2. Основные принципы химиотерапии инфекционных заболеваний.

• Микробиологический = установить возбудителя и индивидуальную чувствительность по результатам антибиотикограммы. Назначают препарат узкого спектра действия с наиболее выраженной активностью в дозе, в 2–3 раза превышающей мин. ингибирующую концентрацию.

Если возбудитель неизвестен-препараты более широ­кого спектра, активные в отношении всех, наиболее часто вы­зывающих данную патологию. Потом коррекция лечения.

• Фармакологический =учитывают все особенности препарата при подборе доз и оп­тимальной продолжительности лечения.

• Клинический =при назначении пре­парата учитывают, насколько он безопасен в зав. от индивидуальных особенностей состояния больного (тяжесть, иммунный статус)

• Эпидемиологический = выбор препарата должен учитывать состояние резистентности микробных штаммов в данном отделении, стационаре и даже регионе.

• Фармацевтический = учитывать срок годности и соблюдать правила хранения препарата.

4. Требования, которым должны отвечать антибиотики:

1. Высокая селективность действия (избирательное подавление микроорганизмов).

2. Высокая акт., действие в малых дозах.

3. Наличие спектра действия (перечня чувствительных видов).

4. Химиотерапевтический индекс больше 3. Определяется ХТИ = максимальная переносимая доза (Dmt-doses maxima toleranta) минимальная лечебная доза (Dmc-doses minims curativa) ХТИ определяет токсичность препарата: чем ХТИ выше, тем менее токсичен препарат.

5. Хорошая растворимость в нормальных и патологических жидкостях, всасываемость, действие в очаге воспаления при слабокислых значениях рН.

6. Отсутствие токсического действия на организм хозяина.

7. Отсутствие связывания с белками макроорганизма.

8. Отсутствие кумуляции в организме.

9. Медленная селекция резистентных форм микроорганизмов.

10.Стабильность при хранении, невысокая стоимость препаратов

6. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам:

 Метод индикаторных (диффузных)стандартных дисков (метод диффузии в агар) позволяет оценить, чувствителен или устойчив микроб к препарату.  

Питательную среду (Мюллера-Хинтона, АГВ) разливают. Тампон погрузить в суспензию микроорганизма, отжать о стенки пробирки. Посев штриховыми движениями в трех направлениях, поворачивая чашку, засевая сплошным газоном. Крышку чашки приоткрывают и дают поверхности среды подсохнуть. Пинцетом положить на поверхность агара бумажные диски, пропитанных раствором антибиотика. Инкубируют 18-24 ч при 35-37°С в перевернутом положении. При наличии чувствительной к антибиотику флоры вокруг дисков = зона задержки роста. Диаметр зоны измеряют линейкой в самом широком месте, результаты сравнивают с данными специальных таблиц.

Не дает надежных данных при определении чувствительности к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам.

 Метод серийных разведений (количественный) более чувствительный и точный, позволяет определить мин. конц. антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры.

Делают серийные разведения антибиотика и добавляют в среду, определяют, при какой мин. конц. антибиотика произошло подавление роста.

 Метод серийных разведений в плотной среде.

 Агар с тремя конц. антибиотика разливают в чашки. Контроль = чашка без. Посев, учет роста в термостате спустя сутки. Культура чувствительна, если на месте посева нет роста ни одной колонии.

 Оценка результатов:

- чувствительные–рост подавлен всеми тремя конц. (можно применять антибиотики в средней терапевтической дозе);

- среднечувствительные (можно только в увеличенной дозе) – рост подавляют вторая и третья конц;

- умеренно-устойчивые подавляет только третья наиболее высокая (применяют только местно);

- устойчивые (применять нельзя) - растут на всех трех конц.

 Методы серийных разведений в бульоне=количественный.

 В зав. от объема питательной среды: макрометод (пробирочный) и микрометод (в планшетах).

Макрометод. В объеме 1 мл каждого разведения антибиотика. Питательный бульон разливают по 0.5 мл в каждую пробирку. 0,5 мл раствора антибиотика стерильной пипеткой вносят в первую пробирку с 0,5 мл бульона. Перемешивают и переносят 0,5 мл из этой пробирки во вторую с 0,5 мл бульона. По 0,5 мл инокулюма вносят в каждую пробирку с 0,5 мл соответствующего разведения антибиотика и в одну пробирку без. Пробирки закрывают стерильными ватно-марлевыми пробками, инкубируют при 37 °С. Определяют МИК= конц. препарата в последней пробирке с видимой задержкой роста (прозрачная питательная среда).

 Микрометод (с использованием коммерческих тест-систем). Используют 96-луночные планшеты для иммунологических исследований.

Изготовление планшетов, пригодных для хранения. Конц. рабочих растворов антибиотиков, вносимых в лунки, рассчитывают исходя из схемы последующей инокуляции –создание в лунке конечной концентрации исследуемого микроорганизма. После внесения антибиотиков в лунки, запаянные планшеты могут храниться при температуре ниже –60 °С до момента использования. Повторное замораживание не допускается. Планшеты после извлечения из холодильника выдерживают до достижения ими комнатной температуры. Инокуляцию проводят в течение 15 мин после приготовления суспензии. Инкубацию осуществляют при 37 °С в течение 16…20 ч.

Учет результатов при постановке макро- и микрометодов проводят визуально по появлению видимой мутности или спектрофотометрически, сравнивая рост в присутствии антибиотика с ростом в ячейке без него. За МИК принимают минимальную концентрацию, обеспечивающую полное подавление видимого роста.

 Использование тест-систем на основе метода микроразведений позволяет избегать трудоемких процедур по стандартизации подготовительных этапов, но при этом обеспечивает получение достоверных количественных результатов по уровню антибиотикорезистентности.