Лабораторная работа № 7 «выделение чистых культур бактерий и идентификация (изучение биохимических свойств)» (3 день)
Цель работы.
Ознакомление студентов с идентификацией чистых культур аэробных и анаэробных бактерий по ферментативным свойствам микроорганизмов для определения рода бактерий.
Педагогические задачи:
объяснить значение изученияферментативых свойств микроорганизмов в идентификации чистой культуры;
объяснить и показать изменения углевод и белок-содержащих сред (Клигер, Рессель, МПА) под действием ферментов микроорганизмов.
Результаты занятия
Студент должен знать:
ферментативные свойства аэробных и анаэробных бактерий;
среды для изучения ферментативных свойств и методы посева (Клигер, Рессель, МПА);
интерпретация полученных результатов.
Студент должен уметь:
определить ферментативные свойства аэробных и анаэробных бактерий в питательных средах;
использовать на практике полученные результаты.
Лабораторная работа. Изучение биохимических свойств бактерий в средах Гисса и Клигера.
Цель: Выделениечистых культур микроорганизмов и идентификация их по биохимическим свойствам.
Необходимое оборудование: Среда Клигера, культуры, выращенные в этой среде (по 2 набора), спиртовка, пипетка (по 6), термостат, микроскоп (2), этиловый спирт 960, набор красок (4 набора). Для демонстрации цветные схемы результатов определения биохимических свойств бактерий.
Шаги выполнения:
№
Выполняемая работа
Рисунки определения ферментативных свойств микроорганизмов
Выполнил полностью и точно (балл)
1
Учет результата посева чистой культуры в трехсахарную среду
10
2
При учете биохимических свойств обратить внимание на изменения в среде расщерление глюкозы (до кислоты без образования газа, с образованием газа), расщепление лактозы, записать результаты в тетрадь
15
3
Определить способность кишечных бактерий образовывать Н2S. Кишечные бактерии в среде Клигера (контроль среды Клигера, среда Клигера с образование Н2S)
15
4
Для дальнейшего изучения ферментативных свойств посев культуры из Клиглера в короткий ряд Гисса (для исследования ращепления глюкозы, лактозы, сахарозы, маннита, мальтозы и в МПБ для изучения протеолитических свойств - образование индола и Н2S)
15
5
Записать в тетрадь результаты посева кишечных бактерий в короткий ряд Гисса (демонстрационный материал из культуры бактерий брюшного тифа)
15
6
Записать в тетрадь результаты посева кишечных бактерий в короткий ряд Гисса (демонстрационный материал из культуры бактерий паратифа А)
15
7
Записать в тетрадь результаты посева кишечных бактерий в короткий ряд Гисса (демонстрационный материал из культуры бактерий паратифа В)
15
Итого
100
Лабораторная работа 2. Тесты на каталазу и оксидазу.
Цель: Изучение метаболических свойств выделенной чистой культуры бактерий для идентификация их.
Необходимое оборудование: Исследуемая культура микроба в МПА (E.coli, P.aeruginosa) – по 2 пробирки, спиртовки, пипетки, предметные стекла (по 6), 1-3 % ный пероксид водорода (по 3-4 мл в одной пробирке), бумажный диск с фенилендиамином ( во флаконе), резиновые пречатки, этиловый спирт 960.
Шаги выполнения:
№ |
Выполняемая работа |
Не выполнил (балл) |
Выполнил полностью и точно (балл) |
1 |
Приводится в порядок место работы и зажигают спиртовку, предметное стекло протирается ватным шариком и на спиртовке обезжиривается.
|
0 |
10 |
2 |
Предметное стекло кладется на мостик лотка и с помощью пипетки капают 1 каплю 3 % раствора пероксида водорода.
|
0 |
15 |
3 |
Берут чистую культуру E.coli из питательной среды в пробирке с помощью петли и перемешивают в 3% ый раствор пероксида водорода
|
0 |
15 |
4 |
Каталаза E.coli расщепляет водород пероксид на Н₂О и О₂. Выделение пузырьков кислорода показывает наличие каталазы у бактерий. |
0 |
10 |
5 |
Записывается результаты в тетрадь и место работы приводится в порядок. |
0 |
10 |
6 |
Для определения оксидазной активности у культуры P.aeruginosa берутся 2 диска с фенилендиамином и кладут на предметное стекло
|
0 |
15 |
7 |
На первый диск капают бульонную культуру P.aeruginosa, на второй на диск культуру E.coli. Бактерии P.aeruginosa расщепляют фенилендиамин и бумага окрашивается в синий цвет. Из-за отсутствия оксидазной активности у E.coli цвет диска не изменяется.
|
0 |
15 |
8 |
Записывается результаты в тетрадь и место работы приводится в порядок.
|
0 |
10 |
|
Итого |
0 |
100 |
Результаты идентификации выделенной чистой культуры по морфологическим, культуральным и ферментативным свойствам ( форма протокола)
Штамм №
|
Морфология |
Окрашивание
|
Каталаза |
Оксидаза |
Характер роста |
Биохимические свойства |
Род культуры или название
|
|||||||||||||
R |
S |
На бульоне |
Способность расщеплять |
Способность образовать |
||||||||||||||||
глюкоза
|
лактоза |
сахароза |
маннит |
индол |
H₂S |
плазмокоагулаза |
гемолизин |
|
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||