Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха.

Среда пребывания и распространения, нет размножения, отсутствуют питательные вещ., мало влаги и губительные УФ лучи.

Выделяют:

-резидентную=постоянно обнаруживается

-временную-спорадически формируется за счёт микроорганизмов почвы и видов, поступающих с поверхности водоёмов.

Чаще всего: микрококки, споровые и пигментообразующие бактерии, плесневые грибы и сапрофитные микроорганизмы. Micrococcus roseus, M. flavus, M. candicans, Sarcina flava, S. alba, S. rosea, Bacillus subtilis, B. mycoides, B. mesentericus, виды Actinomyces, грибы родов Penicillium, Aspergillus, Mucor и др

В жилых помещениях анализ только по эпидемическим показаниям при выявлении инфекционного больного. Планово: в помещениях мед. учреждений: операционных, родильных, палатах новорожденных.

Капли аэрозоля=источник аэрогенного заражения окружающих. Фазы аэрозоля:

1. Крупнокапельная с диаметром частиц более 0,1 мм; длительность пребывания в воздухе несколько сек.

2. Капельно-ядерная 0,1 мм и менее. Длительное время и рассеиваются на большие расстояния.

3. Фаза бактериальной пыли от 1 до 0,01 мм. Наибольшее эпидемиологическое значение, глубоко проникает в дыхательные пути.

Микробиологическое исследование: определения количества МАФАнМ(мезофильные аэробные и факультативно анаэробные микроорганизмы), общего микробного числа(обсемененность воздуха, микробное число) — кол-во колоний, выросших при посеве на питательном агаре в течение 24 ч при 37С. СПМ — кол-во золотистого стафилококка и гемолитических стрептококков в 1 м³ воздуха.

Для определения спор плесеней и дрожжей обчзательно в аптеках- сусло_агар или среду Сабуро, Чапека.

Показатель плохой освещённости - отсутствие пигментообразующих форм.

Седиментационный метод Коха=естественная =осаждение микробных частиц и капель аэрозоля для патогенных стафилококков - желточно-солевым агаром и 15 мин, для стрептококков - с кровяным агаром, для плесневых и дрожжевых грибов – среду Сабуро, для грамотрицательных неферментирующих– чашки с МПА или ЦПХ-агаром. Чашки оставляют открытыми на 5–20 мин в помещении. В термостат +30С, культивируют 48 ч; если Сабуро —+25_С 4–7 суток. Подсчет выросших колоний. Оопределяют кол-во микроорганизмов в 1 м3 воздуха по формуле Омелянского= в чашки с средой 100 см2 в 5 мин оседает столько клеток, сколько их в 10 л воздуха.

Принудительная   седиментация    путем «посева» на среды с помощью импакторов(прибор Кротова), импинджеров. фильтров.

Аспирационный метод Кротова более точный, микроманометром показывает кол-во литров посеянного воздуха. При вращении вентилятора воздух засасывается через щель в крышке, под которой вращающаяся платформа с чашкой, струя воздуха ударяется о пов. среды, микроорганизмы оседают. Для определения микробного числа - МПА, для S.aureus – желточно-солевой агар (ЖСА). В термостат на 24–48 ч +30_С. Подсчет колоний.

Критерии оценки микробной чистоты воздуха в хирургических и акушерских стационарах (СанПиН, 2010 г.)

Место отбора проб	Условия работы	Допустимое общее количество микробов (в КОЕ) в 1 м3 воздуха	Допустимое Количество (в КОЕ) S.aureus, в 1 м3 воздуха
Класс А (особо чистые) (операционные и родильные залы; послеродовые палаты по типу «мать-дитя», палаты для ожоговых больных)	до начала работы	не выше 200	не должно быть
	во время работы	не выше 500	не должно быть
Класс Б (чистые) (палаты для недоношенных детей)	до начала работы	не выше 500	не должно быть
	во время работы	не выше 750	не должно быть

Микрофлора почвы. Санитарно-микробиологическая оценка почвы.

Микроорганизмы, для которых природный биотоп — возбудитель ботулизма, актиномицеты, возбудители глубоких микозов, аспергиллы.

Микроорганизмы, попадающие с выделениями и сохраняющиеся длительно— сибиреязвенная палочка, возбудитель столбняка, газовой гангрены.

Микроорганизмы, попадающие с выделениями, сохраняющиеся недолго— кишечная палочка (до 8 мес), сальмонеллы (до года при минусовой), шигеллы (до 100 дней), холерный вибрион (2 мес).

Главный резервуар и естественная среда. Формирование и очищение почвы, круговорот вещ.

Жизнедеятельность и состав определяется условиями: пит. вещ., влажность, аэрация, реакция среды, влиянием УФ.

В зав. от типа почвы:

-больше в увлажненной и обработанной (4,2 - 5,2 млрд/г), меньше в лесной, в песках (0,9 - 1,2 млрд/г). –больше всего в черноземных, каштановых, сероземы и специально обработанные.

-бедны песчаные, горные и лишенные растительности.

Наиболее многочисленны в верхнем слое. Максимально на 10- 20 см. По мере углубления ум. сод. органич.вещ., О2.

Спорообразующие и неспорообразующие, актиномицеты, архебактерии, микоплазмы, цианобакерии, микромицеты. Типичные почвенные спорообр. = Bacillus subtilis, Bacillus mycoides, Bacillus mesentericus, Bacillus megatherium, клостридии.

Группы:

1. бактерии аммонификаторы= гниение трупов, остатков, разложение мочевины: аэробные бактерии - B.subtilis, B.mesentericus, Serratiamarcescens; бактерии рода Proteus; грибы рода Aspergillus, Mucor, Penicillium; анаэробы - C.sporogenes, C.putrificum; уробактерии - Urobacilluspasteuri, Sarcinaurea, расщепляющие мочевину;

2. нитрифицирующие: Nitrobacter(азотистую кислоту в азотную и нитраты) и Nitrosomonas (аммиак до азотистой к-ты, обр. нитриты). Развиваются только под конец, показатель самоочищения.

3. азотфиксирующие: усваивают из воздуха свободный кислород и из молекулярного азота синтезируют белки, используемые растениями;Azotobacter,Azomonas,Mycobacterium.

4. в круговороте серы, железа, фосфора и других - серобактерии, железобактерии.

5. бактерии, расщепляющие клетчатку, вызывающие брожение (молочнокислые, спиртовые, маслянокислые, уксусные, протионовые и др.).

Контаминация почвы.

– процесс загрязнения одного субстрата или биологического материала другим.

Окультуривание почвы к ув. микроорганизмов.

Очень богатые биотопы для сапротрофных = ризосфера (околокорневая) и ризоплана (поверхность корня).

Аутохтонная (утилизирующая почвенный гумус) микрофлора обладает санирующим действием.

Про патогенные

Листерии, возбудители рожи свиней и сибирской язвы - способны размножаться, большинство отмирает время.

Заражение от почвы.

-споры сибирской язвы с пищевыми продуктами, кормами.

-столбняк, газовая гангрена при загрязнении ран землей.

-споры Сlostridium botulinum в почве, навозе, на сырье для продуктов.

-возбудители дизентерии, холеры, брюшного тифа, сальмонеллезов, энтеровирусных заболеваний с загрязненными землей продуктами.

-грибы из Fusarium, попадая на злаковые, вырабатывают токсические вещ.

-грибы из Aspergillus на земляных орехах, зерновых культурах и кормах= токсическое вещ. - афлатоксин. Аспергиллез.

Санитарно–бактериологическое исследование почвы

Краткий анализ при проведении текущего санитарного надзора = определение ОМЧ, титров БГКП, энтерококков, C. perfringens, термофильных, нитрифицирующих=наличие и степень фекального загрязнения, состояние процессов самоочищения.

Полный при осуществлении предупредительного санитарного надзора =всех показателей + численности сапрофитов; ОМЧ и процентного содержания споровых; аэробных бактерий, аммонификаторов, токсичность почв для микроорганизмов.

