17. Выделение чистой культуры бактерий.

В бактериологич практике уст вида возбуд позволяет поставить диагноз заб, поэтому выделение и идентификация чистой культуры - это и есть бактериологич м диагностики инфекц заб. Постановка этого метода обязательно вкл и опред чувствит выделенной чистой культуры возбуд к а/б (опред антибиотикограммы). Выделение чистой культуры анаэробных бак также осущ в 3 этапа. При этом также получают чистую культуру из 1ой кл и добиваются роста микроорг в виде изолированных колоний с послед ее пересевом и идентификацией. Особен работы по выделению чистой культуры анаэробов явл примен различных методов создания бескислородных условий. 3 этапа: 1ый день. Делают посев (земля, гной) на среду Китта-Тароцци. 2ой день: для получения колоний делают пересев со среды Китта-Тароцци по методу Цейсслера, методу Вейнберга и методу Перетца. 3ий день: колонии пересевают в пробирку с новой средой Китта-Тароцци для накопления чистой культуры; проводят идентификацию чистой культуры анаэробов по морфологич, культурал, тинкториал, биохимич и антиген св-вам. Посев по методу Цейсслера. Каплю (петлю) материала со среды Китта-Тароцци последоват засевают в 3 чашки Петри с кровяным агаром. Посевы ставят в анаэростат или аппарат Аристовского, кот ставят в термостат. На след день на 3ей чашке вырастают отдельные колонии. Делают пересев этих колоний на среду Китта-Тароцци для накопления чистой культуры, изучения ее св-в и точного опред вида микроорг. Посев по методу Вейнберга. Пастеровской пипеткой переносят материал со среды Китта-Тароцци последоват в 3-5 узких пробирок с сахарным МПА, погружая пипетку в расплавленный агар до самого дна пробирки. Пробирки быстро охлаждают под холодной водой. Агар застывает и разобщает микробные кл в глубине агара. Из этих кл вырастают колонии, кот пересевают в новую среду Китта-Тароцци, накапливают чистую культуру и идентифицируют. Выделение чистой культуры проводят в 3 этапа: 1ый этап (1-ый день): а) из материала (смесь бак разных видов) готовят мазок, окраш по Граму и микроскопируют; б) делают посев материала (смеси бак) на чашку Петри с МПА штриховым методом или по методу Дригальского и ставят в термостат при 37С на 24-48 ч. 2ой э (2-ой д): а) наблюдают посевы и проводят описание колоний разных видов (размер, форма, цвет, поверхность, форма края, структура, консистенция); б) из колоний готовят мазки и окрашивают по Граму (колония должна содержать 1 вид бак); в) делают пересев разных колоний в разные пробирки со скошенным МПА для накопления чистой культуры; выращивают в термостате при 37С 24 ч. 3ий э (3-ий д): проделывают работу по идентификации (опред вида) культуры и проверяют чистоту культуры. Для опред вида изучают морфологич, культурал, тинкториал и биохимич св-ва: а) отмечают характер роста выделенной чистой культуры на МПА (визуально она характ однородным ростом); б) готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют; если культура чистая, то обнаруживают одинаковые морфологич и тинкториал кл; в) делают посев на среды Гисса и МПБ для изучения сахаролитич и протеолитич св-в чистой культуры; оставляют в термостате при 37 С на 24 часа.