7. Простые питательные среды, их приготовление и стерилизация.

Простые среды (МПБ, МПА, желатин, пептонная вода). Мясопептонный бульон (МПБ) В состав МПБ входят мясная вода, пептон и поваренная соль. Для приготовл мясной воды испол свежее мясо крупного рогатого скота или лошадей. Мясо освобождают от костей, жира и сухожилий и пропускают через мясорубку. Полученный фарш заливают водой из расчета 1:2 (н, 1 кг фарша заливают 2 л воды). Ставят на 18—20 ч в прохладное место (4—6° С), затем кипятят в теч ч и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Фарш отжимают, к фильтрату добавляют воды до первоначального объема, разливают его по колбам или бутылям и стерилизуют в автоклаве при избыточном давлении 0,1 МПа. (120 С) в теч 30 мин. При варке мясной воды на поверхн жидкости появл некот кол-во жира, кот необхо­д снять. Для приготовления МПБ к мясной воде добавляют 1% пептона и 0,5% химич чистой поварен соли, кипятят 10 мин, фильтруют через бумажный фильтр, уст рН 7,2—7,4 прибавлением щелочи или двууглекислой соды и снова кипятят 10 мин. Профильтрованный бульон д б цвета соломы и совершенно прозрачным. Бульон разливают по пробиркам и колбам, закрывают ватными пробками, пробки обвязывают пергаментной бумагой и стерилизуют 20—30 мин при избыточном давлении 0,1 МПа. Мясопептонный агар (МПА). К мясопептонному бульону добавляют 2—3% нарезанного агар-агар; нагревают в автоклаве или в текучепаровом аппарате до полного расплавления агар-агара. Уст рН 7,2—7,4. Дают остыть до 50° С, осветляют путем добавления белка 1го куриного яйца, разведенного двойным кол-вом дистил воды . Ставят на 20 мин в автоклав при избыточном давлении 0,1 МПа для свертывания белка и тем самым осветляют среду, фильтруют через слой марли и ваты. др методикой. К мясопептонному бульону добавляют 2—3% нарезанного агар-агара, нагревают до полного расплавления его. После остывания застывший плотный агар вынимают из посу­ды и отрезают нижнюю часть, содержащую осадок. За­тем вновь расплавляют, разливают по пробиркам и стерилизуют при избыточном давлении 0,1 МПа в теч 20 мин. Необход, чтобы прозрачность агара позволяла свободно читать напечатанный на бумаге шрифт при наложении на него бактериологич чашки с агаром, налитым слоем толщиной 20 мм. После стерилизации для того, чтобы агар в пробирках застыл столбиком, их оставляют в вертикальном положении. Если нужно при­готовить агар скошенной формы, пробирки с расплавлен­ным агаром располагают в наклонном положении так, чтобы среда заняла 2 трети пробирки, и в таком виде оставляют до застывания среды . При этом про­бирки необходимо предохранять от д-вия солн света. Перевар Хоттингера готовят из мясных отходов путем их триптического гидролиза. Жир, фасции, сухожилия нарезают, заливают кипящей водой 1:2, кипятят, охлаждают до 45 С, добавляют панкреатин, подщелачивают р-ром карбоната натрия, встряхивают, добавляют хлороформ, закрывают и выдерживают в теплом месте 10 д. Мясо-пептонная желатина (МПЖ). К 1 л МПБ добавляют желатин до конечной концентрации 10-20%, нагревают, уст слабо-щелочную pH, кипятят, фильтруют, разливают по пробиркам и стерилизуют в кипятильнике Коха текучим паром 3 д или однократно автоклавированием при 120 С при 1 атм. теч 20 мин. Полужидкий мясо-пептонный агар (ПЖА) готовят, как МПА, но добавляют 0,25% агара, кипятят до его расплавления, уст требуемую pH, фильтруют в горячем виде и стерилизуют автоклавированием. Агар Хоттингера готовят, добавляя к бульону Хоттингера 2% агар-агара. Питат бульон содержит: триптический гидролизат кильки –10,05, NaCI- 4,95. 15 г порошка этого бульона растворяют в 1 л дист Воды, кипятят 2 мин, фильтруют, разливают по емкостям и стерилизуют в автоклаве при 120 С 20 мин (Ph 7,3). основные (простые) – испол для культивирования многих видов микроорг: ПВ, МПБ, МПА; на простых средах хорошо растут прототрофные бак; простые среды служат основой для приготовления ряда сложных пит сред;