Определение количества белка в моче кольцевой пробой Роберте -Стольникова

(в граммах на 1000 мл мочи)

Ц е н т р и ф у ж н ы й способ (Ауфрехт—Aufrecht). При необходимости быстрого определения количества белка прибегают к центрифужному методу.

В альбуминометр Ауфрехта (рис. 120) наливают 4 мл кисло реагирую­щей или подкисленной мочи и 3 мл реактива, состоящего из 1,5 г пикрино­вой кислоты, 3 г лимонной кислоты и 100 мл дистиллированной воды. Затем закрывают альбуминометр пробкой, медленно несколько раз переворачи­вают его и в точение двух минут центрифугируют для получения осадка, после чего в соответствии с его количеством по делениям альбуминометра определяют содержание белка и процентах.

Пробу ставят с неразведанной мочой при наличии в ней не более 1,7% белка. При его большем содержании готовят разведения мочи и полученный на альбуминометре показатель, совпадающий с верхней частью осадка, умножают на степень разведения. При наличии центрифуги и альбуминометра Афурехта этот способ является наиболее приемлемым.

Определение углеводов

Сахар, всасываясь из кишечника в кровь, поступает в ткани органов. В печени он концентрируется в виде гликогена, который, подвергаясь посто­янному расщеплению, переходит в общий круг кровообращения и разносит­ся по всему организму. В крови лошади и коровы общее содержание сахара составляет 0,23—0,30%, а свободного, не связанного с белком—0,07—0,1%.

В здоровом организме большая часть сахара окисляется до СО₂ и Н₂О. Кроме алиментарного сахара, печень может синтезировать сахар за счет жи­ра и белков организма. Наибольшей устойчивостью обладает гликоген серд­ца, которое сохраняет свой запас даже при условии исчезновения гликогена в скелетной мускулатуре. Распад гликогена в печени может быть обуслов­лен не только ее ферментами, но и повышением тонуса симпатической нервной системы, а также симпатикотропным действием гормона паращитовидной железы (тироксина), например, при многих интоксикациях и нару­шениях обмена веществ. Низкое содержание гликогена в печени может быть следствием торможения синтеза его на почве развившегося авитаминоза, гиперфункции щитовидной железы.

Роль сахара в организме в основном сводится к предохранению белков от распада, регулированию функции поджелудочной железы и стимулиро­ванию выделения желудочного сока. Сахар необходим для образования в пе­чени различных кислот (серной, глюкуроновой), благодаря которым обезвре­живаются некоторые ядовитые вещества, образующиеся в желудочно-кише­чном тракте при его непроходимости (индол, скатол, фенолы); при сахарном голодании печень, теряющая запасы гликогена, подвергается жировому пере­рождению и жировой инфильтрации.

Применяя глюкозу как антитоксическое и антисептическое средство, не­обходимо, однако, иметь в виду, что длительное введение сахара может вы­звать азотемию; избыточное поступление сахара приводит к остановке роста у молодняка, уменьшению его живого веса, понижению щелочного резерва и ацидозу.

В нормальной моче домашних животных содержатся следы виноградного сахара (глюкозы), которые не могут быть обнаружены обычными реакциями. Поэтому практически нормальпую мочу считают условно свободной от сахара. Стойкое обнаружение сахара в моче принято рассматривать как признак, указывающий на патологическое состояние (нарушение углеводного обмена) организма. Выделение с мочой сахара в количествах, легко улавливаемых клинико-лабораторными способами, получило название г л ю к о з у р и и. Глюкозурия бывает физиологической и патологической.

Физиологическую глюкозурию наблюдают у живот­ных, получающих много кормов, богатых сахаром. Эта алиментарная глюко­зурия появляется вследствие того, что избыток углеводов не усваивается организмом, или же она возникает из-за ограниченной способности капальцевого эпителия к реабсорбции глюкозы. Реабсорбция глюкозы канальцевым эпителием может временно понизиться у животного под влиянием нервно-рефлекторных воздействий (травмы, испуг). Наличие сахара в моче жеребых кобыл или стольных коров также относится к явлениям физиологической глюкозурии.

У лошадей физиологическая глюкозурия встречается реже, чем у собак. У крупного и мелкого рогатого скота при родильном нарезе, воспалении вымени, закупорке сосков при маститах отмечается лактозурия — появление молочного сахара в моче. Последнюю отличают от глюкозурии при помощи бродильной пробы. Лактозурия может быть следствием обиль­ной секреции молока, внезапного прекращения доения, отнятия жеребенка от кобылы, реже уменьшения плотности почечного фильтра (почечная глюкозурия) до такой степени, что через него проходит глюкоза. В этих случаях сахар выделяется в мочу даже тогда, когда его содержание в крови не превы­шает нормы.

Патологическую глюкозурию наблюдают при многих заболеваниях — бешенстве, нервной форме чумы собак, длительных судоро­гах, повреждении черепа, воспалении головного и спинного мозга, крово­излияниях в мозг. Токсическая глюкозурия может развиться у животных в результате воздействия окиси углерода, сулемы, хлороформа, скипидара, хлоралгидрата, адреналина, хромовой кислоты. Глюкозурия, кроме того, характерный признак сахарного мочеизнурения, возникающего вследствие нарушения углеводного обмена.

Из всех углеводов, обнаруживаемых в моче, наибольшее диагностическое значение имеет виноградный сахар, меньшее — молочный сахар, или пентоза.

Примешиваясь к моче, углеводы изменяют ее физические свойства: цвет ее становится бледным, реакция кислой, повышается удельный вес, оса­док бывает незначительным; отстоявшаяся моча быстро разлагается, мутнеет ж выделяет пузырьки угольной кислоты. Глюкозурия почти всегда сопро­вождается полиурией.

