Тема лабораторной работы №12 «серологическая диагностика инфекционных заболеваний. Реакция агглютинации».
Цель работы.
Ознакомление методами серологической диагностики возбудителей инфекционных заболеваний и сероидентификации бактерий.
Педагогические задачи
- Напомнить о строении О-соматического, Н-жгутикового, К-капсульного антигенов, их свойства, значение в сероидентификации;
- Дать понятие о методах сероидентификации выделенных культур бактерий;
-объяснитьзначение серодиагностики в определении возбудителя инфекционных заболеваний.
Результаты лабораторной работы
-студент должен знать:
-строение О-соматического, Н-жгутикового, К-капсульного антигенов, их свойства, значение в сероидентификации;
- механизмы реакции антиген+антитела, их применение на практике и интерпретацию результатов реакции
Студент должен выполнить:
-определение О-соматического, Н-жгутикового, К-капсульного антигенов с помощью серологических реакций
-поставить развернутую реакцию Видаля и сероидентификацию выделенной чистой культуры бактерии на предметном стекле.
Лабораторная работа. Постановка развернутой реакции агглютинации.
Цель: с помощью реакции Видаля определение наличия и количества неизвестных антител в сыворотке крови больного с помощью известного антигена.
Необходимое оборудование: стерильные пробирки, сыворотка крови (больного), пипетки, стерильный физиологический раствор (по 3 набора), спирт 960 , агглютиноскоп, эксикатор с дез.раствором (по одному). Диагностикумы брюшного тифа, паратифов Аи В (3 пробирки по 5 мл)
Ход работы ( по шагам)
№ |
Выполняемые этапы
|
Схема выполнения |
Выполнил (балл) |
|
1 |
В штатив ставятся по 6 пробирок в 3 ряда |
|
10 |
|
2 |
В 1 пробирку налить 4,9 мл физиологического раствора. В остальные пробирки при помощи стерильной пипетки - по 1 мл физ. раствора |
|
10 |
|
3 |
В 1 пробирку капаем 0,1 мл сыворотки крови больного, образуется рабочее разведение (1:50) |
|
15 |
|
4 |
При помощи пипетки с 1 пробирки берем 1,0 мл жидкости переливаем во 2 пробирку (1:100),со 2 пробирки добавляем в 3. пробиркуи т.д титр до титра 1:800 |
|
15 |
|
5 |
С 5 пробирки берем 1 мл жидкости идобавляем в дез.раствор. Последняя пробирка для контроля диагностикума |
|
10 |
|
6 |
Во все пробирки, кроме 6, добавляем 0,1 мл антигена (диагностикума)(брюшнлй тиф-первый ряд, паратиф А- во 2 ряд, паратиф В – в 3 ряд пробирок)
|
|
15 |
|
7 |
Штатив с пробирками ставится в термостат на 24 часа при температуре 37ºС |
|
5 |
|
8 |
На следующий день учитываются результаты реакции с помощью агглютиноскопа. При положительной реакции в пробирках образуется хлопьевидный осадок. Интенсивность реакции определяется 4-мя(+), 3-мя (+)-положительная, 2-мя(+)-отрицательная. В контрольной пробирке агглютинации не наблюдается |
|
15 |
|
9 |
Диагностический титр реакции агглютинации (1:200 и выше). Результаты записываются в тетради. |
|
5 |
|
Итого: |
0 |
100 |
||
Приложение: Чтобы результат агглютинации был правильными, диагностикумы не должны быть просроченными. Для этого смотрят на дату производства диагностикума на ампуле. Диагностикум при встряхивании должен быть однородным и прозрачным. Кроме этого, в коробке, произведенного диагностикума имеется сыворотка крови больного, в качестве контроля с ним ставится реакция. Если все вышеуказанное соблюдено, то диагностикум можно применять на практике.
Лабораторная работа. Реакция агглютинации на предметном стекле для сероидентификации неизвестной культуры микроба.
Цель: проведение сероидентификации по антигенам О, Н, К иViс целью определения возбудителя
Необходимое оборудование: суточная чистая культура микроба (в чашечке Петри или в пробирке по2), штатив, предметное стекло, пипетки, физиологический раствор, поливалентная сыворотка сальмонелл по О-антигену и сыворотка крови (А,В,С,Д,Е), монорецепторная сыворотка крови по Н-антигену (b, r, i, c) в пробирке, агглютиноскоп, эксикатор с дез.раствором.
Ход работы ( по шагам)
№ |
Выполняемые задачи
|
Не выполнил (балл) |
Выполнил (балл) |
||
1 |
Обезжирывание предметного стекла над пламенем горелки |
0 |
10 |
||
2 |
Пипеткой Пастера на предметное стекло капаем поливалентную агглютинирующую О-сыворотку (А,В,С,Д,Е) по одной капле |
0 |
10 |
||
3 |
Пипеткой берем культуру неизвестного микроба и добавляем в каждую агглютинирующую сыворотку |
0 |
10 |
||
4 |
Для ускорения реакции агглютинации на предметном стекле, ее нужно нагреть над пламенем спиртовки и рассматривать результаты |
0 |
10 |
||
5 |
Реакция будет положительной только с одной сывороткой (А или В, или Д), при этом образуется хлопьевидный осадок. Результаты записываются в тетради |
0 |
10 |
||
6 |
На втором этапе реакции берем монорецепторные агглютинирующие анти Н-антиген сыворотки и добавляем по одной капле сыворотки против паратифа В (b, r, i, c) |
0 |
10 |
||
7 |
Петлей берем культуру неизвестного микроба и смешиваем стерильно с агглютинирующей сывороткой по отдельности |
0 |
10 |
||
8 |
Для лучшего протекания реакции агглютинации нагреваем над племенем спиртовки и смотрим результат |
0 |
10 |
||
9 |
Реакция будет положительной только с одной сывороткой и при этом образуется хлопьевидный осадок. Результаты записываются в тетради |
0 |
10 |
||
10 |
После проведения работы предметные стекла обеззараживаются в дез.растворе эксикатора. Вывод об антигенной структуре возбудителя записывается в тетрадь. |
0 |
10 |
||
Результат: |
0 |
100 |
|||
Приложение:Указывается производитель агглютинирующих сывороток крови, применяемых для сероидентификации и он должен соответствовать указанной инструкции.