60. Виды изменчивости микробов. Мутации, механизмы, роль в адаптации микробов.

Различают генотипическую (наследуемую) изменчивость и фенотипическую (ненаследуемую, модификационную). Наследуемая изменчивость осуществляется в виде мутаций и рекомбинаций.

Мутации - это перегруппировка генов, не связанная с внесением в клетку нового генетического материала, ненаправленное изменение генотипа. Спонтанные мутации возникают без видимых причин, как ошибки репликации; индуцированные - под влиянием мутагенов (УФО, ионизирующей радиации, алкилирующих агентов, азотистой кислоты, аналогов оснований ДНК и др.). Мутации могут проявляться в виде удвоения, выпадения, замены нуклеотидов, вставки (в том числе транспозируемого элемента) и др.

Рекомбинации - это изменения генотипа, связанные с внесением в клетку-реципиент генетического материала от клетки-донора.

Различают 3 вида рекомбинаций: трансформацию, трансдукцию, конъюгацию.

Трансформацией называют процесс: поглощения клеткой-реципиентом изолированной ДНК клетки-донора (или синтетической нуклеиновой кислоты).

Трансдукция - перенос генетической информации (ДНК) при проникновении в клетку умеренного бактериофага (вирусных частиц, паразитирующих на бактериальных клетках).

Конъюгация - перенос генетической информации посредством трансмиссивных плазмид при непосредственном контакте донора и реципиента.

Мутации и рекомендации обеспечивают высокий уровень генетического обмена в различных микробиоценозах, позволяют микробам быстро адаптироваться к меняющимся условиям среды, эволюционировать, нередко приобретая нежелательные свойства - лекарственную устойчивость, повышенный патогенный потенциал. Все формы наследуемой изменчивости активно используются в генно-инженерных исследованиях и биотехнологии.

61. Виды изменчивости микробов. Модификации: виды, примеры.

Различают генотипическую (наследуемую) изменчивость и фенотипическую (ненаследуемую, модификационную). Наследуемая изменчивость осуществляется в виде мутаций и рекомбинаций.

Модификации представляют собой фенотипические ненаследуемые изменения, которые возникают у бактерий в результате воздействия факторов внешней среды.

Впервые сообщения об изменении культуральных свойств микробов появились в работах Поль де Крайфа (1921), наблюдавшего расщепление культуры кроличьей септицемии на вирулентные и авирулентные штаммы.

Сущность этого явления состоит в том, что при рассеве на плотной питательной среде бактериальной культуры из одного типичного штамма (вида) в основном появляются два типа колоний, отличающихся друг от друга определенными формами. S-форма (гладкая) является нормальным типом колоний для многих грамотрицательных бактерий, кишечной и других групп; R-форма (шероховатая)―измененный тип колоний.

Бактерии кишечно-тифознодизентерийной группы вирулентны в S-форме колоний, а в R-форме не обладают вирулентными свойствами. Бактерии чумы, туберкулеза, сибирской язвы вирулентны в R-форме, а бруцеллы ― в S-форме.

В условиях культивирования микробов возможен переход от S-формы к R-форме. При этом капсульные бактерии теряют капсулы, лишаются биохимической активности и становятся неполноценными в антигенном отношении, приобретая неспецифические антигены. Подвижные бактерии теряют жгутики.

Переход S-формы в R-форму происходит в основном через промежуточные О и слизистые М-колонии. В процессе расщепления культур еще наблюдаются карликовые (D-dwarf), G-колонии (gonidial), появляющиеся как дочерние колонии на поверхности или на краю нормально развивающихся.

В условиях нарушения температурного режима, старения культуры, повышенной концентрации солей, применения антибиотиков и'фагов понижается вирулентность, изменяются антигенные и иммуногенные свойства, появляются антибиотикоустойчивые и фаго-устойчивые штаммы, аэробы становятся факультативными анаэробами, утрачивают некоторые имеющиеся ферменты или приобретают новые ферменты.

Если культивировать кишечные палочки на среде с добавлением лактозы, то у нее появляется новый, фермепт р-галактоза.

Изменение метаболизма у бактерий можно вызвать ультрафиолетовым облучением и рентгеновскими лучами. Изменяя параметры среды обитания, можно установить пределы и границы отклонения микробных клеток. Таким образом, широк диапазон феиотипических изменений. В основе этих изменений лежит прежде всего приспособительная активность обменных функций. Адаптация―это закон живого, и по этому закону живут и развиваются микроорганизмы.

62. Методы контроля стерильности изделий медицинского назначения влечебно-профилактических учреждения: отбор проб, питательные среды, учет результатов. Бактериологический контроль качества дезинфекции.

Контроль качества стерилизации проводят физическим (с помощью контрольно-измерительных приборов), химическим (с использованием химических индикаторов) и бактериологическим (с использованием споровых форм тест-культур или посевов смывов с простерилизованных предметов) методами.