Большое количество сахара указывает на функциональную недостаточ­ность поджелудочной железы или на тяжелое нарушение функции почечного фильтра, обусловленное диффузным поражением почек. При недостаточности поджелудочной железы п почек выделение сахара с мочой характеризуется постоянством и длительностью.

Глюкозурия с небольшим содержанием сахара нередко является спут­ником лихорадочного состояния при ряде инфекционных заболеваний.

На сахар исследуют мочу, прозрачную и свободную от белка (белок из мочи удаляют фильтрованием после ее кипячения). Способы определения виноградного сахара основаны на его редуцирующих свойствах: глюкоза в щелочном растворе, отнимая кислород от солей окиси металла, восстанавли­вает их в закисные соединения или в чистый металл. В присутствии дрожжей растворы сахара бродят с образованием алкоголя и углекислоты. При кипя­чении с едким кали сахар дает бурое окрашивание.

Качественное определение сахара

Проба с сернокислой медью (Гайнес — Heines). Для получения реактива 2 г сернокислой меди растворяют при нагревании в 100 мл смеси из равных количеств дистиллированной воды и чистого глице­рина; к раствору добавляют 150 мл 5% раствора едкого кали. Видоизменен­ный способ приготовления реактива заключается в следующем. Растворяют отдельно: 1) 13,3 г химически чистой кристаллической сернокислой меди в 400 мл воды, 2) 50 г едкого кали в 400 мл воды, 3) 15 г чистого глицерина в 200 мл воды. Сначала смешивают первый и второй растворы и затем тотчас приливают к ним третий (Акимов).

Техника реакции. К 3—4 мл реактива, нагретого до кипения, прибавля­ют 4—10 капель исследуемой мочи и вновь нагревают некоторое время. В при­сутствии сахара жидкость желтеет и мутнеет вследствие выпадения осадка (закиси меди). При содержании сахара в количестве, большем 0,1% , на месте соприкосновения реактива и мочи тотчас образуется красное или желтое кольцо; при содержании 0,03% сахара этот цвет меняется несколько позже.

Эта проба достаточно чувствительна и наиболее пригодна для исследо­вания мочи всех домашних животных, в особенности лошадей.

Проба с азотнокислым висмутом (Ниляндер — Nylandor). В ступке растирают 2 г азотнокислого висмута с 4 г сегнетовой соли; смесь растворяют в 100 мл 10% едкого натра и фильтруют. Реактив нестоек.

Для проверки его годности перед каждым употреблением рекомендуется про­кипятить 3—5 мл реактива с десятикратным количеством воды; если при этом не выпадает бурого или черного осадка, то реактив годен. Его хранят е посуде из темного стекла.

Сущность пробы с азотнокислым висмутом заключается в том, что окись висмута, бесцветная в щелочной среде, при нагревании с виноградным саха­ром восстанавливается в закись или металлический висмут, имеющий чер­ный цвет. Для постановки реакции к 3—5 мл профильтрованной мочи прибав­ляют 1—2 мл реактива и нагревают смесь до кипения. При наличии углеводов жидкость постепенно буреет и вскоре становится черной. Следует иметь в ви­ду, что значительное количество муцина также может вызвать положитель­ную реакцию. Чувствительность пробы — 0,05%.

Проба с сегнетовой солью (Ворм-Мюллер — Worm-Muller). В пробирку наливают 1,5 мл 5% раствора сернокислой меди и 3 мл 20% раствора сегнетовой соли в 4% растворе едкого кали (100 мл). На подо­гретую до кипения смесь наслаивают равное количество подогретой мочи. При наличии сахара жидкость желтеет и мутнеет.

Количественное определение сахара

Проба с брожением основана на свойстве сахара разлагать­ся под влиянием дрожжей на этиловый алкоголь и углекислоту; она позволяет обнаружить сахар в моче даже в том случае, когда его содержится 0,1%.

Сахарометр Эйнгорна (Einhorn) наполняют мочой (рис. 121); к ней прибавляют незначительное количество дрожжей и ставят в термостат при температуре 37°. Сахар, находящийся в моче, начинает бродить с образованием СО₂. Последняя скапливается над мочой, оттесняя ее в расширенную часть сахарометра. Цифры на левой сто­роне верхней трубки показывают процентное содержание сахара в моче.

Моча, к которой прибавлены, противогнилостные сред­ства, не годится для пробы с брожением, так как они инактивизируют дрожжевые клетки. Для удаления угле­кислоты из углекислых солей мочу подкисляют и кипя­тят. Следует иметь в виду, что щелочная реакция мочи иногда зависит от бактериального брожения уже разло­жившегося сахара.

Для контроля целесообразно одновременно зарядить четыре сахарометра, так как дрожжи даже при отсутствии сахара иногда выделяют углекислоту. В первый сахаро­метр помещают воду, сахар и дрожжи, во второй—дрож­жи и воду, в третий — мочу и дрожжи, в четвертый — мочу. В первом сахарометре, если дрожжи активны, проба будет положительной; во втором, если сахар в дрожжах отсутствует, проба будет отрицательной; в третьем сахарометре положительная проба будет свидетельствовать о наличии углеводов и в последнем случае — об амми­ачном брожении в самой моче.

Определение молочного сахара. Молочный сахар обнаруживают в моче беременных животных. Лактозурию выявляют той же пробой брожения, что и глюкозу. Молочный сахар, в отличие от виноградно­го, не бродит.

Проба состоит в следующем. В пробирку с 5 мл мочи прибавляют 1 кап­лю аммиака и 2—3 капли раствора свинцового сахара. Смесь помещают в водяную баню. В присутствии лактозы осадок остается белым, а при нали­чии глюкозы он приобретает желтовато-красный цвет. Чувствительность пробы 0,3—0,5%.

Рис. 121. Сахаро­метр Эйнгорна.

Определение сахара поляризационным аппара­том. Исследуемую мочу наливают в специальные трубки, закрывающиеся на обоих концах круглыми стеклышками с навинчивающимися металлически ми крышечками. Прибор обычно снабжен тремя трубками длиной 200, 10(> и 50 мм. Трубка длиной 200 мм рассчитана таким образом, что наличие в моче 1% сахара дает отклонение поляризированного луча на 1°. При пользовании трубками длиной 100 и 50 мм показатель приходится умножать соответствен но на 2 и 4. По точности результата исследования они уступают трубке дли­ной 200 мм, поэтому пользоваться ими допускается только в тех случаях, когда мало мочи.

Белок в моче удаляют кипячением, так как он вращает плоскость поляризации влево.

Трубку с мочой, закрытую крышкой, вставляют в желоб поляризационного аппарата. Шкала разделена на полуградусы. По шкале отсчитывают деление, находящееся против 0 нониуса (до исследования 0 нониуса совпа дает с 0 шкалы). Десятые доли градуса определяют по нониусу.

Принцип определения процента концентрации сахара в моче основан на том, что глюкоза, находящаяся в растворе, вращает плоскость поляризации вправо на угол, пропорциональный количеству глюкозы. После исследования трубку тщательно ополаскивают.

Определение пигментов крови

Гематурия — симптом многих заболеваний организма с нарушением функций почек, почечной лоханки и мочеточников, или мочевого пузыря и мочеиспускательного канала. Ее наблюдают при разрыве почек, распаде злокачественных новообразований в почках, их геморрагическом инфаркте и воспалении. В таких случаях моча чаще бывает темно-вишневого цвети, содержит нередко сгустки крови и распавшиеся частицы эпителия.

При наличии в почечной лоханке камней или паразитов, ее воспалении, при пиелонефритах, в обычно мутной моче обнаруживают, кроме эритроцитов, много лейкоцитов и кристаллических солей.

При воспалении мочевого пузыря, разрывах его слизистой оболочки и нарушении ее целости вследствие травмы мочевыми камнями наблюдают кровотечения и в моче находят десквамированный эпителий слизистой мочевого пузыря.

Кровотечения из уретры возможны на почве разрывов и травм ее слизи стой оболочки, наличия мочевых камней, изъязвлений и воспалений.

При ряде инфекционных заболеваний из-за расстройства кровообраще ния и дегенерации почек наблюдают незначительные почечные кровоизлия­ния, например при сибирской язве, чуме собак.

Обнаружив гематурию, необходимо установить не только причины ее возникновения, но и силу кровотечения, а также место локализации пораже ния. Силе кровотечения обычно соответствует интенсивность окраски мочи. Неизмененные эритроциты в моче указывают на свежее кровотечение, выще­лоченные и измененные — на более или менее длительное пребывание их в моче. Увеличение количества эритроцитов в моче вечерней порции, сравнительно с утренней, может свидетельствовать о наличии камней в мочевых органах.

Острый гломерулонефрит протекает чаще всего с незначительным количеством крови в моче; обильные кровотечения бывают на почве геморрагиче­ского инфаркта почек. Камни почечных лоханок вызывают приступы крово­течения, сопровождающиеся периодическими сильными коликами. Как следствие поражения мочеточников в моче иногда находят цилиндрические сгустки крови. При поражениях мочевого пузыря, в отличие от нефритов, кровь в моче распределяется неравномерно, сгустки ее чаще всего появляют­ся в конце мочеиспускания. При повреждениях и тяжелых заболеваниях мочеиспускательного канала, а также шейки мочевого пузыря кровь выделяется с первыми порциями мочи. Кровотечение из уретры возможно даже без мочеиспускания.

Почечные кровотечения наблюдаются при кровопятнистом тифе, сибир­ской язве, чуме свиней, слабости сердечной деятельности с признаками застоя крови в почках.

Появление крови, не изменяющее окраску мочи, во многих случаях не удается установить макроскопически. При значительных кровотечениях (разрыв почек) моча темно-красная, со сгустками крови и кровяными цилин­драми.

Кровь в моче наблюдают также у животных с гемофилией и тяжелыми анемиями, когда мочевые пути не поражены.

Гемоглобинурия. В результате гемолиза у животных, больных гемоглобинемией, пироплазмозом, нутталлиозом, плевропневмонией, ган­греной легких, сепсисом, красящее вещество крови — гемоглобин попадает в плазму и выводится с мочой. Такое явление называется гемоглобинурией. Различают гемоглобинурию токсическую, симптоматическую и пароксизмальную. Гемоглобинурия может протекать без нарушения целости сосудов. В таких случаях гемоглобин выделяется из эритроцитов крови, находящей­ся внутри сосудов (гемоглобинемия). Истинная гемоглобинурия не всегда является специфическим симптомом. Она возможна при многих заболеваниях, отравлениях (яд кобры, фтористоводородные соединения, СС1₄, GS₂), после сильных ожогов и при ряде инфекций. Обнаружение кровяных пигментов в моче во многих случаях позволяет определить состояние крови. С этой целью в практике большей частью используют следующие химические реакции.

Проба с едким кали (Геллер — Heller). К 10 мл исследуемой мочи прибавляют 2—3 мл 10% раствора КОН; смесь взбалтывают и нагрева­ют до кипения. Выпадающие в осадок фосфаты (фосфорнокислые соли каль­ция и магния) увлекают за собой красящее вещество крови — гемохромоген (гематин) и принимают красно-коричневый цвет. В норме этот осадок свет­ло-серый.

