101. Возбудитель туберкулеза. Биологические свойства, факторы вирулентности. Особенности патогенеза. Принципы лабораторной диагностики.

Туберкулез – первично-хроническое забоелвание человека и животных, вопровождающееся поражением различных органов человека и систем (Дых, лимф узлы, кишечник, кости , суставы)

Основу патологического процесса составляет образование специфических гранулем, представляющих собой воспалительную реакцию тканей, имеющих вид узелка, бугорка.

Вызывают туберкулез микобактерии объединенные в комплекс Mycobacterium tuberculosis, включающий следующие виды М. tuberculosis, M. bovis, M. africanum.

Морфология

Характерен выраженный полиморфизм. M. africanum и М. tuberculosis имеют форму длинным, тонких или более коротких толстых M. bovis прямых или слегка изогнутых палочек с гомогенной или зернистой цитоплазмой. Гр+, неподвижны, спор не образуют.

Клеточная стенка имеет сложное строение. Первичный каркас клеточной стенки образуют перекрестно связанные пептидогликаны. Его дублирует слой арабиногалактанов, формирующий полисахаридную строму клетки, характеризующуюся относительно постоянным составом. Он имеет точки связывания с пептидогликаном, а также миколовыми кислотами и их производными. Наружные слои представлены в основном липидами и имеют меняющийся химический состав.

Из-за большого количества липидов в клеточной стенке, солержащих миколовую кислоту, они плохо воспринимают анилиновые красители. Для их выявления применяют окраску кислото-. спирто и щелочеустойчивых бактерий по Цилю-Нельсену, в основу которой положен принцип термокислотного протравливания.

В препаратах микобактерии обнаруживаются в виде ярко-красных кислотоустой чивых палочек, расположенных поодиночке или небольшими скоплениями из 2-3 клеток в виде римской цифры пять.

Культуральные свойста.

Облигатные аэробы. Растут медленно из-за наличия в клеточной стенке липидов, замедляющих обмен веществ с окружающей средой. Оптимальная температура роста 37-38ºС. Оптимальное значение рН 6,8-7,2. Микобактерии требовательны к питательным средам, глицеринзависимые.

Элективные питательные среды для микобактерий среды Левенштейна-Йенсена, Финна-2;

На плотных средах на 15-20 день инкубирования микобактерии образуют шероховатые плотные колонии кремового цвета бородавчатого вида (напоминают цветную капусту).

В жидких средах через 5-7 дней на поверхности образуется толстая сухая морщинистая пленка кремового цвета. При этом бульон остается прозрачным.

Биохимические свойства.

М. tuberculosis – обладает каталазной активностью, уреазой, никотинаминидазой, восстанавливает нитраты, накапливает в среде ниацин( ниациновый тест Конно – среда желтеет).

M. bovis – тоже обладает уреазой, но не восстанавливает нитраты, не продуцирует никотинаминидазу и не накапливает ниацин.

Резистентность.

В высохшей мокроте больного клетки сохраняют жизнеспособность и вирулентность в течение 5-6 месяцев. На предметах больного сохраняются более 3 месяцев. В почве сохраняются до 6 месяцев, в воде – до 15 месяцев. Солнечный свет вызывает гибель микобактерий через 1,5 часа, УФЛ – через 2-3 минуты. При пастеризации погибают через 30 минут. Хлорсодержащие препараты вызывают гибель возбудителей туберкулеза в течение 3-5 часов, 5%- ный раствор фенола - через 6 часов.

Эпидемиология.

Туберкулез распространен повсеместно.

Основной источник инфекции - больной человек с туберкулезом органов дыхания, выделяющий микробы в окружающую среду с мокротой.

Источниками инфекции могут также быть люди с внелегочными формами туберкулеза и больные животные (крупный рогатый скот, верблюды, свиньи, козы и овцы). Основной механизм заражения – аэрогенный.

