Лабораторная работа№ 9
“ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТИТР БАКТЕРИОФАГА МЕТОДОМ ПОСЛОЙНОГО АГАРА”
Цель занятия.
Усвоить использование бактериофагов в идентификации возбудителя инфекций.
Педагогические задачи:
- указать на современные методы выделения, физиологические свойства, виды фагов и объяснить их значения в медицинской практике;
- определение фаговаров при бактериологической диагностике возбудителей инфекционных заболеваний, значение их в идентификации и оценке эпидемиологической ситуации;
- показать методы, значение и механизмы определения фаговаров бактерий;
- объяснить использвание фагов для лечения и профилактики заболеваний.
Результаты занятия
Студент должен знать:
современные методы выделения, физиологические свойства, виды фагов и их значение в медицинской практике
применение фагов (моно-, поливалентные) при идентификации возбудителей инфекционных заболеваний;
знать методы определения фаговаров бактерий;
знать цель использвания фагов при лечении и профилактике заболеваний.
Студент должен уметь выполнить:
определение фаговаров бактерий;
использование фагов в практической деятельности для лечения и профилактики инфекционных заболеваний.
Лабораторная работа.Определение титра бактериофага Т4 методом послойного агара.
Цель: Обучить выделению бактериофага и определению его титра.
Необходимое оборудование:бактериофагТ4, агарная культура E. coli, стерильные флаконы или пробирки - 10шт., 3 мл ые пробирки с полужидким агаром - 10 шт., стерильная дистиллированная вода, спиртовка, резиновая груша, стерильные пипетки 12-15 шт., резиновая перчатка, физиологический раствор. Работа проводится в стерильных условиях.
Шаги выполнения:
№ |
Выполняемая работа |
Схема выполнения |
Выполнил полностью и точно (балл) |
|
1 |
С помощью пипетки в каждую пробирку наливают по 9 мл дистилированной воды и записывют титр разведения на пробирках с 10-1 до 10-10
|
|
10 |
|
2 |
С помощью пипетки в стерильные пробирки наливают по 3 мл 0,7%ый полужидкого агар и надписывют титр разведения с 10-1 до 10-10
|
|
10 |
|
3 |
Берут 1 мл суспензии бактериофага с помощью пипетки и добавляют в 10-1 стерильную воду во флаконе и перемешивают
|
|
10 |
|
4 |
С помощью пипетки берут 1 мл смеси бактериофага и воды из первой пробирки и наливают во вторую пробирку и так титруют до 1010, каждый раз хорошенько перемешивая. При взятии материала из пробирки для каждого разведения используют стерильные пипетки
|
|
15 |
|
5 |
Наливают во все флаконы 0,5мл суспензии, проготовленной из агаровой культуры E. сoli (специфичная для Т-4 фага) |
|
15 |
|
6 |
В пробирки с полужидким агаром наливают суспензию из E. сoli и Т-4 фага по 0,2 мл и осторожно перемешивают между ладонями
|
|
15 |
|
7 |
Их наливают в плотный агар в чашках Петри, в которых подписаны разведения и медленно вращают чашечки для равномерного распространения полужидкого агара по поверхности плотного агара. |
|
10 |
|
8 |
Посевы ставят в термостат на 18-24 ч, затем изучают результаты. Определяют титр фага Т-4 и записывают в тетрадь. |
|
15 |
|
ИТОГО |
100 |
|||
Определение фаготипа культуры стафилококка
- посев методом газона в питательную среду суточной чистой культуры стафилококка
-немного подсушивается в термостате
-в каждый квадратик вливаем пипеткой опеределенные фаги свойственные 4 группам.
- инкубируем в термостате сутки
-смотрим в каком квадрате происходит лизис
Определение фаготипа стафилококка производим по образовавшемуся лизису
Набор сухих фагов стерильно растворяют в щелочном бульоне (Мартена, Хоттингера или мясопептонном рН — 7,6) с 0,4% глюкозы и 0,02% СаСО. Добавляют 1 мл бульона, получают разведение фага 1 : 10, из которого готовят два рабочих разведения, соответствующие тест разведению (TP), и 100 TP разведение, соответствующее 1 TP, указанному на этикетке фага. Первое рабочее разведение фатов (1 TP) следует готовить заново каждые 7—10 дней.