Проба малочувствительна и рассчитана на исследование только кислой мочи домашних животных. Она дает положительную реакцию и после дачи им ревеня, александрийского листа, сантонина и крушины.

Гваяковая проба (Ван-Ден — Wan-Don) более чувствитель­на. К 10 каплям 0,5% раствора гваяковой смолы в 90° спирте прибавляют 10 капель озонированного скипидара или 5—6 капель перекиси водорода. При­готовленную смесь наслаивают на профильтрованную и подкисленную мочу.

При наличии кровяных пигментов на границе соприкосновения мочи с реактивом образуется белое кольцо, которое постепенно синеет и, наконец, становится темно-синим. При встряхивании синеет вся жидкость. При гема­турии, гемоглобинурии, нефритах и некоторых других заболеваниях жид­кость также очень быстро синеет. Моча с наличием гноя дает такую же реак­цию. В основе гваяковой пробы лежит способность пигментов крови отнимать кислород от его носителей и передавать легко окисляющейся гваяковой смоле.

Бензидиновая проба (Адлер — Adler) — одна из наиболее чувствительных реакций для обнаружения крови в моче. С целью приготов­ления реактива к 2—3 мл 3% раствора перекиси водорода прибавляют 15— 20 капель свежего насыщенного раствора бензидина в неразведенной ледя­ной уксусной кислоте до появления молочной опалесценции. Смесь взбал­тывают и в нее по каплям наливают мочу. Появление зеленой окраски, быст­ро переходящей в синюю или в изумрудно-зеленую на границе соприкосно­вения жидкостей (кольцо), свидетельствует о наличии в моче пигментов крови.

Бензидиновая проба основывается на способности пигментов крови отни­мать кислород от его носителей и передавать легко окисляющемуся бензидину (гемоглобин разлагает перекись водорода, а освободившийся кислород окисляет бензидин).

При незначительном содержании крови в пробирку с мочой наливают 2—3 мл свежеприготовленной эфирной вытяжки, под которую осторожно подслаивают 1 мл реактива. На границе двух жидкостей образуется зеленое кольцо. Проба весьма чувствительна.

Вытяжку приготовляют из 10 мл мочи, 3 мл ледяной уксусной кислоты и 10 мл эфира (извлекают гематин).

Для получения реактива в 2 мл ледяной уксусной кислоты растворяют незначительное количество бензидина, а затем 0,5 мл полученного раствора смешивают с 5 мл 3% раствора перекиси водорода.

Фенолфталеиновая проба (Колло —Collo). Для постановки реакции необходимы три реактива:

К равным объемам (по 2—3 мл) мочи и спиртового раствора уксусной кислоты (первый реактив) прибавляют 25—-30 капель щелочного раствора фенолфталеина (второй реактив) и затем, после смешивания, 2—3 капли перекиси водорода (третий реактив). Малиновое окрашивание смеси указы­вает на присутствие гемоглобина в моче. Реакция очень специфична и чув­ствительна.

Определение красящих веществ

Определение уробилина

Уробилин — дериват желчных пигментов и, следовательно, имеет тес­ную связь с кровяными пигментами. Он образуется в здоровом кишечнике из билирубина путем восстановления пигментов желчи под влиянием микро­организмов. Большая часть уробилина выделяется с фекалиямя (стеркобилин), и лишь небольшое его количество, всасываясь стенкой кишечника, по­ступает в печень. Из последней он частично выводится кровью в почки и вы­деляется с мочой.

Причиной уробилинурии может быть относительная или абсолютная неспособность печени задерживать уробилиноген вследствие поражения ее паренхимы при гепатитах (гемолитическая желтуха), гемоспоридиозах, копростазах, гемоглобинемии, гематурии, метритах, циррозе печени, отравлени­ях четыреххлористым углеродом и сероуглеродом, при абсцессе легких, пнев­монии, петехиальном тифе, чуме собак.

Повышенное содержание уробилина в моче имеет большое диагностиче­ское значение, так как указывает на понижение функции печени, усиленные процессы гниения в кишечнике, кровоизлияния и гемолиз. Моча травоядных содержит уробилиноген. В свежевыделенной моче, особенно у лошади, уро­билиноген под влиянием солнечного света превращается в уробилин. Уробилинурия может служить ранним признаком сердечной декомпенсации и недо­статочности других функций организма. Результаты определения уробили­на в моче необходимо рассматривать в связи с другими симптомами болезни, а также с учетом состояния организма в целом.

Более верное представление о функциональном состоянии печени живот­ного может дать определение билирубина в сыворотке крови и уробилина в моче.

Уробилин определяют в моче первой утренней порции, как наиболее концентрированной.

Проба с кислотой и эфиром (Флоренс — Florens). 8— 10 мл мочи подкисляют 5—6 каплями крепкой соляной или серной кислоты, смешивают осторожно с 3 мл серного или этилового эфира и дают отстояться. Набрав пипеткой верхний слой эфира, наслаивают его в другую пробирку, содержащую 1—2 мл концентрированной соляной кислоты. На границе сопри­косновения двух жидкостей появляется красное или розовое окрашивание, свидетельствующее о наличии в моче уробилина.

Проба Флоренса, измененная Н. Н. Комарицыным. В результате работ по сравнительной оценке методов Шлезингера, Богомолова (по Гаусману) и Флоренса Н. Н. Комарицын рекомендует для исследования мочи круп­ного рогатого скота видоизмененную пробу Фло­ренса.

