежде чем окончательно остановила свой выбор на двунитевой ДНК как хранителе генетической информации и однонитевой РНК как ее передатчике.

«Теория взбесившихся генов». Гипотеза клеточного происхождения вирусов в середине 20 в. казалась маловероятной и даже была иронически названа гипотезой «взбесившихся генов». Согласно данной теории, существующие фолрмы вирусов – это дериваты, т.е. порождения составных частей клеток, ставшие автономными системами. Данная теория объясняет общность столь разнообразных структур, как полноценные и дефектные вирусы, сателлиты, плазмиды и даже прионы. Многие клеточные надмолекулярные структуры обладают относительной автономией. Наиболее выражена она у митохондрий, которые имеют собственный генетический аппарат и ферменты его копирования, вследствие чего цикл деления («размножения») митохондрий независим от цикла деления клеток и определяется метаболическими потребностями последних. Известной автономностью обладают и гены. Возможна репликация фрагментов ядерной ДНК, которая облегчается тем, что ДНК-репликаза синтезируется в цитоплазме, значительные ее количества остаются свободными, не связанными с матрицей. Специфичность этого фермента мала, и поэтому он может копировать матрицы чужеродного происхождения. Гипотеза происхождения вирусов из субклеточных структур отрицает возможность выделения вирусов в самостоятельную классификационную группу. С точки зрения этой гипотезы, вирусы – своего рода обломки жизни, и характерные для организмов функции (саморепродукция, наследственность, изменчивость и приспособляемость к условиям среды) – лишь результат того, что вирусы – дериваты организмов. А поскольку они в значительной степени автономны, то и законы эволюции органического мира действуют на них.

Вирусы вездесущие организмы, поражающие все живое на земле представителей царств вирусов (вирофаги), архей, бактерий, морских водорослей, растений, простейших, беспозвоночных и позвоночных. Вирусы являются неклеточными формами жизни. Вирусы являются неклеточной формой жизни. По-видимому, вирусы можно рассматривать как биологические образования, несущие генетическую информацию, которую они реализуют только в живых клетках.

В 1974 г. В. М. Жданов высказал гипотезу, согласно которой вирусы — важный фактор эволюции органического мира. Преодолевая видовые барьеры, вирусы могут переносить отдельные гены или группы генов, а интеграция вирусной ДНК с хромосомами клеток может приводить к тому, что вирусные гены становятся клеточными генами, выполняющими важные функции. Вирусы представляют собой закономерные продукты живой материи, участвующие в ее эволюции от древнейших примитивных форм до высших растений и животных, включая человека.