13. Характеристика хламидий

Возбуд – Chlamidia trachomatis, сем. Сhlamidiaсеае, отд. Gracilicutes. Характ возбуд Морфология и биология: мелкие бак, облигатные внутриклет паразиты. Они не способны синтезировать АТФ и размножаются только внутри кл хозяина, испол клет сис-мы генерации АТФ (энергетические паразиты). Внутри кл проходят цикл развития. Существуют в 2-х формах: 1) элементарные тельца (вне кл хозяина) - обладают инфекционностью — способны распознавать кл и проникать в них; 2) ретикулярные тельца (внутри кл) — более крупные (в 4-5 раз больше), активно синтезируют макромолекулы и делятся, образуя в вакуолях микроколонии; после формирования нового поколения внутри вакуоли (через 48 ч) ретикулярные тельца распадаются на элементарные, кл — хозяин погибает, новая популяция выходит из кл и заражает др чувствительные кл. Тинкториальные св-ва: грам ”-”. По Романовскому-Гимзе окрашивается в фиолетово-синий цвет с красными зернышками. Культивируется в куриных эмбрионах и культурах клеток.

Биохим св-ва: вне кл хозяина метаболические ф-кции сведены до минимума и трудны для выявления. Антигенная структура сложная; по антигенной структуре хламидии делятся на 15 сероваров. Возбуд урогенального хламидиоза принадлежат ко 2-ой гр, вкл серовары от Д до К. Ф-ры патогенности: все хламидии патогенны, но разные виды отличаются по вирулентности. относятся антигены клет поверхности, подавляющие защитные р-ции орг. Образуют также эндотоксины - липополисахариды и экзотоксины - термолабильные субстанции (вызывают гибель мышей после в/в введения). Резистентностьв: возбуд относительно нестоек. Инактивируется при действии 4 изических и хим ф-ров. Эпидемиология. Ист инфекции: больной чел с манифестной или бессимптомной формой заб или носитель. Более 5% мужчин и 10% женщин - бессимптомные носители. Механизм передачи: контактный и гемический. Пути передачи: 1) пол контакт; 2) контактно-бытовой путь; 3) вертикальный путь — от матери к плоду во время беременности; 4) при прохождении ребенка по родовым путям. Восприимчивость людей высокая. Наиболее часто — в возрасте от 17 до 30 лет. В наст вр это очень распростр заб (3 - 4 млн. чел). Удельный вес хламидийных уретритов составляет 42 - 63% подобных патологий.

Патогенез и клиника. Входные ворота эпителий слиз оболочек мочеполовых путей. В патогенезе выделяют 3 этапа: 1) инфицирование и первич размножение хламидий в эпителиальных кл слиз оболочек; 2) распр хламидий из первич очага - расползание инф от места попадания в результате внедрения в новые и новые кл (такой способ называется - по контакту); на этом этапе появл 1ые симптомы заб; 3) развитие ГЭТ в результате затягивания хламидийного процесса (н, при неадекватном лечении) при длит внутриклет паразитизме развивается сенсибилизация; наблюдающиеся при этом нарушения - следствие иммунопатологических р-ций. Клинич проявл зависит от локализации процесса: уретриты, простатиты, эпидидимиты — у мужчин; хламидийный цервицит и др воспалит гинекологич заб - у женщин. При длит теч - иммунопатологические состояния: узловатая эритема, артрит, болезнь Рейтера (уретрит+конъюктвит+артрит) - у мужчин; ухудшение фертильности, бесплодие, частое развитие внематочной беременности, хронич артриты, болезнь Рейтера - у женщин.

Лаб диаг: 1. Chlamydia trachomatis – проводят микроскопич и серологич исслед, ПЦР. Выделение возбуд на культуре кл, кот явл золотым стандартом диаг, в России не проводится. Материал для исслед – соскобы с эпителия уретры, цервикального канала, конъюктивы, из кот готовят препараты, окрашенные по Романовскому-Гимзе. В соскобах опред антигены хламидий с помощью РИФ и ИФА, а также хламидийную ДНК ПЦР. С помощью серологич исслед методом ИФА выявл в сыворотке крови IgM, IgA, IgG к видоспецифическому белковому антигену C.trachomatis. ИФА – наиболее достоверный метод; позволяет определить стадию развития заб и эффективность проводимого лечения.