Контроль стерильности в лечебно-профилактических организациях (ЛПО) периодически осуществляют бактериологические лаборатории ЛПО и Центров гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья (ЦГЭиОЗ). Он проводится в условиях, исключающих возможность вторичной микробной контаминации: в боксах или иных специальных помещениях с соблюдением правил асептики.

Объектами контроля на стерильность являются: хирургические инструменты, шприцы, иглы, системы переливания крови, зонды, катетеры, бужи, резиновые перчатки, хирургический шовный материал, аппаратура, перевязочные материалы, бельё и др.

Для бактериологического контроля стерильности изделий используют: сахарный бульон Хоттингера (0,5-1% глюкозы), тиогликолевую среду, бульон Сабуро.

Бактериологический контроль стерильности проводят путём погружения мелких изделий в питательные среды. С объектов больших размеров делают смыв стерильной салфеткой 5×5 см, предварительно увлажнённой стерильным физиологическим раствором или водопроводной водой.

Засеянные бульон Хоттингера и тиогликолевую среду выдерживают при температуре 32^оС, среду Сабуро - при температуре 22^оС 8 суток.

При отсутствии роста на всех средах выдают заключение о стерильности изделия. В случае прорастания посевов (помутнение, образование плёнки, осадка) готовят мазки для бактериоскопического подтверждения роста бактерий. При обнаружении бактерий изделие считается нестерильным.

Отбор проб

Взятие смывов производят стерильным ватным тампоном на палочках, вмонтированных в пробирки, или марлевыми салфетками размером 5x5 см. Для увлажнения тампонов в пробирки с тампонами наливают по 2,0 мл стерильного физиологического раствора.

Для выделения стафилококков посев делают непосредственно на чашку Петри с желточно-солевым агаром, для выделения бактерий группы кишечных палочек — посев на среду Эндо (дальнейшие исследования по соответствующим схемам).

Для обнаружения патогенных грибов производят посев на среду Сабуро, наблюдают 5 суток при 21°С.

Кроме того, производят посевы в среды накопления — для стафилококков в 6,5% хлористого натрия, для бактерий группы кишечных палочек — в 10—20% желчный бульон. Через сутки инкубирования при 37°С делают пересев на среду Эндо и желточно-солевой агар.

При обнаружении подозрительных колоний производят их микроскопию и далее исследуют по соответствующим схемам. Для выявления синегнойной палочки специальные посевы можно не производить, так как она дает ползущий рост с характерным запахом земляничного мыла на среде Эндо.

Правила отбора проб для контроля стерильности в лечебно-профилактических учреждениях

Забор проб производят в стерильные емкости с соблюдением строжайших правил асептики. Посев в обязательном порядке производят в три питательные среды:

* сахарный бульон Хоттингера (0,5 и 1% глюкоза);

* тиогликолевую среду;

* бульон Сабуро.

При посеве изделия или его части непосредственно в питательную среду следует соблюдать следующее условие — среды должно быть достаточно для полного погружения изделия.

Перед посевом емкость с отобранными образцами протирают стерильной марлевой салфеткой, обильно смоченной 6% раствором перекиси водорода, и оставляют на 30 минут.

Затем вносят в бокс.

За 1,5—2 часа до начала работы в боксе и предбокснике на 1— 1,5 часа включают бактерицидные лампы.

Перед входом в бокс работники лаборатории тщательно моют руки теплой водой с мылом и щеткой, вытирают стерильным полотенцем, надевают в предбокснике на ноги бахилы, стерильные халаты, 4-слойные маски, шапочки, стерильные перчатки.

Посевы в бульон Хоттингера и тиогликолевую среду выдерживают в термостате при температуре 37°С, среду Сабуро — при температуре 20—22°С. Посевы инкубируют в термостате в течение 14 суток.

Материал стерилен при отсутствии роста во всех посевах. Материал не стерилен при росте микрофлоры.

Бактериологический контроль эффективности обработки кожи операционного поля и рук хирургов

Смывы с кожи операционного поля и рук хирургов производят стерильными марлевыми салфетками размером 5x5 см2, смоченными в физиологическом растворе. Марлевой салфеткой тщательно протирают ладони, околоногтевые и межпальцевые пространства обеих рук.

После забора проб марлевую салфетку помещают в широкогорлые пробирки или колбы с раствором нейтрализатора (воды или физиологического раствора) и стеклянными бусами, встряхивают в течение 10 минут, производят отмыв марлевой салфетки.

Отмывную жидкость засевают глубинным способом по 0,5 мл на 2 чашки Петри с мясопептонным агаром, а марлевую салфетку— 0,5% сахарный бульон. Посевы инкубируют при 37°С в течение 48 часов.

Кожа и руки стерильны при отсутствии роста микроорганизмов как на твердой, так и на жидкой питательной среде.