I. Простая радиальная иммунодиффузия в геле по Манчини:
1) в гель вносят АТ к АГ человека определенного класса, дают гелю застыть и вырезают лунки;
2) в лунки раскапывают сыворотки+стандартную сыворотку с известной концентрацией искомых иммуноглобулинов в различных разведениях;
3) при взаимодействии АТ в сыворотке, и АТ к АГ в геле= кольцо преципитации (помутнение);
4) измерив площади колец, строят калибровочную кривую – зависимость между площадью кольца и концентрацией иммуноглобулина; Опуская перпендикуляр на ось абсцисс, находят конц. иммуноглобулина в материале.
II. Нефелометрия:
1) в сыворотку вносят АТ к АГ человека определенного класса (субкласса)= обр.иммунные комплексы с большой молекулярной массой;
2) через образец луч лазера, определяя интенсивность рассеянного светового потока;
3) концентрацию иммуноглобулинов по калибровочной кривой, по оси ординат откладывается интенсивность рассеянного света
Гуморальный иммунный ответ
–комплексная кооперативная многокомпонентная реакция, индуцируется АГ и реализуется В. Направлен на элиминацию путем связывания специфическими АТ.
Этапы:
I. Распознавание и связывание АГ при помощи ВСR= запускает каскад реакций.
II. Активация в-лим.:
а) Т-независимая: для ответа на полисахаридные и липополисахаридные АГ = пролиферация и дифференцировка в плазматические; бівает поликлональная активация; В-клетки памяти не обр.;
б) Т-зависимая: для ответа на белковые при участии Т-хелперов 2-го типа после АПК;
Параллельно с АПК В-лимф. распознают АГ ВСR→ процессируют и экспрессируют с ГКГС II →Th2 распознают =костимуляция – лиганд-рецепторное взаимодействие CD40 с CD40L и CD80/86 с CD28;
Вместе с В акт. Т-хелпер →продуцирует ИЛ4, ИЛ5, ИЛ6, ИЛ10→пролиферации и дифференцировке В в плазматические и клетки памяти.
III. Синтез АТ и элиминация АГ:
• при Т-зависимом плазматические =иммуноглобулины M, G, A, E;
• при Т-независимом только IgM;
Обр.
комплекс антиген-антитело→комплементзависимый
лизис или фагоцитоз.
Иммунологическая память
При первичном введении АГ=первичный иммунный ответ. Первыми обр. М потом G. Периоды:
1-латентный, индукция АТ и накоплением клона АТобр.клеток.
2-логарифмическое возрастание
3-макс.антителообр.
4-снижение
Вторичній при повторном введении АГ=нет латентного, более эффективно.
Серологические методы.
-методы изучения АТ и АГ с помощью реакций их взаимодействия.
Взаимодействие АТ с Аг:
• Специфическая фаза быстро = эпитоп АГ комплементарно связывается с паратопом АТ= иммунный комплекс;
• Неспецифическая медленнее. Корпускулярные АГ агрегируются в крупнодисперсные конгломераты и в осадок (феномен агглютинации). Растворимые АГ = мелкодисперсные конгломераты (феномен преципитации)=помутнение раствора или обр. колец\зон преципитации в гелях. Нейтрализация (прекращение биоактивности вирусов или токсинов) или лизиса клетки (взаимодействие с клеточными антигенами).
Продолжительность существования комплекса определяется:условиями, свойствами АТ: афинность – сила связи одного акт. центра; ув. в процессе развития ГИО когда появляются более специфические В; авидность – сила связи всей молекулы АТ (наибольшая у IgM).
Цели:
• диагностика заболеваний по обнаружению АТ в диагностическом титре с помощью известного АГ; оценка динамики титра; определение АТ различных классов;
• диагностика инфекционных и некоторых опухолей по обнаружению АГ с помощью известных АТ – иммунных диагностических сывороток;
• определение активности поствакцинального иммунитета;
• определение групп крови и подбор доноров;
• определение титров приготовленных сывороток.
Классификация:
-2-компонентные простые(для реализации и визуального учета достаточно только иммунологических компонентов)=реакция агглютинации (РА)
-3-компонентные простые = реакция иммуногемолиза
-2-компонентные сложные(нужны иммунологические компоненты и индикаторная система)=реакция нейтрализации (РН), непрямой гемагглютинации (РНГА), прямой иммунофлюоресценции (РИФ прямая), торможения гемагглютинации (РТГА)
-3-компонентные сложные=реакция связывания комплемента (РСК), непрямой иммунофлюоресценции (РИФ непрямая), иммуноферментный анализ (ИФА)
Диагностическая сыворотка (известны АТ) – иммунная сыворотка с АТ известной специфичности в известном титре. Получают путём иммунизации животных или при помощи гибридомной технологии (моноклональные АТ).
Диагностикум (известный АГ) – взвесь известных АГ в физрастворе.
Титр сыворотки – макс. разведение, в котором есть АТ.
Диагностический титр – разведение сыворотки, в котором реакция положительна только у больных и отрицательна у здоровых.
Парные сыворотки – две сыворотки одного обследуемого с интервалом для изучения динамики. Первую немедленно, вторую – через 7–14 дней (острые инфекции) или месяц (хроническая).
Диагностическим = нарастание титра АТ в четыре и более раза.
Серонегативный период – стадия заболевания, в которой нет специфических АТ.
Сероконверсия – переход серонегативности в серопозитивность.
3) лимфоцитотоксический тест для типирования АГ ГКГС – к сывороткам против разных АГ ГКГС + по 2000 исследуемых лимфоцитов+ комплемент=разрушает лимфоциты, несущие антиген, против которого сыворотка→добавляют краситель, окрашивающий только живые клетки, и подсчитывают число погибших.