Лабораторные работы
1 – лабораторная работа. Постановка реакции пассивной гемагглютинации.
Цель лабораторной работы : Научить серологической диагностике инфекционных заболеваний.
Приборы и принадлежности : Термостат, спиртовка, пробирки для постановки гемаглютинации, спирт 96 %, сыворотка больного, эритроцитарный диагностикум, стерильный физ.раствор, вода (1 набор на трёх студентов)
Выполняемые ходы
№ |
Выполняемая работа
|
Не выполнил (балл) |
Выполнил (балл) |
||
1 |
Берется стерильная полистероловая планшетка. Держать сыворотку в 30 мин при 560С в водяной бане для инактивации комплемента. |
0 |
10 |
||
2 |
В первый ряд U –образных лунок планшетки микропипеткой капают по 0,1 мл физиологического раствора. |
0 |
10 |
||
3 |
В первую лунку капают микропипеткой 0,1 мл инактивированной сыворотки больного, тщательно перемешивают, затем с первой лунки берут 0,1 мл во вторую лунку, таким образом разводят содержимое лунок в соотношениях (1:2,1:4,1:8 и до 1:128 ), с последней лунки выливают в дез. раствор . |
0 |
15 |
||
4 |
Контроли ставятся в отдельных лунках – в первую ставят проверяемую сыворотку 0,1; в другую -нормальной сыворотки 0,1; и в след. диагностикум 0,1; |
0 |
10 |
||
5 |
Капают эритроцитарный диагностикум микропипететкой в каждую лунку с разведенной сывороткой больного по 0,1 мл |
0 |
15 |
||
6 |
В первую лунку контроля наливают не сенсабилизованную 1%суспензию эритроцитов по 0,1 мл. Во вторую контрольную- 0,1 мл эритроцитарного диагностикума. В третью контрольную - 0,1мл. физ раствора. |
0 |
15 |
||
7 |
Путем встряхивания об край планшетки тщательно перемещивают ингредиенты и держат планшет в термостате в 1,5 – 2 часа или оставляют при комнатной температуре сутки. |
0 |
10 |
||
8 |
Проводят учёт т результата реакции и записывают в тетрадь. |
0 |
15 |
||
Всего |
0 |
100 |
|||
2- лабораторная работа. Постановка реакции Вассермана (КБР) и оценка результата.
Цель: Знать значение реакции связывания комплимента при диагностике инфекционных заболеваний и применение полученных результатов.
Необходимые предметы: Штатив, пробирки, пипетки, стерильный изотонический раствор NaCl, сыворотка больного, кардиолипидный антиген, комплемент, эритроцтиты барана, гемолитическая сыворотка, термостат, холодильник, спирт 960 , ватные шарики и тампоны. (1 набор на трёх студентов)
Ход выполнения работы
№ |
Выполняемая работа
|
Техника выполнения |
Выполнил (балл) |
1 |
В штатив в один ряд ставим 7 сухих, чистых пробирок и номеруем |
|
10 |
2 |
В 1 и 4 пробирки наливаем 0,2 мл сыворотки больного, инактивированной при температуре 560С в течение 30 мин. на водяной бане и разведенной в соотношении 1:5 |
|
10 |
3 |
Наливаем по 0,2 мл во 2 пробирку положительную сыворотку крови, в 3 –ю отрицательную сыворотку крови |
|
10 |
4 |
Наливаем по 0,2 мл титрованного кардиолипидного антигена в 1-ую, во 2-ую, в 3-ую и 5-ую пробирки |
|
10 |
5 |
Добавляем изотонический раствор NaCl по 0,2 в 4-ю и 5ю пробирки, по 0,6 мл в 6-ю и 7ю пробирки |
|
10 |
6 |
Во все пробирки, кроме седьмой, добавляем по 0,2 мл рабочего раствора комплемента |
|
10 |
7 |
Инкубируем при температуре 370С или 0-40в течение 30 мин. |
|
10 |
8 |
Во все пробирки добавляем 0,4 мл гемолитической системы (1% эритроциты барана и гемолитическая сыворотка) (приготовленная в соотношении 1:1) |
|
10 |
9 |
Инкубируем при температуре 370С в течение 20-30 мин |
|
10 |
10 |
Берем штатив с пробирками и наблюдаем за результатами реакции. При учёте результатов идет сравнение с контролем. Протокол записывается в тетрадь. |
|
10 |
Результат |
0 |
100 |
|
