Посуда, приборы и реактивы

Прибор «Милихром-5» (НПО Научприбор, г. Орел Россия) с УФ-детектором, 4 калибровочных раствора фенола различной концентрации в диапазоне 0,005 – 1,5 мг/л в смеси ацетонитрил - вода в объемном соотношении 4:1, сорбент Диасорб 130Т16С, размер частиц – 7 мкм, размер колонки – 2 × 80 мм; ПФ вода – ацетонитрил (1:4).

Порядок выполнения работы

Для построения градуировочного графика при анализе методом ВЭЖХ приготовьте 4 калибровочных раствора фенола различной концентрации в диапазоне 0,005 – 1,5 мг/л в смеси ацетонитрил - вода в объемном соотношении 4:1. После чего последовательно, от меньшей концентрации к большей, проведите хроматографирование на приборе «Милихром-5» (НПО Научприбор, г. Орел Россия) с УФ-детектором.

Условия обращенно-фазовой ВЭЖХ: сорбент Диасорб 130Т16С, размер частиц – 7 мкм, размер колонки – 2 × 80 мм; аналитическая длина волны – 274 нм; ПФ вода – ацетонитрил (1:4), расход ПФ – 120 мкл/мин; объем вводимой пробы – 5 мкл.

По результатам детектирования растворов постройте градуировочный график в координатах площадь пика S, мм²; с ‒ концентрация фенола, мг/л (рис. 5.9).

Рис. 5.9. Схема построения градуировочного графика

для растворов фенолов

Найдите по градуировочному графику С₁=0,15 мг/л, С₂=0,30 мг/л и соответствующие им площади пиков.

Выводы

Перечислите, какими преимуществами и ограничениями характеризуется метод ВЭЖХ.

Какие требования предъявляются к НФ и ПФ в методе ВЭЖХ?

Как построить градуировочный график?

Как по градуировочному графику найти площадь пика?

Вопросы для самоподготовки

1. Дайте определение хроматографии. Какие основные характеристики хроматограммы?

2. Каков механизм разделения компонентов методом хроматографии в тонком слое?

3. Как выбирают подвижный растворитель для проявления хроматограммы в методе хроматографии в тонком слое?

4. В чем сущность метода обращено-фазовой хроматографии?

5. Какие требования предъявляются к носителю, неподвижной фазе и элюенту в методе обращено-фазовой хроматографии?

Задачи для самостоятельного решения

1. Определите массовую долю (%) компонентов газовой смеси по следующим данным:

Компонент смеси	Пропан	Бутан	Пентен	Циклогексан
S, мм2	175	203	182	35
k	0,68	0,68	0,69	0,85

Расчет проведите по формуле

где - - массовая доля i-го компонента в смеси, %; - площадь пика i-го компонента; - поправочный коэффициент, определяемый чувствительность детектора хроматографа к i-му компоненту. (Ответ: пропан -28,6 %, бутан – 33,46 %, пентан – 30,46 %, циклогексан – 7,22 %)

2. Вычислите число теоретических тарелок N, если расстояние от нижней до верхней границы пятна составляет 16 мм, расстояние от стартовой линии данного вещества до нижней границы пятна (l ) составляет 8 см (Ответ: 400).

3. Значения R_f при хроматографическом разделении ионов на пластинке в среде бутанола составляют: Cd – 0,6; Zn – 0,6; Bi – 0,5; Al – 0,1; Co – 0,1; Ca – 0,0. Какие из ионов не могут быть четко идентифицированы из смеси. Выберите один из вариант: 1) Zn, Al, Co; 2) Cd, Zn, Co; 3) Bi, Al, Ca.

4. Рассчитайте R_f , если расстояние от стартовой линии данного вещества до центра пятна составляет 5 см, а расстояние пройденное элюентом от линии старта до линии финиша 10 см. (Ответ: 0,5).

5. При хроматографировании в тонком слое резорцина, фенола и м-крезола имеют величины R_f, равные 0,50; 0,60; 0,95 соответственно. Какие из перечисленных веществ содержатся в анализируемой смеси, если при её хроматографировании в тех же условиях получено два пятна на расстоянии 4,8 см и 4 мм от стартовой линии, а растворитель прошел 8,0 см. Ответ подтвердите расчетами. (Ответ: резорцин, фенол).