Пути передачи возбудителя - воздушно-капельный и воздушно-пылевой. Входными воротами при этом является слизистая оболочка полости рта, бронхи и легкие

Проникнув в организм человека, микобактерии фагоцитируются.

В фагоцитах формируются фагосомы, внутри которых микобактерии остаются живыми и размножаются. В фагоцитах микобактерии транспортируются в регионарные лимфатические узлы, сохраняясь длительное время в “дремлющем” состоянии (незавершенный фагоцитоз). При этом происходит воспаление лимфатических путей (лимфангоит) и лимфатических узлов (лимфаденит).

Вместе внедрения возбудителя формируется очаг воспаления. Это воспаление в течение нескольких недель приобретает специфический характер (развивается реакция гиперчувствительности замедленного типа), в результате чего формируется гранулема. В последующем происходит трансформация макрофагов в эпителиоидные клетки.

При слиянии эпителиоидных клеток образуются гигантские многоядерные клетки. Вокруг очага воспаления формируется соединительнотканная капсула, некротизированные ткани обызвествляются.

В результате этого происходит формирование первичного туберкулезного комплекса, внутри которого находится казеозная некротизированная ткань и остаются живые микобактерии.

Диагностика.

Клинический материал – мокрота, слизь с задней стенки глотки, гной, с/м жидкость.

Методы:

1) Микроскопия – окраска по Цилю-Нильсену.

2) Бактериологический – посев на плотные среды Ливенштейна- Йенсена. В среднем, при посеве диагностического материала для получения роста МБТ на плотных питательных средах требуется 21-36 дней, на жидких питательных средах - 12-22 дня.

Для дифференциации видов микобактерий внутри рода применяют: тест на наличие способности продуцировать никотиновую кислоту (ниациновый тест); тест на наличие нитратредуктазной активности; тест на наличие термостабильной каталазы. Определяют чувствительность выделенной культуры к антибиотикам

3) Аллерг. методы:

Туберкулинодиагностика (реакция Манту с туберкулином) представляет собой внутрикожную пробу, направленную на выявление наличия специф

туберкулина. Реакция Манту — это иммунологический тест, основанный на гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ).

Туберкулин представляет собой смесь фильтратов убитых нагреванием культур микобактерий туберкулеза человеческого и бычьего видов, очищенных ультрафильтрацией, осажденных трихлоруксусной кислотой, обработанных этиловым спиртом и эфиром для наркоза и растворенных в стабилизирующем растворе (0,85 % растворе натрия хлорида с фосфатным буфером, с Твином80).

Активный компонент препарата - аллерген туберкулопротеин вызывает при осуществлении внутрикожной туберкулиновой пробы у инфицированных или вакцинированных БЦЖ/БЦЖ-М лиц специфическую реакцию гиперчувствительности замедленного типа в виде местной реакции - гиперемии и инфильтрата (папулы).

Показания к применению

Препарат предназначен для туберкулинодиагностики (осуществление внутрикожной туберкулиновой пробы Манту) с целью:

- отбор лиц для ревакцинации БЦЖ, а также перед первичной вакцинацией детей в возрасте 2 месяца и более;

- диагностики туберкулеза, в том числе для раннего выявления начальных и локальных форм туберкулеза у детей и подростков;

- определение инфицирования микобактериями туберкулеза.

Диаскинтест - аллерген туберкулезный рекомбинантный в стандартном разведении, представляет собой рекомбинантный белок, продуцируемый генетически модифицированной культурой Escherichia coli BL21(DE3)/pCFPESAT, разведенный в стерильном изотоническом фосфатном буферном растворе, с консервантом (фенол). Содержит два антигена, присутствующие в вирулентных штаммах микобактерий туберкулеза и отсутствующие в вакцинном штамме БЦЖ.

Действие препарата основано на выявлении клеточного иммунного ответа на специфические для Mycobacterium tuberculosis антигены. При внутрикожном введении Дискинтест вызывает у лиц с туберкулезной инфекцией специфическую кожную реакцию, являющуюся проявлением гиперчувствительности замедленного типа.

Патогенез: