35. Методы культивирования вирусов. Способы бактериальной деконтаминации биосубстратов перед вирусологическим исследованием.

1. куриный эмбрион 7-12 дней жизни, используются для накопления вирусов и получения вакцин (гриппозной, паратитной, против желтой лихорадки) – заражение происходит на хорион-аллонтоизную оболочку, алонтоизную и амниотическую полость и желточный мешок;

2. использование тканевых культур – все однослойные, 3 типа: 1. первичные – используются однократно, получают из культуры клеток типа фибробластов, цель – накопление вируса, получение вакцин; 2. перевиваемые – из злокачественных клеток (типа HeLa карцинома шейки матки), используются многократно для накопления, но не для вакцин; 3. полуперевиваемые – диплоидные клетки (легкие);

3. организм лабораторных животных.

Идикация вируса – это процесс его обнаружения, те задается вопрос – есть или нет вирус в материале.

Идентификация – определение рода вируса, при помощи специальных противовирусных сывороток, те задается вопрос – какой вирус.

При разных способах культивирования методы идентификации разные:

1. куриный эмбрион – индикация в РГА (реакция гемагглютинации) заключается в склеивании Er, в том случае, если вирусы имеют гемагглютинирующие рецепторы к Er  образуется «зонтик», реакция «+», это не иммунная реакция, тк Ат не участвуют в реакции на кафельной планшетки; идентификация – проводим при помощи специальных сывороток с участием Er и вируссодержащего материала, РТГА – реакция торможения гемагглютинации;

2. тканевые культуры – индикация: 1. изучение ЦПД (цитопатического действия), изучение размеров, формы, их слияние с образованием симпластов, под микроскопом; 2. изучение включений в клетки – внутриядерные, внутрицитоплазматические; 3. реакция гемабсорбции – заключается в способности некоторых вирусов, имеющих гемагглютинины, абсорбироваться; 4. цветная проба – по изменению цвета индикатора, если вируса в материале нет – клетки остаются живыми и выделяют кислые метаболиты, которые изменяют цвет, а если вирус есть – среда такая же; 5. метод бляшек под агаром – колическтвенный и качественный метод – в колбу с плоским дном вносится тканевая культура, зараженная + заливают теплый агар с индикатором, если вирус есть - получаются бесцветные бляшки через 3 суток.

36. Основные стадии репродукции вируса в клетке.

1. абсорбция вируса к поверхности чувствительных клеток – обратимая  необратимая;

2. проникновение – рецепторный эндоцитоз: рецепторы вируса соединяются с рецепторами клетки – впячивается и образуется эндосома, путь сливания мембран;

3. депротеиневание – «раздевание» вируса;

4. фазы собственной репродукции: 1. у РНК – нитевых и у ДНК, содержащих вирусов, процесс репродукции начинается со стадии транскрипции, когда формируется иРНК (исключение РНК + нитевые). 2. образуются ранние и поздние транскриптанты, которые транслируются на рибосомы, далее на рибосомах синтезируются ранние и поздние структуры белка (ранние – ферменты, поздние – белки капсида). 3. параллельно с трансляцией идет процесс репликации нк, у ДНК содержащих вирусов, у ВИЧ и у гриппа в ядре, а у большинства в цитоплазме. 4. сборка вирусной частицы (нуклеокапсид);

5. выход вирусной частицы из клетки хозяина: разрыв мембраны клетки или почкование.