Контроль не менее двух раз в год - весной и осенью, но не реже одного раза в год. При изучении динамики самоочищения на загрязнённых в течение первого месяца после загрязнения - еженедельно, в последующие - один раз до завершения самоочищения.

Отбор проб. Один — вблизи источника загрязнения, другой — в отдалении, пробы из 5 точек (4 — по углам участка, 1 — в цент­ре) на глубине 10...20 см стерильным совком в широкогорлые стеклян­ные банки с ватными пробками . Исследовать сразу или в течение 6... 18 ч, при не выше 1...5ºС.

В лаборатории измельчают, просеивают через сито, перемешивают и отвешивают 30 г. В колбу 500 мл наливают 270 мл стерильной воды и вносят пробу, встряхивают, готовят серию десятикратных последовательных разведений. В штатив нумерованные пробирки с 9 мл стерильной воды. В первую 1 мл суспензии про­бы, смешивают, затем 1 мл из первой во вторую и т. д.

Показатели - БГКП - общие колиформные, фекальные энтерококки.

-E.coli и Enterococcus faecalis = свежее фекальное загрязнение;

-Citrobacter, Enterobacter и Clostridium perfringens - давнее фекальное загрязнение.

-высокая численность сапрофитной -органическое загрязнение.

-высокий индекс БГКП при низких титрах нитрофикаторов, термофилов и высоком содержании вегетативных форм Clostridium perfringens, эетерококков=свежее фекальное.

-возбудителей кишечных инфекций, патогенных энтеробактерий и энтеровирусов = эпидемически опасно.

-при отсутствии патогенных и индексе СПМ до 10 клеток на 1 г =чистая.

-конц. колифага на 10 БОЕ/г = загрязнение.

Микробное число почвы - общее кол-во микроорганизмов в 1 г. Судят об общей численности сапрофитных на МПА и сусло-агаре.

Для коли-титра - элективные питательные среды= пептон и лактозу,желчь и генциановый фиолетовый= жидкая среда Кесслера+для улавливания газа поплавок. После суточной инкубации отбирают пробы с E.coli. Из отобранных высевы на Эндо, отмечают характерные темно-красные колонии, производят микроскопию.

Перфрингенс-титр почвы - наименьшее кол-во в г., в котором одна жизнеспособная клетка C.perfringens. Определяется макс. разведением почвенной суспензии, при посеве на железо-сульфитный агар (среду Вильсона-Блера) которого обр. черные колонии.. Молочные среды (среду Тукаева)=C.perfringens сбраживает лактозу, молоко створаживается, газ разрывает сгустки казеина и вытесняет в верхнюю часть пробирки. Для создания анаэробных условий быстро охлаждают, инкубируют при 44±10С в течение 16-18 ч. Проводят микроскопию колоний с последующей постановкой оксидазного теста.

Метод мембранной фильтрации= фильтрация 5-10 мл почвенной суспензии первого разведения (1:10) через мембранные фильтры. После окончания фильтрования фильтр переносят на питательную среду Эндо с добавлением розоловой кислоты. Чашки с фильтрами в термостат дном вверх и инкубируют 37±10С 24±2 ч.

Определение энтерококков.

Титрациоиный метод. Из разведений почвенной суспензии берут 10 мл и засевают во флаконы жидкой среды ЛПС или ЩЭС. Из среды накопления высев петлей на молочно-ингибиторной среде наличие аспидно-черных, выпуклых, с металлическим блеском (Е.faecalis) или сероватых мелких, плоских колоний (Е.faecium). Микроскопирование и каталазный тест.

Метод мембранных фильтров. Профильтровывают два-три десятикратных объема пробы. Фильтры с посевом на азидную среду или ЖСТ. На ЖСТ через 24-28 ч плоские крупные с ровными краями, белые или бледно-окрашенные с кремовым или розовым оттенком, малиновые Е.faecalis. На азидной - выпуклые с ровными краями, розовые, светло-розовые, равномерно окрашенные или с темно-красным нечетко оформленным центром.