4.Для накопления чистой культуры

5.консервирующие =предупреждают отмирание патогенов и подавляют рост сопрофитов=среда Тйга, Бенгсанга-Эллиота, цитрата натрия и дезоксихолата натрия.

Питательные среды продаются в виде концентратов, готовящихся следующим образом: 1) растворение навески в дистиллированной воде в известных пропорциях; 2) кипячение (около 1 мин) до полного растворения; 3) стерилизация в автоклаве (15 мин); 4) внесение добавок (селективных или стимулирующих); 5) разливка по стерильным чашкам Петри; 6) подсушивание застывших сред в термостате (30 мин). Готовые чашки Петри можно хранить в холодильнике в запаянных пакетах до 10 суток

Требования к питательным средам

1. должны содержать необходимые питательные вещества.

2. достаточную влажность

3. оптимальную рН (7,2-7,6).

4. изотоничность, для галофильных бактерий концентрация соли 1% и выше.

5. оптимальный электронный потенциал= сод. в среде растворенного кислорода. Высокий для аэробов и низким для анаэробов.

6. прозрачный, чтоб видеть рост, особенно в жидких.

7. стерильные.

Бактериологический метод диагностики.

Бактериологический=культуральный метод исследования включает: посев в питательные среды, выделение чистой культуры, идентификацию микроорганизмов

Если достаточно бактерий-на плотные среды, недостаточно-на жидкие обогащения.

Этапы.

Методы выделения чистых культур аэробных бактерий (1-й этап).

Для получения изолированных колоний и чистой культуры аэробных = посев на плотные питательные среды (в чашке Петри)→механическое разобщение отдельных микробных клеток. Посев секторами бактериологической петлей →в термостат при 37⁰С.

Для получения изолированных колоний и чистой культуры анаэробов = посев петлей секторами на специальные среды с последующим культивированием в анаэробных условиях.

Способы создания условий:

1. механическое удаление воздуха из анаэростата с заполнением газовой смесью (80% азота, 10% водорода, 10% углекислого газа);

2. газогенераторные пакеты с набором специальных реагентов (боргидрит натрия, винная кислота, бикарбонат натрия) в анаэростате.

Методы выделения чистых культур: Основанные на принципах механического разделения

Рассев шпателем по Дригальскому

Берут 3 чашки Петри с питательной средой. На первую петлей каплю материала и растирают шпателем по по­верхности агара. Шпатель переносят во вторую и втирают оставшуюся. Далее в третью. На первой вырастает макс.кол-во (сплошной pocт) на третьей – мин. в виде отдельных колоний.

Метод Фортнера

Посев на чашку с толстым слоем среды, разделенным пополам канавкой. В одну половину – аэробные, в другую- анаэробные. Сначала рост аэробов, потом они жрут О2 и на оставшемся растут анаэробы.

Метод истощающего штриха

1 чашка делится на 4 сектора и пет­лёй проводят ряд параллельных штрихов по 1 сектору, потом последовательно оставшимися все другие секторы. Про­исходит уменьшение кол-ва клеток. После рассева перевора­чивают вверх дном, чтобы конденсационная вода не мешала. В первых секторах - сплошной рост, вдоль после­дующих - обособленные колонии.

Метод Цейсслера

Для выделения спорообразующих анаэробов. Посев на среду Китта-Тарбцци, прогре­вают на водяной бане, заливают вазелином и инкубируют, споры сохраняются и при посеве прорастают.

Метод обогащения

Засевают на элективные питательные среды, способст­вующие росту определенного вида.

Метод заражения лабораторных животных

Для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой, или когда в исследуемом мало патогенных. После заражения забивают и кровь засевают на среду.

Метод Вейнберга для получения строгих анаэробов. Культуры с Китта-Тарбцци в сахарный бульон. Потом в узкие пробирки с сахарным МПА, потом охлаждают,инкубируют. При обнаружении интересного делают распил и засеивают.

Методы, основанные на биологических свойствах

Метод Шукевича

Для выделения подвижных. Засевают в конденсационную воду скошенного агара в про­бирке. При размножении подвижные формы из воды распространяются по агару. Из верхней час­ти роста производят высев в конденсационную воду свежей питательной среды. Производя таким образом несколько пересевов, в конце концов получают чистую культуру подвижной бактерии.

Метод ингибирования

Первый этап выделения чистой культуры

1. Из материала готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют.

2. Производят посев на чашки Петри с питательным агаром. В необходимости, разводят стерильным физиологическим раствором. Одну каплю петлей на пов. питательной среды в чашке Петри и втирают шпателем в среду, равномерно распределяя. После переворачивают дном кверху, подписывают и в термостат при 37ºС на 18-24 ч.

3. Посев на элективную питательную среду.

4. Посев на дифференциально-диагностическую среду.

5. Заражают лабораторных животных исследуемым материалом.

Способы культивирования бактерий:

Получение периодических культур:

Стационарный способ: питательные среды сохраняются постоянными, никаких дополнительных манипуляций не производят. В жидких питательных средах, где анаэробные энергетические процессы, выход биомассы незначителен.

Метод глубинного культивирования с аэрацией. Реакторы=герметические котлы, в которые заливается жидкая питательная среда. Автоматически поддерживает постоянную температуру, рН и Н2, дозированное поступление питательных веществ. Постоянно продуваются стерильным воздухом + перемешивание среды. Макс. выход биомассы.

Получение непрерывных культур:

Проточные питательные среды = условия, при которых клетки долго в экспоненциальной фазе роста при постоянных условиях, обеспечивающих непрерывный рост культуры.