20. Использование бактериальных ферментов в медицине.

Широкое применение в мед практике ферменты находят в кач-ве диагностич (энзимодиагностика) и терапевтич (энзимотерапия)ср-в. Ферменты также испол в кач-ве специфич реактивов для опред ряда метаболитов. Н, фермент глюкозооксидазу применяют для колич-ного опред глюкозы в моче и крови; фермент уреазу испол для оценки содержания в биологич жидкостях мочевины; с помощью различных дегидрогеназ выявл наличие соответств субстратов, н пирувата, лактата, этилового спирта.

21. Определение ферментативной активности бактерий для их идентификации.

Для опред сахаролитич ферментов испол среды с сахарами: Ø среды Гисса (пестрый ряд): v жидкие – пептонная вода, индикатор Андреде (кислый фуксин), углеводы, спирты; v полужид – пептонная вода, 0,5% агар-агар, индикатор бромкрезол, углеводы, спирты; v короткие – содержащие моносахара и дисахара (глюкоза, мальтоза, лактоза, сахароза, маннит); v длинные – короткий ряд + моносахара (арабиноза, ксилоза, рамноза, галактоза), полисахариды (инулин, крахмал), спирты (глицерин, дульцит, инозит). Ø среда Ресселя – двухсахарный агар (лактоза, глюкоза) и индикатор бромтимоловый синий, Олькеницкого – трехсахарный агар (лактоза, сахароза, глюкоза), индикатор нейтр красный и соль Мора для выявления H2S. Под д-вием сахаролитич ферментов бак углеводы и многоатомные спирты расщепляются до к-ты/к-ты и газа. Для обнаружения газа в жидкие среды помещают поплавки, кот при образовании газа всплывают, а в полужидких – заметно появление пузырьков. Для обнаружения к-ты добавляют индикатор, кот под ее д-вием изменяет цвет. Ø среды Эндо, Левина, Плоскирева – МПА с лактозой и индикаторами – фуксином, метиленовым синим и нейтр красным. У бак, ферментирующих лактозу (лактоза+), колонии окрашиваются в цвет индикатора и приобретают металлич блеск, у лактоза– бак колонии остаются бесцветными. Для опред протеолитических ферментов испол: Ø опред конечных продуктов распада белков (индол, H2S, аммиак); Сероводород, индол и аммиак опред, помещая под пробку пробирки с растущей на МПБ культурой индикатор бумажки: v индол (выделяется при разложении триптофана), окрашивает в розовый цвет индикатор бумажку, пропитанную щавелевой к-той; v H2S (продукт распада серосодержащих аминок-т – цистеина, метионина), реагируя с ацетатом свинца на индикаторной бумажке, превращается в сульфат свинца и окрашивает бумажку в черный цвет; v о наличии аммиака свидетельствует посинение лакмусовой бумажки. Ø способность разжижать желатин (в виде воронки, перевернутой елочки); Ø способность свертывать или пептонизировать плазму крови и молоко.

22. Классификация микробов в зависимости от температуры, при которой они могут размножаться.

по отношению к т микроорг делят на 3 основные гр – психрофилы, мезофилы и термофилы. - Психрофилы (криофильные)-микроорг. Имеют минимал т роста около 00С (на несколько градусов ниже), оптимум (растут с максим скоростью) при т не выше 150С. В почвах и водоёмах умеренных широт обитают психротолерантные микроорг, метаболически активные при т до 20- 30С. (фотобак, железобак. Ряд плесеней, некот псевдомонады, флавобак, и даже патогенны, н Clostridium botulinum тип Е). Они адаптированы к пониженным т благодаря след особенностям: Кл психрофиллов содержат ферменты с низкой т активации -Проницаемость мембран регулируется большим кол-вом ненасыщенных жирных к-т, содержащ в липидах - Полисомы образуются и при низких т. - Психротолеранты Охлаждение или замораживание для сохр продуктов питания не обязательно полностью подавляет микробную активность. Возможен рост психротолерантных микроорг с небольшой, но заметной скоростью. Порчу молока, кот хранится после пастеризации при низкой т, вызывают психротолерантные штаммы псевдомонад. - Мезофиллы – растут обычно при т от 0-100 до 40-45С, оптимум 28-30 С. (бол-во сапрофитов, обитатели кишечника и верхних слоёв почвы). - Термофилы – микроорг с минимал скоростью роста обычно выше 50. Опред термофилов менялось в связи с расширением о темп границах жизни и темп оптимумах для отдельных штаммов микроорг. Внутри группы термофилов различают 3 подгр: - Термофильные – растут в диапазоне 40-60 - Экстремальные термофильные микроорг вовсе не растут при т ниже 55, оптимал темп зона роста около 80, максимал 93-105. Выше 75- -гипертермофильные. Бол-во известных сегодня гипертермоф – археи, и лишь немногие – эубак. - Термотолеранты характер максимал т роста, равной 45-48.Термоф бак широко распростр в природе, выделяются из почвы, торфа, ила, воды, компоста, навоза. Широко распростр термофильные сульфатвосстанавл бак, оптимал т роста кот достигает 55-60 С. Причины, обусловливающие способность термофилов существовать при высоких т. Структурные и клет элементы кл (оболочка, мембраны, рибосомы, входящие в состав кл протеины, жиры, ферменты) термофильных микроорг заметно отличаются кач-но и колич-но от подобных клет компонентов мезофильных форм. -Процессы метаболизма в кл термофилов протекают с гораздо большей скоростью, чем в кл мезофилов. Поэтому концентрация кислорода может явиться ф-ром, лимитирующим рост термофильных микроорг. -Устойчивость микробной кл к высокой т зависит от содерж влаги в протоплазме. Чем выше %воды в кл, тем быстрее и при меньшей т наступает гибель.