Техника, предложенная Комарицыным, заклю­чается в следующем. К 5 мл исследуемой мочи до­бавляют 5 капель крепкой серной кислоты. Если от первой капли происходит сильное вспенивание, последующие капли вносят не сразу, а выжидают, пока не закончится реакция от предыдущей капли, иначе часть содержимого будет вытеснена из про­бирки и количество мочи уменьшится. Для добавле­ния серной кислоты по каплям затрачивается обычно не больше одной минуты. После легкого перемешива­ния немедленно прибавляют 2 мл серного или этило­вого эфира. Закрыв пробирку пробкой, готовят эфир­ную вытяжку уробилина, переворачивая пробирку в течение 3—5 минут. После отстаивания, примерно через 5 минут, осторожно отсасывают пипеткой 1 мл из верхнего слоя эфира, смешивают его с 1 мл кон­центрированной, соляной кислоты, находящейся в другой пробирке, и ставят пробирку со смесью

в штатив не менее чем на 10 минут. При наличии уробилина смесь соляной кислоты с эфирной вытяжкой принимает розовый цвет, переходящий в виш­нево-красный, который не изменяется в течение 12 и больше часов.

Для определения степени повышенного содержания уробилина наливают 1 мл (или 0,5 мл, если окраска очень интенсивна) указанной смеси соляной кислоты с эфирной вытяжкой в отдельную пробирку и разводят дистиллиро­ванной водой до исчезновения заметной окраски.

Результат реакции определяют в единицах по степени разведения. Напри­мер, если до исчезновения заметной окраски к 1 мл окрашенной смеси было прибавлено 10 мл дистиллированной воды, то говорят о 10 единицах уро­билина.

Рис. 122. Спектроскоп

Проба Богомолова. К 10 мл мочи прибавляют сначала 5— 10 капель насыщенного водного раствора сернокислой меди, а затем, через 2—3 минуты, 1—2 мл хлороформа, после чего смесь встряхивают несколько раз. Хлороформ (в нижней части пробирки), в зависимости от количе­ства уробилина в моче, окрашивается в розово-красный или медно-красный цвет.

Проба с уксуснокислым свинцом (Шлезингер — Schlesinger). 3—4 мл мочи смешивают с равным количеством насыщенного спиртового раствора уксуснокислого цинка и Liq. ammon. caustici — до появ­ления аммиачного запаха (раствор перед употреблением тщательно взбалты­вают) и фильтруют. Появление в фильтрате зеленой флуоресценции, хорошо заметной на темном фоне, характерно для уробилиногена. После прибавле­ния нескольких капель йодной настойки фильтрат просветляется — уробилиноген переводится в уробилин.

Спектроскопический способ определения уро­билина. Мочу наливают в цилиндр или, лучше, в сосуд с параллельны­ми стенками и держат перед щелью спектроскопа (рис. 122), направленного на свет. Уробилин дает характерную полосу поглощения между синей и зе­леной частью спектра — между линиями Е и F (рис. 123).

Уробилин в концентрациях, превышающих норму, поглощает всю синюю часть спектра. Перед спектроскопическим исследованием целесообразно кон­центрированную мочу разбавить водой; кроме того, мочу подкисляют несколь­кими каплями серной кислоты или же прибавляют к ней несколько капель йодной настойки или люголевского раствора. Спектроскопическому опреде­лению уробилина мешает присутствие других мочевых пигментов — билиру­бина, гемоглобина и его дериватов, поэтому их следует своевременно удалить из мочи обработкой 10% раствором хлорида кальция или хлорида бария и несколькими каплями аммиака с последующей фильтрацией.

Рис. 123. Спектроскопические данные.

Л и п у р и ю как признак заболевания наблюдают при воспалительных и дегенеративных состояниях почек. При этом часть мочевого жира происхо­дит из распадающегося жирно-перерожденного почечного эпителия, а дру­гая часть является кровяным жиром, который проникает через почечный фильтр при дегенеративных процессах почек. Выделение жира с мочой обусло­вливается повышенной его концентрацией в крови, например при диабете, сепсисе и заболевании желчных путей. Жир попадает в мочу после переломов трубчатых костей с их жирным мозгом, после контузии и размозжения под­кожной жировой клетчатки. В этих случаях непосредственной причиной ли­пурии служит липемия — высокое содержание жира в крови.

Определение желчных пигментов

Пигменты желчи обычно обнаруживают в моче при различных пораже­ниях печени с симптомом желтухи. В моче, кроме того, могут содержаться желчные кислоты (холевая, таурохолевая) и холевокислый натрий.

При ретенционной (механической) желтухе вследствие закупорки желчных протоков в кровь всасываются желчные пиг­менты и кислоты. Пигменты разносятся током крови и окрашивают ткани и слизистые оболочки в желтый цвет; часть их улавливается печенью, часть поступает в почки и выводится во внешнюю среду. При этой форме желтухи в моче обнаруживают большое количество билирубина и уробили­на, окрашивающих ее в желтый цвет.

Накопление в крови желчных кислот вызывает холемический симдтомокомплекс — брадикардию, гипотонию, торможение центральной нервной системы, кожный зуд. В этом случае кал бывает серо-глинистого цвета и со­держит много жирных кислот.

Гемолитическая желтуха — следствие гемолиза при ин­фекционных болезнях и токсикозах, сопровождающихся распадом эритро­цитов. Большое количество последних улавливается в печени клетками Купфера и в переработанном состоянии выделяется в виде желчи, поступающей в желчные протоки и через ductus choledochus в кишечник. Часть желчных пигментов превращается в стеркобилин и удаляется с калом, другая часть, всасываясь кишечником, переходит в уробилин и по портальным венам воз­вращается в печень, но целиком последней не улавливается вследствие на­ступающей недостаточности печени при этой форме желтухи. Минуя печень, уробилин по печеночным венам попадает в большой круг кровообращения и окрашивает ткани, а также слизистые оболочки в желтый цвет. Основная масса уробилина выделяется через почки с мочой.

