Биологический (экспериментальный) метод исследования

Биологический (экспериментальный) метод исследования (ЭСМИ) – совокупность способов искусственного воспроизведения клинической картины инфекционных болезней на лабораторных животных.

Цели.

1. Выделение и идентификация чистой культуры, если она не растет не пит.средах или подавляется другой.

2. Определение вирулентности и патогенности.

3. Индикация и идентификация экзотоксинов.

4. Изучение патогенеза.

5. Производство профилактических, диагностических и лечебных сывороток, вакцин, культур тканей.

6. Проверка безвредности и эффективности лечебных препаратов.

7. Доноры крови для кровяных питательных сред и исследований с использованием крови.

 

Взятие и обработка материала.

Материал забирается в асептических условиях, гомогенизируется и используется для заражения.

Получение чистой бактериальной культуры, проверка чистоты культуры и приготовление ее по оптическому стандарту.

Выбор лабораторного животного. 

Нелинейные и линейные (получены методом тесного инбридинга, генетически однородны, у каждой линии свои особенности и свойства, чувствительны к неблагоприятным факторам). В заглавии = происхождение, год создания особенности =среди белых линии A, CBA, BALB, BAJJ, C57BL, C57BR, C58, C3H.

Перед проведением эксперимента все животные выдержаны в виварии на 2-х недельном карантине. Животные,=здоровы, чувствительны к предполагаемому возбудителю, однородны по породе, линии, массе, возрасту, полу, упитанности, промаркированы.

Методы заражения лабораторных животных.

Накожный метод. На кожу без шерсти царапины скарификационной иглой. Материал берут стеклянной палочкой и втирают досуха.

Внутрикожный метод. Выбривают кожу спины или живота. Иглу вводят в кожу под очень острым углом скосом вверх. Обр. вздутие.

Подкожный метод. Иглу в основание кожной складки. После прокола направление меняют и медленно вводят жидкость.

Внутримышечный метод в области верхней трети задней лапы. Острие иглы перпендикулярно участку.

Внутривенный метод в краевую вену уха кроликов, яремную вену морских свинок, хвостовую вену крыс или мышей.

Пероральный метод с помощью тонкого эластичного зонда.

Крыс или мышей: а) шприцем со специальной изогнутой иглой, конец которой утолщен в виде шарика с боковым отверстием; б) шприцем с обычной иглой, на которую насажен тонкий эластичный зонд.

Внутрибрюшинный метод. Инъекцию производят в задней трети живота. Место введения обрабатывают антисептиком до и после инъекции. Животное располагают вниз головой или в наклонном положении. Несколько отступив от средней линии, брюшную стенку прокалывают, вводят иглу под тупым углом к стенке. Игла должна быть с притупленным концом во избежание повреждения внутренних органов.

Наблюдение за животным. В период наблюдения за животным должен быть обеспечен надлежащий уход; методика наблюдения зависит от ожидаемого эффекта:

а) при определении вирулентности, токсигенности, токсичности наблюдают появление инфильтратов или учитывают гибель животного;

б) при этиологической диагностике наблюдают за возникновением признаков заболевания; берут материал для бактериологического и серологического исследования, соблюдая правила асептики; ставят аллергические пробы.

Гибель (умерщвление) животного и вскрытие трупа. Между смертью и вскрытием трупа животного должно проходить как можно меньше времени, так как кишечная флора даже при температуре холодильника проникает в ткани, кровь, органы через 20–27 часов. Более целесообразно умерщвлять животное в агональный период.

Ход вскрытия зависит от задач исследования: изучают патологоанатомическую и патоморфологическую картину, делают посев органов для выявления обсеменённости и выделения чистой культуры, из внутренних органов готовят мазки-отпечатки..

После вскрытия труп животного сжигают, автоклавируют или кипятят 1-2 часа в растворе фенола; инструменты дезинфицируют, очищают, затем стерилизуют. Трупы животных, павших от особо опасных инфекций, вскрывают в специальных помещениях с соблюдением особых мер предосторожности.

Идентификация выделенной культуры и заключение по результатам исследования.

Достоинства метода:

- относительно высокая чувствительность;

- высокая специфичность;

- ранний метод исследования.

Недостатки метода:

- длительность;

- не всегда доступен;

- опасность инфицирования;

- дорогостоящий.