5.5.2. Количественные характеристики эффективности разделения в тсх

Как и в других вариантах хроматографии эффективность разделения в ТСХ определяется числом теоретических тарелок N и высотой, эквивалентной теоретической тарелке – ВЭТТ, который могут быть рассчитаны по формулам (5.11) и (5.12).

; (5.11)

ВЭТТ = l /N , (5.12)

где l – расстояние от стартовой линии данного вещества до нижней границы пятна, образованного зоной этого вещества, w – расстояние от нижней до верхней границы того же пятна.

Лабораторная работа № 10

Разделение и идентификация фенолов методом

тонкослойной хроматографии

Цель работы

^{Усвоить правила работы с хроматографическими приборами, посудой и реактивами.}

Научится разделять и идентифицировать фенолы различного строения метод ТСХ.

^{Теоретическая часть}

В методе ТСХ применяются выпускаемые промышленностью пластинки с закрепленным слоем сорбента – силикагелем или оксидом алюминия; как правило, размеры пластинок 5 5 или 20 20 см. Для решения многих аналитических задач хроматографические пластинки изготавливают непосредственно в лаборатории. Для этого из стекла или алюминиевой фольги вырезают прямоугольные или квадратные подложки и тщательно очищают их поверхность. Адсорбент (силикагель, оксид алюминия, диатомитовая земля, силикат магния, модифицированная целлюлоза и др.) или смесь адсорбентов со связующими компонентами (гипс, крахмал) в виде суспензии с водой или органическими растворителями наносят тонким равномерным слоем на подложку и сушат под тягой в сушильном шкафу.

Состав тонкого слоя выбирают с учетом состава анализируемой пробы. Компоненты смеси должны разделяться друг относительно друга достаточно полно, отдельные зоны не должны перекрываться. При выборе состава неподвижной фазы следует учитывать полярности сорбента и разделяемых веществ.

На приготовленные хроматографические пластинки наносят линии старта и финиша. На линии старта выбирают точки для каждой пробы или стандартного вещества на расстоянии 1,5 см от ее нижнего края, финишную линию обозначают на удобном расстоянии от стартовой точки. Точки и линию старта наносят мягким графитовым (нехимическим!) карандашом, стараясь не повредить слой адсорбента в месте нанесения пробы, поскольку это может привести к деформации пятен или загрязнению посторонними соединениями.

Известно несколько вариантов ТСХ, различающихся способом подачи растворителя. Наиболее распространенным является восходящее элюирование. Растворитель помещают на дно хроматографической камеры, нижний край пластинки с нанесенными пробами медленно пропитывается подвижной фазой. Фронт хроматографирования перемещается снизу вверх.

Посуда, приборы и реактивы

Пластинки с закрепленным слоем сорбента – силикагелем или оксидом алюминия размером 5 5 см или 20 20 см, линейка, графитовый карандаш, эксикатор, подвижная фаза - хлороформ-этилацетат – уксусная кислота (50:50:1), Анализируемые растворы фенола (С_м = 0,25 г/л), гидрохинона (С_м = 0,25 г/л), м-крезола (С_м = 0,25 г/л), микрошприц, проявитель - пары йода.