Паренхиматозная желтуха развивается в результате поражения печеночных клеток при острой желтой атрофии печени, инфек­циях или интоксикациях.

На почве дегенеративных изменений печеночных клеток, а также наруше­ния целости стенок некоторых желчных ходов часть желчи проникает в кро­веносные капилляры печени, а затем через печеночные вены— в большой круг кровообращения. Это подтверждается окрашиванием тканей и видимых сли­зистых оболочек в желтый цвет и положительной прямой реакцией сыворотки крови на билирубин.

Судьба желчи, поступившей в кишечник, такая же, как и при гемолити­ческой желтухе (см. выше). Уробилин, оказавшийся в большом круге крово­обращения, усиливает желтую окраску слизистых оболочек и выделяется вместе с билирубином в мочу. Таким образом, в моче обнаруживают билиру­бин и уробилин.

При паренхиматозной желтухе в большой круг кровообращения посту­пают также желчные кислоты, которые вызывают такие же явления, как II при механической желтухе (см. выше).

В норме с мочой выводится незначительное количество красящих веществ желчи. Билирубин, образующийся из кровяного пигмента, окисляясь, пере-

ходит в биливердин. Кроме того, билирубин под влиянием гнилостных бакте­рий кишечника может восстановиться в уробилиноген, который при окисле­нии дает уробилин.

Желчные пигменты появляются в моче у собак с признаками желтухи и у лошадей, страдающих желтухами на почве нарушения функции печени различной этиологии (главным образом при ИЭМ). Желчные пигменты в мо­че нередко указывают: 1) на препятствия к оттоку желчи из печени в двена­дцатиперстную кишку, вследствие чего кал может обесцвечиваться и приобре­тать сильный запах; 2) на поражение паренхимы печени; 3) на отравление лупинами, фосфором, фтористоводородными соединениями, сероуглеродом, четыреххлористым углеродом и др.

Моча, содержащая желчные пигменты, имеет желтовато-бурый цвет, ино­гда с зеленоватым оттенком, при взбалтывании образует в большом количе­стве зеленовато-желтую пену. Под влиянием щелочей такая моча становится красной и при последующем подкислении вновь приобретает первоначаль­ную окраску.

Принцип всех проб на желчные пигменты заключается в том, что под влиянием азотной и азотистой кислот пигменты мочи окисляются с образо­ванием радужных колец различных цветов.

Определение билирубина в моче с помощью хлористого бария, модифицированное А. А. Кап­раловым.

В центрифужную пробирку с 5—10 мл профильтрованной мочи добавля­ют 3—5 мл 10% раствора хлористого бария, содержимое перемешивают встря­хиванием, после чего пробирку ставят на несколько минут в штатив или цен­трифугу до образования осадков. Для их получения при центрифугировании, требуется не менее 3 минут.

Реакция считается положительной, когда после отстаивания или центри­фугирования образуется осадок желтого цвета; интенсивность последнего' зависит от степени разведения желчи в моче. При выпадении белого осад­ка реакция считается отрицательной.

Чувствительность пробы при наличии желчи в моче составляет 1 : 1000.

Модификация А. А. Капралова состоит в том, что в качестве реактива используется один хлористый барий, благодаря чему достигается значи­тельно лучший результат по сравнению с применявшимися ранее реак­циями.

Проба основана на адсорбции желчных пигментов хлористым барием, в то время как все другие реакции (Накайяма и Гупперта) базируются на. окислении билирубина в биливердин. Проба проверена при определении жел­чи в моче кроликов, собак и крупного рогатого скота, а также в моче лоша­ди с нарушенной функцией печени и явлениями желтухи.

Проба с хлоридом бария (Гупперт — Huppert) выполняет­ся с тремя реактивами: 1) 10% водный раствор хлорида бария; 2) реактив Накайяма — смесь 1 мл соляной кислоты удельного веса 1,19 с 99 мл ректи­фикованного спирта и 0,4 мл 10% раствора хлорного железа; 3) крепкая азот­ная кислота.

Смешивают 5 мл мочи кислой реакции с равным количеством первого реак­тива и центрифугируют. К полученному осадку добавляют 2 — 3 мл второго реа­ктива, взбалтывают и нагревают. В присутствии желчных пигментов жид­кость становится зеленой или синевато-зеленой.

Эту же пробу можно проделать следующим образом. После нагревания со вторым реактивом смесь центрифугируют, затем сливают жидкость с осад­ка в пробирку и по ее стенке наливают 1—2 мл крепкой азотной кислоты. По мере проникновения азотной кислоты через осадок образуются цветные кольца вследствие окисления желчных пигментов; появление при этом зеле­ных колец указывает на наличие билирубина.

Проба особенно пригодна для исследования мочи, содержащей большое количество уробилина, кровяных пигментов и индикана.

Моча, выделенная животными после дачи им внутрь ревеня и сенны, дает не зеленое, а желтоватое окрашивание.

Желчные пигменты обнаруживаются в моче как при частичной, так и при полной закупорке желчного протока камнями или опухолями, а также при катаральных процессах в желчном пузыре и желчных протоках.

При механической желтухе почки пропускают из крови билирубин, а уробилина в моче бывает мало; при гемолитической желтухе билирубин не­ переходит из крови в мочу; в последней обнаруживаются уробилиноген и уро­билин.

Проба А. В. Синева. К 5 мл мочи, разбавленной пополам дистилли­рованной водой, прибавляют равное количество 10% раствора хлорида ба­рия, смешивают и центрифугируют. Жидкость из пробирки сливают. Осадок растворяют в дымящейся азотной кислоте. Для желчных пигментов специ­фично появление зеленого окрашивания. Реакция довольно чувствитель­ная.

