15. Характеристика возбудителей гриппа.

Грипп или инфлюэнца - острое инфекц заб, характер поражением слиз оболочек верхн дых путей, лихорадкой, общей интоксикацией, нарушением деят серд-сосуд и нс. Грипп отличается склонностью к эпидемическому и пандемическому распростр благодаря высокой контагиозности и изменчивости возбудителя.

Характеристика возбуд. Возбуд - вирусы гриппа относится к сем. Orthomyxoviridae, родам Influenzavirus А, В и Influenzavirus С. Вирусы гриппа - это РНКвирусы.

Морфология. Вирусы гриппа имеют сферическую форму (форму шара) - 80 - 120 нм, реже имеют нитевидную форму. Состоят из: 1) сердцевина - нуклеокапсид спирального типа симметрии (однонитчатая линейная «-» - нить РНК + белковый капсид); 2) базальная мембрана - наружная липопротеидная оболочка - суперкапсид. На поверхности оболочки находятся гликопротеиды (в виде шипов и ворсинок) 2-х типов: 1) гемагглютинин - способствует прикреплению к рецепторам кл; 2) нейраминидаза — способствует освобождению вируса из клетки.

Культивирование. Для культивирования испол кур эмбрионы, первично трипсинизированные культуры кл, иногда лаб животных. Самой удобной моделью явл кур эмбрионы 10-12 -дневного возраста. Она позволяет получить большие кол-ва вируса, что необход при производстве вак и бакпрепаратов. Заражение производят в аллонтоисную полость, на хорион-аллонтоисную оболочку, в амниотическую полость, в амнион. Наличие вируса в кур эмбрионе выявляют в р-ции гемагглютинации. Антигенная структура. Вирусы имеют внутр антиген - S и поверхностные антигены: НА-гемагглютинин и NA-нейраминидаза. S-антиген - группоспецифич, общий для целого типа, по этому антигену вирусы гриппа делятся на типы А, В и С. Это комплементсвязывающий, стабильный (неизменяющийся) антиген. НА и NA-антигены - это специфич антигены. НА-антиген вызывает образование вируснейтрализующих антител и склеивание эритроцитов. NA-антиген вызывает образование антител, частично нейтрализующих вирусы.

Характерная черта этих антигенов — изменчивость (изменяются независимо друг от друга). Варьирование их структуры приводит к появлению новых серовариантов, часто во вр 1ой эпидемии. Выделяют 13 различных типов НА и 10 типов NA. Полная замена гемагглютинина или нейраминидазы приводит к возникновению нового антигенного варианта вируса - нового подтипа. В типе А выделяют 3 подтипа: подтип А1 – H1N1, подтип А2 -H2N2 и подтип А3- г. Подтип ai циркулирует с 1947 по 1957 г.г., подтип Аа- с 1957 по 1968 г.г., подтип аз -с 1968 по 1977 г.г. Изменчивость поверхностных антигенов обусловлена 2 генетическими процессами: дрейфом и шифтом. Дрейф - незначительные изменения антигенов (точечные мутации), не выводящие штамм за пределы подтипа, но сообщающие вирусу определенную степень антигенной новизны. Дрейф развивается в динамике эпидемического процесса и снижает специфичность иммунных р-ций, развившихся в популяции в результате предшествующей циркуляции возбуд. Шифт - полная замена того или иного антигена, в результате чего появл новый подтип. Шифт происходит в результате генетич рекомбинации между штаммами вируса чела и животных. Вирус типа В менее изменчив, а тип С отличается высокой стабильностью. Токсические св-ва. Токсическое действие вируса на орг (голов боль, мышеч боли, т, катаральные явления) обусловлено белками вируса (самой вирусной частицей). Это действие строго специфично и нейтрализуется только иммунной сывороткой соответствующего типа или подтипа или сывороткой переболевших.

Лабораторная диагностика.

Р-ция торможения гемагглютинации (РТГА)

Гемагглютинины вирусов склеивают эритроциты. Это св-во испл в р-ции геммагглютинации для индикации и титрования вирусов, что необходимо для последующей постановки РТГА.

Р-ция торможения гемагглютинации основана на блокаде антигенов вирусов (гликопротеиновых «шипов»-гемагглютининов) антителами иммун сыворотки, в результате чего вирусы теряют св-во агглютинировать эритроциты.

РТГА примен для диаг многих вирус инф, возбуд кот (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещ энцефалита) могут агглютинировать эритроциты различных животных.

