Порядок выполнения работы

В хроматографическую камеру для проведения анализа налейте 30 мл подвижной фазы - хлороформ-этилацетат – уксусная кислота (50:50:1), закройте камеру стеклом и оставьте в таком состоянии на 1 час до полного насыщения парами подвижной фазы (рис. 5.8).

Рис. 5.8. Аппаратура для ТСХ: 1 – хроматографическая камера,

2 – хроматографическая пластина марки Sorbfil,

3 – растворитель (подвижная фаза)

На хроматографические пластинки нанесите линии старта и финиша. На линии старта выберите точки для каждой пробы на расстоянии 1,5 см от ее нижнего края. Расстояние, пройденное элюентом от линии старта до линии финиша 10 см. Точки и линию старта наносите мягким графитовым (нехимическим!) карандашом, стараясь не повредить слой адсорбента в месте нанесения пробы, поскольку это может привести к деформации пятен или загрязнению посторонними соединениями.

При нанесении линии финиша целесообразно прорезать слой адсорбента до подложки так, чтобы образовался заметный промежуток (0,5-1 мм). Когда растворитель достигнет финишной линии, перемещение подвижной фазы и разделение компонентов пробы автоматически прекращается.

Анализируемые растворы фенола (С_м = 0,25 г/л), гидрохинона (С_м = 0,25 г/л), м-крезола (С_м = 0,25 г/л) нанесите на пластинку в точки на линии старта с помощью градуированного микрошприца. Наносимый объем составляет 5 мкл.

После чего пластинку поместите в хроматографическую камеру, чтобы пятна были выше уровня элюента. Пластинку выдержите до тех пор, пока фронт растворителя поднимается до линии финиша. Затем пластинку возьмите из камеры, высушите под тягой до полного удаления подвижной фазы, после чего хроматограмму проявите. В качестве проявителя для определения фенолов примените пары йода. Для этого пластинку поместите в эксикатор с парами йода на 10 минут, после чего проявятся желтые пятна, которые отметьте карандашом и произведите обработку результатов измерения.

Идентификацию хроматографических зон осуществите по относительной скорости перемещения вещества на пластине (R_f) по формуле.

На основании экспериментальных данных заполните табл. 5.3 и сделайте вывод о возможности разделения аналитов.

Таблица 5.3

Результаты хроматографического разделения фенолов

Элюент	Аналит	Rf
хлороформ-этилацетат – уксусная кислота (50:50:1)	фенол
	гидрохинон
	м-крезол

Полученные данные используйте для оценки эффективности хроматографического разделения. Рассчитайте число теоретических тарелок (N) по формуле (5.11) и высоту, эквивалентную теоретической тарелке (ВЭТТ), по формуле (5.12).

Выводы

Перечислите, какими преимуществами и ограничениями характеризуется метод хроматографии в тонком слое.

Как вы готовили хроматографическую пластинку к анализу?

Как проявляют и расшифровывают хроматограмму при разделении фенолов?

Лабораторная работа №11

Высокоэффективная жидкостная хроматография

Цель работы

^{Познакомиться с основными хроматографическими приборами, посудой и реактивами.}

Научится строить градуировочные графики фенолов методом ВЭЖХ.

Научиться определять по градуировочному графику различные концентрации фенолов и соответствующие им площади пиков.

^{Теоретическая часть}

^{Вязкость жидкостей на два порядка выше вязкости газов, поэтому гидравлическое сопротивление колонок с жидкостью намного выше, чем с газом. Следовательно, для осуществления движения жидкости через колонку необходимо на входе оказывалось на нее высокое давление. В самом распространенном варианте колоночной жидкостной хроматографии - высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) – давление на входе в колонку достигает 6 – 40 МПа, при этом обеспечивается объемная скорость жидкости через колонку 0,2 – 5 мл/мин.}

^{Для снижения гидравлического сопротивления применяют короткие колонки, их длина обычно составляет 10 - 100 см, их диаметр 2 – 6 мм. Колонки чаще всего изготавливают из нержавеющей стали, тантала или стекла.}

^{Растворители, используемые для этого метода (ацетонитрил, метанол, вода, тетрагидрофуран) позволяют работать в широком УФ-диапазоне (начиная с 190 – 210 нм), так как они прозрачны.}

^{Сорбенты дают возможность использовать растворители с широким диапазоном физико-химических свойств, а также различные добавки в них: соли, кислоты, основания, органические модификаторы.}

^{ВЭЖХ может быть использована для анализа строительных материалов.}