Проба со скипидаром В. Г. Мухина. К 3—5 мл мочи, подкисленной 10% водным раствором уксусной кислоты, добавляют0,5—1 мл. скипидара. Содержимое пробирки, постоянно встряхивая, слегка подогрева­ют на пламени спиртовой лампочки в течение 1—1V₂ минут, не доводя до ки­пения. Проба считается положительной, если моча окрашивается в зеленый, цвет. Чувствительность пробы 1: 1000.

Определение желчных кислот

Проба с серным цветом (Гай-Крафта). На поверхность мочи, налитой в пробирку, насыпают щепотку сухого серного цвета в порош­ке. Если серный цвет не тонет, значит, желчные кислоты отсутствуют. Быстрое погружение серного цвета на дно пробирки указывает на содержание в моче 0,01% или более желчных кислот. Проба основана на том, что желч­ные кислоты понижают поверхностное натяжение мочи. Они, по-видимому, содержатся в моче животных при наличии механической или паренхиматоз­ной желтухи.

Определение индикана

Индикан — продукт гниения белков (калийная соль эфирно-серной кислоты индоксила)— при действии кислот распадается на серную кислоту и индоксил. Последний, легко окисляясь даже под влиянием кислорода воз­духа, образует синего цвета индиго.

От разложения индикана с образованием синего индиго зависит и сте­пень синего окрашивания; примесь красного индиго придает моче фиолетовый оттенок и даже красное или бурое окрашивание.

Много индикана, при усиленных процессах гниения и брожения в кишечнике, находится в моче травоядных, особенно лошади. В ничтожном количе­стве индикан примешивается к любой моче здоровых животных. В результате гнилостных процессов в кишечнике образуется триптофан, который перехо­дит в индол. Последний, после всасывания в кровь, попадает по воротной вене в печень, где окисляется в индоксил и затем соединяется с серной, кислотой. Это соединение в виде индоксилсерной кислоты, или индикана, и выделяется с мочой.

Повышенное содержание индикана в моче имеет большое значение для диагностики различных форм кишечной непроходимости, инвагинаций, ост­рого или хронического катара тонких кишок с резко ослабленной пери­стальтикой (кишечная форма индиканурии). Появление индикана в моче наблюдается при гнойном плеврите, гангрене легких и других заболевани­ях, сопровождающихся усиленным гниением белков. Индиканурию наблю­дали при острых и некоторых хронических заболеваниях, характеризую­щихся распадом белков, например при глистной инвазии, разложении и кишечнике аскарид, убитых сероуглеродом, сепсисе и абсцессах во внутрен­них органах лошадей (П. С. Ионов).

Уменьшенное количество индикана отмечается в моче животных, боль­ных инфекционным энцефаломиелитом, страдающих обильными поносами различного происхождения.

Определение индикана основано на том, что крепкая соляная кислота разлагает индоксилсерную кислоту на ее составные части, а освободившийся индоксил окисляется различными окислителями в синее индиго, которое рас­творяется в хлороформе.

В ветеринарной практике задержку индикана в крови и уменьшение его содержания в моче рассматривают как симптом недостаточности почек и уре­мии.

Гипериндиканемию, сопровождающуюся гипериндиканурией, наблюда­ют при поражении паренхимы почек. Умеренную и стойкую индиканемию с явлениями олягурии рассматривают как симптом недостаточности почек. Более высокую и стойкую гипериндиканемию с гипериндиканурией связыва­ют с клубочковой недостаточностью.

Для обнаружения в моче индикана можно применять и пробы, основан­ные па разложении находящихся в моче индоксилсерной и индоксилглюкуроновой кислот под действием крепкой соляной кислоты. Освободившийся при этом индоксил окисляется хлориновой известью, перманганатом калия и полуторахлористым железом в синее индиго, растворимое в хлороформе. Присутствие в моче бромистых соединений окрашивает хлороформ в желтый оттенок.

Качественное определение индикана пробой с три-хлоруксусной кислотой (Иоллес — lolles). К 2 мл профильтро­ванной мочи прибавляют 3—4 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты и снова фильтруют. К фильтрату прибавляют 10—12 капель 5% спиртового ра­створа тимола, 3—4 мл реактива, состоящего из 100 г чистой крепкой соляной кислоты (удельный вес 1,19) и 0,2 г хлорного железа, а затем 3—4 мл хлоро­форма. Смесь взбалтывают и центрифугируют.

В случае содержания в моче индикана хлороформ окрашивается в фио­летовый цвет.

Проба с уксуснокислым свинцом и хлорным железом (Обермейер — ОЬегшауег). К 5—10 мл мочи, свободной от белка и подкисленной несколькими каплями соляной кислоты, прибавляют 5—10 капель 20% раствора уксуснокислого свинца (для освобождения мочи от красящих веществ). Смесь встряхивают и фильтруют; к фильтрату прибав­ляют равное количество раствора хлорного железа в крепкой соляной кислоте (0,2:100 мл). Закрыв пробирку, взбалтывают содержимое и добавляют 2—3 мл хлороформа. После взбалтывания хлороформ в присутствии индиго дает синюю окраску различной интенсивности.

Бледно-синяя окраска соответствует нормальному содержанию индика­на в моче, синяя окраска с фиолетовым оттенком — повышенному коли­честву, густая синяя окраска с фиолетовым оттенком — резко повышенному количеству индикана. Ярко-розовый цвет указывает на наличие в моче йоди­стых соединений.

Проба с перманганатом калия (Яффе — Jaffe). К 2— 3 мл профильтрованной и освобожденной от белка мочи прибавляют 1—2 мл 20% раствора свинцового сахара. Закрыв пробирку, содержимое ее смеши­вают и фильтруют. Затем к 2—3 мл фильтрата прибавляют столько же креп­кой соляной кислоты, 2—3 мл хлороформа и 1—2 капли 1% раствора перманганата калия. Затем пробирку переворачивают несколько раз; хлороформ извлекает индиго. При наличии индикана хлороформ окрашивается в синий цвет; от добавления хлорной извести окраска бледнеет и исчезает. Для постановки этой реакции можно употреблять и техническую соляную кислоту.