2. Chlamydophila pneumonia – основной метод диаг – серологич. Антитела в сыворотке крови можно обнаружить только спустя 3 нед. до начала заб с помощью ИФА и РИФ. При первич инфекции определяются IgM, при реинфицировании – IgG. Применяется ПЦР. Бактериологическое исследование в РФ не проводится.

3. Chlamydophila psittaci – основной метод диаг – серологич. Определяют IgM с помощью РИФ и ИФА.

Лаб диаг трахомы осущ путем обнаружения специфических включений в кл эпителия конъюнктивы.

При паховом лимфогранулематозе и орнитозе изучают мазки материала, взятого от больного, окрашенные по Романовскому - Гимзе, с сывороткой больных ставят РСК. Используют внутримозговое заражение мышей, у кот развивается менингит со смертельным исходом.

Хороший результат дает аллергическая проба.

Препараты для лечения: 1. Chlamydia trachomatis – антибиотикотерапия с помощью препаратов тетрациклинового ряда и макролидов.

2. Chlamydophila pneumonia – лечение осущ а/б гр макролидов, фторхинолонами, препаратами тетрациклинового ряда.

3. Chlamydophila psittaci – применяют этиотропную антибиотикотерапию (а/б тетрациклинового ряда и макролиды).

Для лечения используют антибиотики и сульфамиды; при хронических формах орнитоза рекомендуют вакцинотерапию.

Проф. Спецпроф отсут. Общая проф — соблюдение всех правил проф для инфекций, передающихся половым путем. Для проф заражения новорожденных следует выявлять и адекватно лечить беременных.

По своим биохим св-вам хламидии занимают промежуточное положение между истинными бак и вирусами. Общие признаки хламидий с бактериями: структурная организация – содержание ДНК и РНК в характерном для бак сочетании: доля Г-Ц у С. trachomatis – 45%, C. psittaci – 40%. имеют рибосомы прокариотического типа - 70S, подразделенного на 30 S и 50 S. имеют клет оболочку, сходного с Гр «-» м/о. размножение путем бинарного деления. чувствительны к АБ тетрациклинового ряда, макролидам. Общие признаки хламидий с вирусами: абсолютные внутриклет паразиты, размножаются в цитоплазме кл хозяина. имеют ограниченные метаболические возможности – «энергетические паразиты» - не способны к синтезу АТФ и НАДФ. Хламидии получают АТФ из кл хозяина. Макромолекулярный синтез кл хозяина хламидиями тормозится и высокоэнергетические субстанции кл хозяина переходят на синтез протеинов и липидов хламидий. цитопатическое действие на клетки хозяина. особенности культивирования – в желточном мешке куриных эмбрионов и тканевых культур. Жиз цикл хламидий вкл образование 3х форм: 1. Элементарные тельца (ЭТ) – это зрелая форма, адаптированная к внеклет существованию, предст собой небольшие частицы размером 0,2-0,4 мкм, по Романовскому-Гимзе окраш в розовый цвет. ЭТ высокоинфекц, ответственны за процесс прикрепления к кл-мишени и проникновение в неё, устойчивы к неблагоприятным ф-рам внеш среды. В кл располаг в межклет пространстве. Выполняют вирулентную функцию.

2. Ретикулярные тельца (РТ) (=инициальные тельца) – предст собой внутриклет репродуктивные формы размером 0,8-1,5 мкм, по Романовскому-Гимзе окрашиваются в голубоватый цвет. РТ мало инфекционны, явл формой обеспечения репродукции микроорганизма.

3. Созревание РТ в ЭТ происходит через переходные формы – промежуточные тельца.

Цикл развития условно можно разделить на несколько этапов: 1. Абсорбция элементарного тельца хламидий на чувствительной кл хозяина. 2. Проникновение ЭТ в кл путём эндоцитоза. Участки плазмолеммы с адсорбированными на них ЭТ инвагинируются в цитоплазму с образованием фагоцитарных вакуолей (этот этап занимает 7-10 ч). 3. Реорганизация элементарного тельца в РТ, способные к росту и делению (этот этап длится 6-8 ч). 4. Деление ретикулярного тельца. Эти внутриклет формы, предст собой микроколонии, называются хламидийными включениями – тельцами Гальберштедтера-Провацека. Во включении может содержаться от 100 до 500 РТ хламидий (длит 18-24 ч). 5. Созревание РТ в ЭТ в течение 36-42 ч через переходные формы (промежуточные тельца). 6. Накопление ЭТ в эндосоме. 7. Выход ЭТ из клетки сопровождается гибелью кл.