Для этого испол микрометод РТГА в микропланшетах. При постановке р-ции испол разведения сыворотки крови, коммерческие диагностикумы вирусов гриппа и взвесь эритроцитов. Диагноз считается полож в случае 4хкратного увеличения титра антител в парных сыворотках, полученных с интервалом в 10-14 дней. Титр сыворотки в РТГА - это разведение сыворотки в последней лунке с полным торможением гемагглютинации.

Серодиагностика гриппа в РСК Тип р-ции: р-ция связывания комплемента • Исслед материал: сыворотка крови больного, поиск антител • Диагностич препараты: комплемент в рабочей дозе, гемолитич сыворотка в рабочей дозе, стандартные вирусы гриппа с известной антигенной структурой, эритроциты барана. Эритроциты и гемолитич сыворотка входят в гемолитич сис-му • Дополнительно указать: титр, механизм РСК • Примечание: нарастание титра Ат не может происходить одновр к вирусам гриппа А и В, поэтому к интерпретации реакции необходимо отнестись критично

Исслед материал: мазки-отпечатки со слиз носовой полости, отделяемое носоглотки, кусочки легких, мозга при летальных исходах. Методы диаг: 1) метод циториноскопии - обнаружение внутриклет включений, специфич для вируса - при окраске пиоктанином под микроскопом видны ярко-красные включения вируса гриппа в кл ресничного эпителия; 2) вирусологич метод - выделение вируса гриппа из орг чела путем заражения куриных эмбрионов смывом из носоглотки больного; индикацию (присутствие) вируса проводят при помощи РГА (вирусы гриппа агглютинируют эритроциты чела и различных животных), идентификацию вируса проводят поэтапно: тип определяют в РСК, подтип гемагглютинина - в РТГА, а подтип нейраминидазы - в р-ции ингибирования активности фермента; 3) серологич метод - обнаружение нарастания титра (в 4 раза) специфич антител в сыворотке крови больного с помощью РСК, РТГА, РН в культуре кл, р-ции преципитации в геле, ИФА; 4) биологич метод - интраназальное заражение мышей - введение материала в легкие под эфирным наркозом; мыши погибают через 2 — 3 дня в результате пневмонии; 5)экспересс-диаг - выявление вирусного антигена с помощью РИФ.

Лечение и проф. Для проф и лечения в 1ые дни болезни применяют человеч лейкоцитарный интерферон (интраназально). В лечебных целях испол противовир препараты - ремантадин (грипп типа А), адапромин, виразол и иммуномодулирующие препараты - дибазол, продигиозан, левомизол. При тяжелом течении гриппа, особенно у детей, применяют донорский противогриппозный иммуноглобулин, а также препараты - ингибиторы клет протеаз (гордокс, контрикал, аминокапроновая к-та). Спецпроф. Испол перечисленные противовирусные препараты и иммуномодуляторы, а также вак - живые и инактивированные: 1) живые моновакцины для перорального применения – аттенуированные штаммы вирусов, циркулирующих в наст вр (А1, А3 и В); проявл наиб иммуногенность; 2) цельновирионные вак из вирулентных штаммов, инактивир формальдегидом или УФ-лучами; 3) субъединичные гриппозные вак только из поверхностных антигенов - НА и NAантигенов (обладают минимальной реактогенностью). Для получения вак вирусы культивируют в кур эмбрионах и на культуре кл кур эмбрионов. При введении вак формируется местный и гуморал иммунитет. Вакцинацию осущ в периоды наибольшего риска развития эпидемий. Она в большей степени показана лицам младшего и преклонного возраста. Примен убитых вак требует ежегодной ревакцинации; их эффективность не превышает 60 - 70%. Т.к. часто наблюдаются антигенные вариации возбуд, то набор антигенов соответствующ вируса для иммунизации может быть определен только после начала вспышки заболевания.

Способность вируса гриппа к антиген изменчивости опред высокую восприимчивость населения и основ эпидемиолог особенности этой инф: повсеместное распростр, кор интервалы между эпидемиями (1 – 2 г для гриппа типа A и 2 – 4 – для гриппа типа В) и вовлечение в эпидемич процесс всех возрастных гр населения.