Определение ацетоновых тел

Под названием «ацетоновые тела» объединяются три соединения: ацетон, ацетоуксусная и оксимасляная кислоты, генетически тесно связанные между собой и выделяющиеся в небольших количествах при нормальном состоянии организма. Так, в моче лошади их содержание в 1 л колеблется от 0,38 до 0,86 г, в моче коров — от 0,2 до 2,4 г.

Значительное количество ацетоновых тел в моче — ацетонурию наблюдают при длительном голодании, истощениях различного происхожде­ния, сахарном мочеизнурении, злокачественных новообразованиях, после длительного наркоза. У крупного рогатого скота при ацетонемии Ионк находил до 12,0 ацетона в 1 л мочи; значи­тельно меньше ацетоновых тел обнаружи­вали у коров при атонии преджелудков и продолжительных расстройствах желудоч­но-кишечного тракта. Появление ацетоно­вых тел в моче при недостаточности угле­водного питания указывает на накопление их в крови. Так, при родильном парезе содержание ацетона в крови крупного ро­гатого скота поднималось до 69 мг в 100 мл сыворотки (А. В. Синев). Ацетон может появляться в моче при скармливании бел­ковой пищи (мясной) и при всяком распаде в организме белков и жиров.

Все реакции с нитропруссиднатрием позволяют обнаружить в первую очередь ацетоуксусную кислоту; ацетон дает такое же фиолетовое окрашивание, но во много раз более слабое. Поэтому пробу с нитропруссиднатрием следует считать пробой на ацетоновые тела.

Проба с нитропруссиднатрием (Ланге — Lange). К 5— 10 мл мочи прибавляют 5—10 капель свеженасыщенного водного раствора нитропруссиднатрия и 1 мл ледяной уксусной кислоты. Затем на смесь по стенке пробирки осторожно наслаивают 2—3 мл водного раствора аммиака. В присутствии ацетоновых тел на месте соприкосновения жидкостей вскоре образуется фиолетовое или фиолетово-красное кольцо. Чем раньше послед­нее появляется и чем интенсивнее его окраска, тем больше в моче содержится ацетоновых тел.

Проба с едким кали (Либен — Lieben). К 10—15 мл мочи прибавляют несколько капель раствора йода в йодиде калия (люголевского раствора) и 3—4 капли 10% раствора едкого кали. При наличии ацетона образуется мутный желтоватый осадок с характерным запахом йодоформа (кристаллы йодоформа, рис 124).

Рис. 124. Кристаллы йодоформа.

Проба с салицилальдегидом (Троммер — Trommer) — самая надежная и чувствительная на ацетон. К 15—20 мл мочи прибавляют около 1 г едкого натра, затем несколько капель салицилальдегида и смесь постепенно нагревают до 70°. В присутствии ацетона слой мочи над едким натром окрашивается в красный цвет.

Определение хлоридов

Хлориды — неорганические нормальные составные части мочи. Умень­шение содержания их в моче свидетельствует о скоплении и задержке их в организме. Клинически эта задержка выражается появлением у животного отека (нефриты).

Суточное количество хлоридов в моче лошади составляет 25—35 г; оно колеблется в зависимости от состава кормов, состояния нервно-гуморальной регуляции организма, характера и степени эксплуатации животного. При нарушении обмена веществ, непроходимости кишечника, петехиальном тифе, нефрите, гемоглобинемии и других заболеваниях количество хлоридов уве­личивается или уменьшается; у голодного животного они могут быть обна­ружены в моче в виде следов. Задержку в организме и уменьшение выделения хлоридов отмечают преимущественно при заболеваниях почек, острых инфек­циях, крупозной пневмонии, илеусах и рассматривают как неблагоприятный симптом. Полиурию с усиленным выделением хлоридов считают благоприят­ным признаком. Выделение хлоридов с мочой увеличивается при всасывании транссудатов и экссудатов, в период разрешения крупозной пневмонии, при начавшемся уменьшении отеков.

Количественное определение в моче хлора по Мору осуществляется реактивами: 1) раствором нитрата серебра такой концентрации, чтобы 1 мл этого раствора соответствовал 0,01 г NaCl; этот раствор должен содержать 29,061 г химически чистого нитрата серебра (AgNO₃) в 1 л дистиллированной воды; 2) 10% раствором хромовокислого калия; 3) 10% раствором уксуснокислого натрия в 3% растворе уксусной кислоты; 4) N/10 раствором едкого натра.

К 10 мл профильтрованной, свободной от белка кислой мочи приливают N/10 раствор NaOH до получения нейтральной реакции на лакмус и 80— 90 мл дистиллированной воды. К полученной смеси добавляют в качестве индикатора 5—10 капель 10% раствора хромовокислого калия, 2 мл 10% рас­твора уксуснокислого натрия в 3% растворе уксусной кислоты и титруют раствором нитрата серебра при постоянном помешивании жидкости до кирпично-красного окрашивания всей смеси. Зная число миллилитров раствора серебра, израсходованных на титрование, легко высчитать процентное со­держание хлорида натрия в моче.

Пример. На титрование 10 мл мочи израсходовано 10 мл нитрата серебра, титр которого равен 0,01 г. Взятое количество мочи содержит 0,01X10=0,1 г NaCl, a 1 мл — 0,01 г. Животное за сутки выделяет 3000 мл мочи; следовательно, количе­ство хлористого натрия в ней равно