Продолжительность полного цикла составляет 48-72 ч. По прошествии этого времени начинается новый цикл.

14. Общая характеристика вирусов, методов их культивирования, их индикации и идентификации.

Вирусы не имеют клет строения. Это неклет формы жизни. Они относятся к царству Vira. Размеры выражаются в нанометрах (нм); 1 нм = 10-3 мкм. Они не видны в световой микроскоп и проходят через бактериал фильтры.

Формы вируса: Вирион(Внеклеточная форма), Вирус( Внутриклеточная форма).

• Мелкие (17-25 нм)-Полиомиелит

• Средние (80-120 нм)-Грипп

• Крупные (300-400 нм)-Оспа

I гр - вирусы, имеющие спиральный тип симметрии. II гр - вирусы, имеющие кубический тип симметрии. III гр - вирусы, имеющие комбинированный (смешанный, сложный) тип симметрии.

Выделяют след формы вирионов по морфологии: - палочковидная форма характерна для вируса табачной мозаики; - пулевидная форма присуща вирусу бешенства; - сферическая форма отмечается у многих вирусов, в частности у герпесвирусов, вируса иммунодефицита чела; - нитевидная форма наблюдается у филовирусов; - овальная форма характерна для вируса натурал оспы; - сперматозоидная форма отмечается у бол-ва вирусов бактерий (бактериофагов)

В зависимости от вида нуклеин к-ты различают РНК - (рибовирусы) и ДНК - (дезоксивирусы) содержащие вирусы. Вирусы, паразитирующие в кл животных и чела, содержат ДНК или РНК; паразитирующие в кл растений – лишь ДНК. В зависимости от структуры и хим состава оболочки вирусы делят на простые и сложные. - прост вирусы (просто устроенные, безоболочечные, “голые”), сост из нуклеин к-ты и 1ой белковой оболочки - капсида;

Строение вириона. Морфологию и структуру вирионов изучают при помощи электронного микроскопа. Вирионы имеют размеры от 15-18 нм-300-400 нм и различную форму: палочковидная, пулевидная, сферическая и др Вирионы состоят из ДНК или РНК и белков. Это комплексы нуклеин к-т и белков - нуклеопротеиды. ДНК или РНК находятся в центре, а снаружи – 1 или 2 оболочки. Ф-ции ДНК или РНК - хранение и передача наследств инф-ции. Ф-ции белков: а) защитная ф-ция (белки капсида);б) стабилизация структуры нуклеин к-ты (внутр белки);в) ферментативная ф-ция; ферменты вирусной частицы участвуют в проникновении в кл (лизоцим, АТФаза и т.д.), в репликации и транскрипции (ДНК- и РНК-полимеразы). Если вирусы имеют 1 оболочку, они называются простыми. Эта оболочка состоит из белковых субъединиц – капсомеров и называется капсид. Нуклеин к-та и капсид вместе называются нуклеокапсидом. Если вирусы имеют 2 оболочки они называются сложными. 2ая оболочка называется суперкапсид. Суперкапсид образуется при выходе вируса из кл-хозяина, поэтому в его составе имеются углеводы и липиды мембраны этой кл. Липиды и углеводы сложных вирусов образуют комплексы с белками – липопротеиды и гликопротеиды. Они защищают вирусы от неблагоприятных условий. Гликопротеиды – вирусные антигены – гемагглютинины, кот вызывают р-цию агглютинации эритроцитов. В основу классификации вирусов положены след принципы: тип нуклеин к-ты, ее структура, кол-во нитей, размер и морфология вирионов, кол-во капсомеров и тип симметрии, наличие суперкапсида, чувствительность к эфиру и дезоксихолату, место размножения в кл, антигенные св-ва и др. Вирусы делят на 2 подцарства: ДНК-вирусы и РНК-вирусы. Название сем оканчивается на viridae, подсем – на virinae, рода - на virus. Вид вируса не получил бинарного названия как у бак. Н, вирус бешенства – РНК-вирус, относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus.

Взаимодействие вируса с кл. Размножение вирусов протекает внутри живой кл-хозяина. Нуклеин к-ты и белки синтезируются кл-хозяином раздельно в разных частях кл. После этого они объединяются друг с другом. Такой способ называется разобщенная или дизъюнктивная репродукция. Репродукция вирусов внутри клетки протекает в несколько стадий.

1. Адсорбция – прикрепление вирусов к поверхности кл на рецепторах. Для этого у вирусов также имеются специал поверхностные структуры (шипы). Они специфически прикрепляются к рецепторам клетки.

2. Проникновение в кл – вирусы проникают в кл 2мя способами: а) пиноцитоз; б) слияние вирусной оболочки с клет мембраной.

3. Дезинтеграция ("раздевание") – удаление оболочек и освобождение ДНК или РНК. Вирусная частица распадается на нуклеин к-ту и белки. В результате вирус нельзя обнаружить в кл никакими чувствительными методами, он как бы исчезает, растворяется. Это явление называется эклипс – "затмение".

4. Синтез ДНК или РНК и вирусных белков. Для репликации, транскрипции и трансляции испол: а) ферменты кл-хозяина; б) вирионные ферменты; в) вирусиндуцированные ферменты (инф-ция об их структуре содержится в геноме вируса, а синтез протекает внутри клетки).

5. Сборка (морфогенез) вириона – нуклеиновые кислоты и белки соединяются друг с другом.

6. Выход из кл – вирусные частицы выходят из клетки 2мя способами: а) одновременно через отверстия в мембране кл; б) почкование; при этом образуется суперкапсид у сложных вирусов. Выделяют несколько типов взаимодействия вируса с кл: а) продуктивный тип – активная репродукция с выходом вируса из кл; б) абортивный тип – образование вирионов внезапно прерывается на какой-то стадии; в) вирогения – встраивание (интеграция) нуклеин к-ты вируса в ДНК кл-хозяина. Встроенный вирус называется ДНК-провирус. В результате кл приобретает ряд новых св-в (могут возникнуть аутоимунные хронич заб, опухоли).

Характерные особенности вирусов

Сходство с живыми организмами	Отличия от живых организмов	Специфические черты, характерные только для вирусов
1. способность воспроизводить себе подобные формы (размножаться) 2. Обладают наследственностью. 3. Изменчивость. 4. Приспосабливаются к изменяющимся условиям среды	1. не прояляют свойства живого 2. Не потребляют пищи. 3. Не вырабатывают энергию 4. Не растут 5. Нет ов 6. Имеют форму кристаллов, не имеют клет строения, те нет цитоплазматической мембраны и цитоплазмы с органоидами	1. очень маленькие размеры 2. Прострое строение нуклеиновая к-та (днк или рнк) заключенная в белковую оболочку- капсид. 3. Занимают пограничное положение между живой и неживой материей. 4. Высокая скорость размножения 5. Наследственная инф-ция находится в днк или рнк 6. Вирусы- обязательные паразиты, вне кл хозяина существуют в виде вирусной частицы или вириона

Культивирование вирусов.

Вирусы – облигатные внутриклет паразиты. Они размножаются в живых кл и не растут на искусств пит средах, поэтому методы культивирования вирусов отличаются от методов культивирования бактерий. Методы культивирования.

1. На лаб животных. Заражают животных (п/к, в/м, внутрибрюшино), кот чувствительны к опред вирусам: хорьков - вирусом гриппа, кроликов - вирусом бешенства, обезьян - вирусом полиомиелита. Индикация (обнаружение) вируса проводится по признакам заб. Недостаток метода - не все вирусы можно культивировать на животных, н, животные невосприимчивы к вирусам чела.

2. В куриных эмбрионах. Заражают куриный эмбрион (аллонтоисная полость, хорион-аллонтоисная оболочка, амниотическая полость, желточный мешок, сам эмбрион). Куриный эмбрион – очень удобен. Он защищен от попадания др микробов (стерильный), техника работы с ним проста, можно накопить большое кол-во вирусов. Индикация: а) по специфич поражениям на хорион-аллантоисной оболочке, по гибели эмбриона, б) по р-ции склеивания эритроцитов – р-ции гемагглютинации (РГА). Недостатки метода: а)не все вирусы (вирус полиомиелита, вирус ящура) можно вырастить в куриных эмбрионах; б) невозможно обнаружить микроб без вскрытия эмбриона; в) в нем много загрязняющих белков и других соединений.

3. В тканевых культурах. Тканевые культуры или клет культуры – кл, выращенные вне орг на искусств пит средах. Для их приготовления испол чаще всего эмбриональные и опухолевые тк. Существуют 3 типа растущих ткан культур: а) однослойные тканевые культуры – кл прикрепляются и растут в виде сплошного монослоя по поверхности стекла лаб посуды; б) культуры суспензированных кл – кл растут и размножаются во взвешенном состоянии; в) органные культуры - кусочки органов животных и чела, выращиваемые вне орг. Однослойные культуры – основные культуры. Различают: а) первич – кл этой культуры делятся 1 раз, поэтому каждый раз необходимо вновь получать культуру тк; чаще всего испол эмбриональные тк и опухолевые тк взрослого чела; б) полуперевиваемые – кл делятся до 50 раз, сохраняя диплоидный набор хромосом; их можно перевивать несколько раз; испол диплоидные кл чела (фибробласты человеч эмбриона, диплоидные кл легких чела); в) перевиваемые – кл культуры постоянно делятся в условиях in vitro (вне орг), поэтому их можно перевивать непрерывно; их готовят из линий кл, кот хорошо размножаются в течение многих лет; чаще всего эти культуры получают из опухолевых кл. Получено около 200 штаммов таких кл: штамм L (из культуры мышиных фибробластов), штамм HeLa (из карциномы шейки матки), штамм Hep-3 (из лимфоидной карциномы) и т.д. Первич и перевиваемые линии клет культур м б загрязнены неизвестными вирусами, в т ч онкогенными, это ограничивает их применение, особенно в производстве вак. Все работы с культурами кл требуют строжайшего соблюдения правил асептики. К культуре кл добавляют а/б против бактериал загрязнения.

Опред вида и типа вирусов в вируссодержащем материале производится путём нейтрализации вирусов специфич сыворотками. Результат нейтрализации м б уст на основании след признаков: 1) нейтрализация ЦПД; 2) нейтрализация гемадсорбции; 3) задержка (торможение) гемагглютинации; 4) цветная проба;

5) свечение кл, содержащих вирус, под влиянием специфич флюоресцирующих сывороток; 6) нейтрализация в опыте на животных (у опытных животных инфекция не развивается).

Основ св-ва вирусов: 1)Ультрамикроскопические размеры.

2)Вирусы содержат нуклеин к-ту только 1го типа — или ДНК, или РНК. Все др орг содержат нуклеин к-ты обоих типов, а геном у них предст только ДНК. 3)Вирусы не способны к росту и бинарному делению.

4)Вирусы размножаются путем воспроизводства себя из собственной геномной нуклеин к-ты. Размножение всех прочих орг вкл стадии бинарного деления кл. 5)У вирусов отсут собственные сис-мы мобилизации энергии. 6)У вирусов нет собственных белоксинтезирующих систем.

7)В связи с отсут собственных сис-м синтеза белка и мобилизации энергии вирусы явл абсолютн внутриклет паразитами. Средой обитания вирусов явл бактерии, кл раст, животных и человека.

Размеры вирусов: -мелкие от 20 до 70нм -средние от 80 до 150нм -крупные от 150 и более

Для опред размеров вирусных частиц испол: фильтрование вируссодержащего материала через мембраны, ультрацентрифугирование, электрофорез, электронную микроскопию.

Фильтрование через коллодиевые мембраны. Метод основан на пропускании вируссодержащего материала через мембраны с известным размером пор. Размер вирусн частицы в данном случае опред весьма приблизительно.

Осаждение при ультрацентрифугировании. Многие способы опред размеров вирионов основаны на анализе скорости их движения в суспендирующей жидкости. Частицы, взвешенные в жидкости, оседают с разной скоростью, благодаря чему компоненты взвеси можно быстро разделить центрифугированием. Скорость осаждения частицы прямо пропорциональна разности плотности частиц и жидкости, квадрату угловой скорости и квадрату радиуса окружности и обратно пропорциональна вязкости жидкости. Скорость осаждения зависит от формы оседающих частиц.

- слож вирусы (сложно устроенные, оболочечные, “одетые”), содержащие кроме нуклеин к-ты и капсида внешнюю липопротеиновую оболочку (суперкапсид)