Внутр структуры вируса экранизированы от действия внеш среды и не изменяются. Изменчивость присуща антигенам суперкапсида, причем гемагглютинины и нейраминидаза изменяются независимо друг от друга благодаря 2 генетич механизмам – дрейфу и шифту. Антигенный дрейф(от англ слова дрейф –медленное теч) вызывает незначит изменения , обусловленные точечной мутацией, причем в большей степени происходит изменение структуры гемагглютинина. Это приводит к развитию штаммовых различий. В результате антигенного дрейфа могут возникать эпидемии (через 3-4- г). Шифт– (от англ слова сдвиг, скачок) – это полная замена гена, кот приводит к появл нового антигенного варианта вируса. Полагают, что шифт – это результат генетич рекомбинации, т.е.обмена генетич ин-ции между вирусами чела и животных, кот приводит к смене подтипа НА илиNА (а иногда – обоих). Такая изменчивость может привести к появл новых вариантов вирусов, способных вызывать пандемию.

Вирусы гриппа В и С лишены штифтовой изменчивости, поэтому вирусы Гриппа В редко вызывают эпидемии, а вирусы гриппа С обладают еще меньшей изменчивостью и вызывают спорадические заб или небольшие вспышки.

Для диаг гриппа испол след методы: - экспресс-методы обнаружения вируса; - выделение вирусов гриппа и их идентификация; - методы серологической диагностики.

В кач-ве экспресс-методов диаг гриппа испол РИФ, ИФА и ПЦР. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) или метод флюоресцирующих антител (МФА) позволяет обнаружить антигены вируса гриппа через 2-3 ч после отбора исслед материала. Для этого готовят препараты на стекле и обрабатывают их гипериммунными, люминесцентными сыворотками.

Микроскопирование проводят c помощью люминесцентного микроскопа.

Пораженные вирусом кл обладают специфическим свечением.

Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет обнаружить в исслед материале Родоспецифический антиген вирусов гриппа B. (рибонуклеопротеин) с помощью тест-систем, содержащих моноклональные антитела к рибонуклеопротеину (РНП) соответствующих вирусов. Моноклональные антитела сорбируют в лунках планшетов, после чего к ним последовательно добавляют исслед материал, конъюгат (антитела к РНП, меченые пероксидазой) и субстрат (смесь перекиси водорода с ортофенилендиамином). + результат проявл желтой окраской содержимого лунок. Интенсивность окраски измеряется с помощью спектрофотометров (ридеров). С помощью ИФА можно выявлять не только вирусный антиген, но и противовирусные антитела в сыворотке крови.

Полимеразная цепная р-ция (ПЦР) позволяет выявлять в исслед материале генетич последовательности вирусов гриппа и идентифицировать их методом электрофореза.

Выделен вирусов гриппа и их идентификация (вирусологич метод) проводится с испол кур эмбрионов или клет культур.

При испол 9-11-дневных куриных эмбрионов заражение проводят в амниотическую или аллантоисную полости. Из клет культур испол первич культуру кл почек обезьян, клетки почек собак и др.

Индикацию вирусов в амниотической или аллантоисной жидкости кур эмбрионов проводят с помощью р-ции гемагглютинации с эритроцитами морской свинки или чела. Индикацию вирусов в культуре кл осущ по цитопатическому д-вию (ЦПД), образованию "бляшек", "цветной пробе", р-ции гемагглютинации (РГА) и гемадсорбции. Идентификацию вирусов проводят по антигенной структуре. Чаще всего тип вирусов гриппа определяют в РСК, а подтип вируса - в РТГА.

Серологич диаг гриппа основывается на выявлении возрастания титра противовирусных антител в сыворотке крови в динамике заб. Для этого испол микрометод РТГА в микропланшетах. При постановке р-ции испол разведения сыворотки крови, коммерческие диагностикумы вирусов гриппа и взвесь эритроцитов. Диагноз считается + в случае 4хкратного увеличения титра антител в парных сыворотках, полученных с интервалом в 10-14 дней. Кроме РТГА для серологической диагностики используют также ИФА

Препараты для специфич леч гриппа: римантадин, амантадин, донорский нормальный Ig с высоким содержанием противогриппозных антител.

Специфич плановая проф состоит в применении вак. Вакцинацию проводят не менее чем за 1 мес до нач эпид сезона (сен-окт), чтобы успел сформироваться активный иммунитет. Вакцинация рекомендована прежде всего детям, лицам из гр высокого риска, персоналу лечеб учреждений и т.п разработано несколько разновидностей вак для проф гриппа а и б, приготовлен на основе штаммов, прогностически «актуальных» в данный эпид сезон, кот обновляются 1 раз в 2-3 года. В наст вр в россии для проф гриппа разрешены к применению живые вак, инактивированные цельновирионные вак, хим (в т ч полимер-субьединичная) и сплит-вак.