Лабораторная работа №18
“ИНДИКАЦИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИРУСОВ. РЕАКЦИИ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ И ТОРМОЖЕНИЯ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ”
Цель лабораторной работы.
Выделение вирусов в лабораторных условиях и ознакомление студентов с методами индикации и идентификации вирусов.
Задачи педагога:
- ознакомить с методами выделения вирусов в лабораторных условиях и их индикации, объяснить их значение;
- объяснить методы идентификации вирусов, их значение в лечении и профилактике вирусных заболеваний.
Результаты занятий
Студент должен знать:
- Строение вирусов, патогенез вирусных инфекций и методы выделения вирусов из патологического материала;
- Методы индикации и идентификации вирусов.
- Значения гемагглютинации и реакции торможения гемагглютинации в индикации и идентификации вирусов.
- Анализ результатов и применение их на практике.
Студент должен уметь:
- Ставить реакцию гемагглютинации для идентификации вирусов.
- ставить реакцию торможения гемагглютинации для идентификации вирусов.
- Анализировать результаты идентификации и применить их на практике.
Лабораторная работа. Постановка РГА.
Цель: Определить наличие вируса в аллантоисной жидкости, индикация вируса.
Необходимое оборудование:вируссодержащая аллантоисная жидкость (в двух пробирках), 1 % взвесь эритроцитов (в трех пробирках по 5,0 мл), штатив (3 шт.), пробирки, планшет (3 комплекта), пипетки Пастера, резиновый груши (6 комплект), физ. раствор, 96о спирт (20 мл)
Последовательность
№ |
Выполняемые действия
|
Не выполнил |
Выполнилправильно (балл) |
1 |
Берется зараженныйкуринный .эмбрион |
0 |
5 |
2 |
С помощью стерильной пипеткой Пастера берется аллантоисная жидкость из эмбриона |
0 |
20 |
3 |
Аллонтоисную жидкость разбавлают от 1/2 до 1/512 в пробирках или в планшетах |
0 |
20 |
4 |
В контрольную пробирку наливают незараженную аллантоисную жидкость и физ.раствор. |
0 |
5 |
5 |
В каждую пробирку капают по 0,2 мл, а в планшеты 0,1 мл 1% ных куринных эритроцитов отмытых в физ.р=ре центрифугированием. |
0 |
10 |
6 |
Пробирка или планшет оставляют в течение 40 мин при комнотной температуре. |
0 |
5 |
7 |
Через 40 мин. изучается результат реакции: положительная - на дне пробирки можно увидеть тонкую пленку в виде зонтика, соединенную эритроцитами. Определяется титр вируса по наличию полного или неполного зонтика |
0 |
25 |
8 |
Полученный результат записывается в тетрадь в виде протокола. Иследуемые пробирки и планшеты оставляются в холодилник на 6-12 часов и проводится окончательный учет результатов. |
0 |
10 |
Всего |
0 |
100 |
|
Рисунок 73.
Лабораторная работа. Постановка РТГА.
Цель: Провести идентификацию вирусов методом РТГА.
Необходимое оборудование:вируссодержащая аллантоисная жидкость (в двух пробирках), 1 % эритроциты (в трех пробирках по 5,0 мл.), диагностические сыворотки (HON1, H2N2,H3N2) (по одной пробирке), штатив (3 шт.), пробирки, планшет (3 комплекта), пипетки Пастера, резиновая груша (6шт), физ. раствор, 96о спирт (20 мл)
Последовательность
№ |
Выполняемые действия
|
Не выполнил |
Выполнил правильно (балл) |
1 |
в 3 ряда пробирки или планшета разводятся диатностические сыворотки (HON1, H2N2,H3N2) от 1/2 до 1/128 |
0
|
20 |
2 |
Берутся 3 контрольные пробирки: 1-ая для сыворотки, 2-ая для вируса , 3- физ.р-р |
0 |
10 |
3 |
Во все пробирки по 0,2 мл, а в лунки планшетапо 0,1 мл рабочей дозы (1/128) вируса и в контрольную для вируса. |
0 |
20 |
4 |
Во все пробирки по 0,2 мл, в планшет по 0,1 мл добавляется 1% суспензия эритроцитов кур |
0 |
20 |
5 |
Оставляют на 60 мин при комнатной температуре |
0 |
10 |
6 |
Изучается полученный реаультат, записывается протокол в тетрадь. Иследуемые пробирки и планшеты оставляются в холодилник на 6-12 часов, затем проводиться окончательный анализ результатов. |
0 |
20 |
Всего |
0 |
100 |
|
Полученные результаты показывают, что пробирки во втором ряду 1/128 полностью нейтрализованы Н2N2. Изучаемый вирус - Н2N2.