Определить отдельные структуры бактерий;
Приготовить мазок из зубного налёта и окрасить по методу Бури;
Уметь окрашивать методами: Романовский-Гимза, Нейссер;
Лабораторные работы:
1. Изучение бактерий при помощий сложных методов окрашивания. Метод Романовский-Гимза.
2. Изучение бактерий при помощий сложных методов окрашивания. Метод Нейссер.
3. Изучение морфологии спирохет, приготовления мазка из зубного налёта, окрашивание по методу Бурри.
Лабораторная работа.Изучение бактерий при помощий сложных методов окрашивания. Метод Романовский-Гимза.
Цель лабораторной работы:приготовление мазка, окрашивание бактерий сложными методами, изучение морфологий спирохет, риккетсий и хламидий под микроскопом.
Необходимые принадлежности:световой микроскоп, культура микроорганизмов, краситель Романовский-Гимза, 960этиловый спирт,иммерсионное масло, предметные стёкла, фильтровальная бумага, петля, спиртовка, пипетки, штатив, лоток, чистая вода в колбе, физиологический раствор (один набор для 2-3 студентов) диогностикум риккетсиоза в пробирке.
Порядокработы (шаги)
-
№
Выполняемы действия
Не выполнено.
Выполнено точно и до конца.
1
Обезжирить предметное стекло
0
10
2
Приготовить мазок из диогностикума риккетсий
0
10
3
Высушить мазок над спиртовкой
0
10
4
Фиксировать метилиновым спиртом 3мин или над пламенем спиртовки.
0
20
5
При комнатной температуре продержать 20-30 мин. Окрасить красителем Романовский-Гимза.
0
10
6
Смыть водой и высушить при комнатной температуре.
0
10
7
Рассматривать под микроскопом с иммерсионным маслом
0
10
8
Изучать морфологию риккетсий под микроскопом и зарисовать в тетрадь.
0
20
ВСЕГО
0
100
Лабораторная работа.Изучение бактерий при помощий сложных методов окрашивания. Метод Нейссер.
Цель лабораторной работы:приготовить мазок, окрасить сложными методами, рассмотреть под микроскопом зёрна волютина возбудителя дифтерии.
Необходимые принадлежности:световой микроскоп, краситель Нейссера,960этиловый спирт, иммерсионное масло, предметные стёкла, фильтровальная бумага, петля, спиртовка, пипетки, штатив, лоток, чистая вода в колбе, физиологический раствор( один набора на 2-3 студентво), культура дифтериоидов в пробирке.
Порядокработы (шаги)
-
№
Выполняемы действия
Не выполнено.
Выполнено точно и до конца.
1
Обезжирить предметное стекло
0
5
2
Приготовить мазок из культуры дифтериоидов.
0
15
3
Высушить мазок над спиртовкой
0
5
4
Фиксировать мазок над спиртовкой
0
5
5
Окрасить мазок синькой Нейсера на 1 мин
0
20
6
Смыть краситель водой и держать 20-30 сек в растворе Люголя.
0
15
7
Вылить раствор Люголя и на 1-3 мин окрасить везувином.
0
15
8
Промыть водой, высушить, рассмотреть в иммерсионной системе под микроскопом и зарисовать увиденное в тетрадь.
0
20
ВСЕГО
0
100
Лабораторная работа.Изучение морфологии спирохет, приготовления мазка из зубного налёта, окрашивание по методу Бурри.
Цель лабораторной работы:Приготовить мазок из зубного налёта и окрасить по методу Бурри и найти в мазке спирохет.
Необходимые принадлежности:световой микроскоп, культура микроорганизмов, туш(разведение 1:10), 960этиловый спири, иммерсионное масло, предметные стёкла, фильтровальная бумага, петля, спиртовка, пипетки, штатив, лоток, чистая вода в колбе, физиологический раство( один набор на 2-3 студентов), стерильная зубочистка для взятия зубного налёта (6штук).
Порядок работы (шаги)
-
№
Выполняемые действия
Техника выполнения
Выполнено точно и до конца.(балл)
1
Обезжирить предметное стекло и нанести одну каплю туши на край стекла.
20
2
Взять материал зубного налёта при помощи стерильной петли и размешать с тушью.
20
3
Приготовить мазок растирая при помощи стекла с гладкой стороной (как мазок крови)( метод Бури)
20
4
Высушить при комнатной температуре и фиксировать (над пламенем спиртовки или метиловым спиртом)
20
5
Нанести одну каплю иммерсионного масла и рассмотреть под микроскопом. Увиденное зарисовать в тетрадь.
20
ВСЕГО
100
Примечание: Возможные ошибки при окрашивании по методу Бурри-Гинс и Циль-Нильсена, их значение и избежание ошибок.Во всех трёх методах и при приготовлении мазка взятие лишнего колличества патологического материала приведёт к не правильно приготовлению препарата и не качественному окрашиванию.
По методу Бурри необходимо быть осторожным при перемешивании культуры микрооргнанизмов с тушью, если предметное стекло было не достаточно обезжирено туш начнёт скапливаться в одном места, а это это приведёт к некачественному окрашиванию А так же очень толстое нанесение слоя туши значительно повлияет на исход окрашивания.
№1.Возбудитель дифтерии №2. Спирохеты 3№. Риккетсии
Тема лабораторной работы № 5
“ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ АЭРОБНЫХ И АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ”
Цель лабораторной работы.
Ознакомить с методами выделения аэробных и анаэробных культур бактерий и с питательными средами для выращивания культуры микроорганизмов в лабораторных условиях.
Задачи педагога:
Объяснить особенности выделения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий.;
Показать и объяснить методы посева на питательные среды патологического материала и их значение;
Итоги занятия
Студент должен знать:
Принципы выделения чистой культуры аэробных и анаэробных бактерий;
Правила приготовления питательных сред;
Правила транспортировки биоматериалов в лабораторию;
Методы посева на питательные среда биоматериалов;
Студент должен уметь:
Приготовить твердые и жидкие питательные среды;
Производить посев на питательные среды различными методами (штрих, Гольд, сектор)
Лабораторная работа.Выделение чистой культуры аэробных и анаэробных бактерий, приготовление твёрдых и жидких питательных сред, методы посева патологического материала(выделение чистой культуры 1 день).
Цель работы: Ознакомить с выделением чистой культуры бактерий и диагностикой бактериологическим методом инфекционных заболеваний.
Необходимое оснащение: Твёрдая питательная среда в чашке Петри, жидкая питательная среда,патологический материал, петля, спиртовка, пипетка, термостат, 960 этиловый спирт.
Посевыпатологического материала.
Порядокработы (шаги)
№ |
Выполняемые действия |
Техника выполнения |
Выполнил точно и до конца |
1 |
Пробирку с 20 мл вскипячённого МПА держат в правой руке,а левой рукой открывают возле пламени спиртовки стерильную чашку Петри и аккуратно помещают в неё МПА.Чашка равномерным круговым движением взбалтывается, закрывается и оставляется до затвердения.(Таким же образом готовятся питательные среды Эндо, Плоскирёва, Левина). |
|
20 |
2 |
Для приготовления скошенного МПА необходимо несколько пробирок и 5 мл вскипячённого МПА. Наливают в пробирки МПА и укладывается в специально оборудованный штатив под углом 400и оставляют до полного затвердения при комнатной температуре
|
|
20 |
3 |
Чашку Петри с приготовленным в нём МПА оставляют в аудитории на 10 мин с открытой крышкой(метод седиминтации), затем закрывают крышку, пишут число и помещают в термостат. |
|
10 |
4 |
Правой рукой нагревают бактериологическую петлю и берут патологический материал. Затем большим пальцем левой руки, в которой располагается питательная среда( Эндо, МПА), открывается крышка, приподнимая вверх и производится посев штрихом петлёй на поверхность агара. Закрывается крышка чашки, указывается дата и помещается в термостат. |
|
20 |
5 |
Правой рукой нагревают бактериологическую петлю и берут патологический материал.В левую руку взять питательную среду Китта- Тароцци и держать под углом 400 Открыть пробку пробирки над пламенем горелки и аккуратно не задевая масла произвести посев. Пробка пробирки прогревается над пламенем спиртовки и закрывается. Указать дату посева и поместить в термостат. |
|
20 |
6 |
В жидкую питательную среду так же как показано выше производится посев пипеткой или петлёй( при необходимости использовать резиновую трубку или грушу). Пробка пробирки прогревается над пламенем спиртовки и закрывается. Указать дату посева и поместить в термостат. |
|
10 |
ВСЕГО |
0 |
100 |
|
Примечание: Допущенные ошибки при выделении чистой культуры бактерий, их значение и устранения повторов.
Допускаемые ошибки при приготовлении МПА:
Чашка Петри и пробирки должны быть стерильны, в противном случае в приготовленном пластиночном МПА или в скошенном агаре могут вырасти други культуры микроорганизмов.
Питательные среды обязательно должны пройти фильтрацию перед стерилизацией, в прозрачной питательной среде выросшие микроорганизмы лучше видны.
При приготовлении МПА колличество агар-агара должно составлять более 2%, в противном случае МПА хорошо не затвердеет и будут трудности при посеве патологического материала.
Допускаемые ошибки при посеве патологического материала:
- Нельзя производить посев в чашку Петри со свеже приготовленной средой, т.к. капли конденсата на поверхности среды дадут ползучий рост, т.е. сливание бактерии, которые покроют всю поверхность агара, и при этом невозможно будет взять чистую культуру;
- Для избежания этого на поверхность питательной среды наносят 2-3 мл 960 спирта и хорошо промывается и выливаеся, затем чашка Петри в перевёрнутом виде на 10-15 мин помещается в термостат и только после этого можно производить посев.
- На поверхность пластинчатого агара при помощи бактериологической петли производится посев штрихом, при этом производится большое количество штрихов петлёй на половине агара, а на остальнуюповерхность производятся штрихи в одинакомколичестве по секторам, в противном случае колонии микроорганизмов слипнуться и не образуют отдельные колонии.