21. Монорецепторные агглютиирующие сыворотки. Диагностикумы.

Диагностикумы применяются в серологических реакциях как известные микробные аг.

Получение. Выращивают микробы, обрабатывают их температурой, формалином, ультразвуком и выделяют изучаемые АГ=диагностикумы.

Получение диагностических сывороток для сероидентификации.

Выращивают микробы, выделяют АГ, гипериммунизируют животных (кроликов), производят забор крови и выделение ИГ (АТ) диагностичеких сывороток.

Монорецепторные сыворотки — диагностические препараты, содержащие известные ат к определенному бактериальному аг.

Этапы получения:

1. выращиваем бак культуру, разрушаем лишние АГ (например Н-АГ — нагреванием, О-АГ — формалином)

2. гипериммунизируем кроликов полученной бак культурой, вводим многократно. Забор крови, выделение из сыворотки гамма-глобулинов

3. Истощение по Кастелани (удаление лишних АТ из сыворотки) метод извлечения противобактериальных антител из иммунной сыворотки крови путем их сорбции на убитых бактериях соответствующего штамма.

22. Реакция агглютинации и ее варианты (бактериальная ра, рнга, коагглютинация, латекс-агглютинация)

В этих реакциях принимают участие антигены в виде частиц (микробные клетки, эритроцита и другие корпускулярные антигены), которые склеиваются антителами и выпадают в осадок.

В зависимости от вида используемого иммунодиагностикума различают реакцию микробной агглютинации, гемагглютинации, латекс-агглютинации, коагглютинации и т. д.

Для диагностики инфекционных заболеваний реакцию агглютинации проводят в двух направлениях: определяют вид выделенного от больного микроба-возбудителя с помощью диагностической агглютинирующей сыворотки (серологическая идентификация микроба) и обнаруживают специфические антитела в сыворотке больного, используя стандартный микробный диагностикум (серодиагностика заболевания, постановка серологического диагноза).

Реакция прямой агглютинации микробов (РА). В этой реакции антитела (агглютинины) непосредственно агглютинируют корпускулярные антигены (агглютаногены). Обычно они представлены взвесью инактивированных микроорганизмов (реакция микробной агглютинации). По характеру образующегося агглютината различают зернистую и хлопьевидную агглютинацию. Зернистая агглютинация происходит при склеивании микробов, содержащих О-антиген. Бактерии, имеющие жгутики (Н-антиген), агглютинируются с образованием крупных хлопьев.

В реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) в качестве носителя используют эритроциты. Нагруженные антигеном эритроциты склеиваются в присутствии специфических антител к данному антигену и выпадают в осадок. Сенсибилизированные антигеном эритроциты используют в РПГА как эритроцитарный антигенный диагностикум для обнаружения антител (серодиагностика, установление серологического диагноза). Если нагрузить эритроциты антителами, то их можно применять для выявления антигенов.

Реакция непрямой (пассивной) агглютинации. Для получения феномена агглютинации антиген предварительно адсорбируют на корпускулярном носителе, которым служат инертные частицы (латекс, целлюлоза, полистирол, оксид бария и др.)

Реакцию коагглютинации применяют для определения антигенов с помощью антител, адсорбированных на белке А клеток стафилококка (антительный диагностикум). Белок А имеет сродство к Fc-фрагменту иммуноглобулинов, поэтому такие бактерии, обработанные иммунной диагностической сывороткой неспецифически адсорбируют антитела сыворотки, которые затем взаимодействуют активными центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состоящие из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба.