13. Понятие об асептике, антисептике, стерилизации и дезинфекции. Асептические и дезинфицирующие вещества.

Асептика – комплекс прямых и косвенных методов для создания безмикробной зоны или зоны со значительно сниженной численностью микробов для предупреждения инфицирования.

Антисептика – снижение числа потенциально патогенных микробов на коже и слизистых врача и пациента. Виды: профилактическая (обраб опер поля, рук хирурга), терапевтическая (аб после операции)

Дезинфекция – уничтожение или резкое снижение численности патог или у/патог микробов на объектах внешней среды с помощью хим в-в. Бывает текущая, заключительная

Стерилизация – см след вопр.

14. Действие физических факторов на микроорганизмы. Методы стерилизации.

Стерилизация – полное уничтожение всех веретативный и споровых форм мб; обеспложивание. Методы: 1) термические – прокаливание, сухой жар – в печи Пастера, в сухожаре t160- 180, пар под давлением – автоклав t120, 1,5 атм, дробная стерилизация текучим паром – 3 дня по пол часа t120 2) радиационные – гамма излучение 3) химические – формалин, разл газы 4) фильтрование

15. Бактериофаг. Получение, титрование и практическое применение.

Бактериофаги – вирусы бактерий. Получение: фильтрат фаголизата (в пит ср вносят культуру бактерий (t37, 24ч) вносят туда б/фаг (t37, 24ч), фильтруют.

Применение: 1) фагодиагностика. Фагоидентификация холеры по методу отто. Мпа, посев материала, капля б/фага. Фаготипирование по методу Фишера для определения фаговара. Посев материала на мпа, делим на сектора, в каждый сектор свой фаг. Метод Фюрта – расплавл агар смешивают с фагом, делят на сектора, в каждый сектор – свой посев.

2) фаготерапия – лечение больных. Хронические инфекции 3)фагопрофилактика – профилактика в очаге забол-я 16. Фазы взаимодействия фага с бактериальной клеткой. Умеренные фаги. Лизогения. 1) адсорбция 2) внедрение 3) репродукция: репликация, транскрипция, трансляция 4) сборка 5) выход из клетки

Вирулентный б/фаг – проникая в клетку, разрушает ее. Умеренный б/фаг – проникает в кл, но не размнож в ней. Профаг – умер. б/фаг, встроенный в геном бактерий. Лизогенная культура – культура бактерий, несущая в своем геноме встроенный б/фаг

17. Генетический аппарат у бактерий. Изменчивость микроорганизмов. Формы изменчивости: генотипическая, фенотипическая. Генная идентификация бактерий и вирусов (пцр).

Совокупность генов бактерии — геном (определяет ее свойства и признаки), взаимодействие между клеткой и окр средой — фенотип (под октролем генома)

генетический материал бактерии — ядерные структуры ( хроматиновые тельца или нуклеоиды, включающе почти всю днк бактерии)

геном прокариота включает в себя:

-1 замкнутая кольцевая хромосома (клетка гаплоидна)

содержит до 5*10(6) пар оснований.

-некоторые содержат внехромосомные молекулы днк (плазмиды)

Молекулярные методы — методы выявления рнк и днк возбудителей . Применяют для идентификации гонореи, хламидий, стрептококков группы б, энтерококкови микобактерий.

Гибридизация нуклеиновых кислот.

Метод обусловлен способностью днк и и-рнк соединяться с комплементарными участками искуственно созданных нитей днк и и-рнк, меченых изотопами или ферментами (пероксидазой, щелочной фосфатазой). В дальнейшем образцы исследуются например ИФА.

Метод гибридизации в растворах.

Берется исследуемая нуклеиновая кислота в растворах, добавляется комплементарный меченый фрагмент нуклеиновой кислоты, получаем образование гибридов нуклеиновых кислот. Далее удаляем не связавшиеся нити исследуемой нуклеиновой кислоты. Производим идентификацию гибридов.

Метод гибридизации на твердой основе.

Исследуемая нукл кислота, иммобилизованная на твердой фазе + комплементарный фрагмент нукл к-ты с меткой = гибрид нукл кислот.

Сэндвич-модификация

Ислед нукл к-та, иммобилизованная на твердой фазе + комплементарный фрагмент нукл к-ты без метки, добавляют комплементарный фрагмент нукл к-ты с меткой и получают гибрид.

В качестве твердой основы служат мембраны из нитроцеллюлозы и нейлона. Несвязавшиеся реагенты удаляют многократным отмыванием.

Полимеразная цепная реакция.

Термически разделяют цепи днк, среду охлаждают, вносят праймеры (затравки), комплементарные обоим цепям, для запуска реакции прменяют олигонуклеотиды (дезоксинуклеотидтрифосфат), затем вносят в среду термостабильную полимеразу,что запускает образование вторичных копий цепей днк, далее двуцепочечную днк снова подогревают. Отдельные цепочки остужают, восят праймеры и снова подогревают и охлаждают. ПЦР применяют для получения большего количества копий днк. Идентификация копий проводят при помощи электрофореза. Пцр лежит в основе идентификаци личности.