Возможности лабораторной диагностики инфекционных болезней

Лабораторная диагностика имеет определяющее значение для установления причины инфекционного заболевания. Лабораторные исследования позволяют достоверно выяснить, каким именно возбудителем вызвано инфекционное заболевание, определить вирусную нагрузку, проследить иммунный ответ организма, правильно и своевременно назначить лечение, определить тяжесть течения болезни, проконтролировать эффективность лекарственной терапии.

При выборе метода для определения микроорганизмов, вызвавших инфекционный процесс, врачу-клиницисту надо хорошо ориентироваться в возможностях того или иного метода исследования, с тем, чтобы выбрать оптимальный подход (микробиологический, генодиагностический или иммунологический) для лабораторного исследования. Комплексное обследование пациента различными лабораторными методами дает возможность врачу-клиницисту получать более полную информацию как о наличии инфекционного агента, так и об иммунном статусе. Это позволяет более точно ставить диагноз, назначать соответствующее этиотропное лечение и вести последующий контроль терапии.

Условно все методы диагностики инфекций можно разделить (табл. 3) на две большие группы: прямые методы (выявления возбудителя) и непрямые (выявление эффекта). Прямое обнаружение возбудителя в клиническом материале является бесспорным доказательством инфекции и основанием для постановки этиологического диагноза.

Таблица 3

Классификация лабораторных методов в зависимости от

изучаемых объектов

Прямые методы	Непрямые методы
Микробиологический	Выявления антител
Выявления антигена	Инструментальный
Микроскопия	Гистологический
Генодиагностика (ПЦР)

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Достоинства. Возможность изучения целого ряда клинически важных фенотипических свойств микроорганизмов. Микробиологический метод по-прежнему является «золотым стандартом». Такие микроорганизмы, как грампозитивные кокки (Staphylococcus spp, Streptococcus.spp), грамнегативные кокки (Neisseria spp), грампозитивные палочки (Corynebacterium spp), грамнегативные палочки (Heamophilus spp, Pseudomonas spp), грибы (Candida spp), бактерии кишечной группы (Escherichia coli, Proteus spp. и др.) выявляются с помощью традиционных, доступных и достаточно легко воспроизводимых микробиологических и микроскопических методов.

Недостатки. «Некультивируемость» микроорганизмов, отсутствие адекватных сред или невозможность подбора условий культивирования для определенных микроорганизмов (вирусы и некоторые бактерии), длительность анализа, отсутствие высокопроизводительной техники идентификации и определения антибиотикорезистентности микроорганизмов, низкий уровень материальной базы бактериологических лабораторий. Ряд микроорганизмов, вызывающих воспалительные процессы в организме человека, таких как микобактерии туберкулеза, хламидии, микоплазмы, уреаплазмы, можно выявить только с помощью очень трудоемких и дорогостоящих методов микробиологического исследования. Возбудителей с высокой антигенной изменчивостью или паразитирующих внутри клетки также трудно обнаружить классическими лабораторными методами. Наконец, разнообразные вирусы, например, вирус папилломы человека (HPV), герпес вирусы (VG), цитомегаловирус (CMV), вирус Эпштейна-Барр (EBV) не могут быть выявлены с помощью микробиологических методов. Для их диагностики ПЦР-метод является оптимальным выбором.

Уровень развития микробиологической диагностики РФ остается одним из самых низких среди Европейских стран.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Этот метод, прежде всего, позволяет объективно выявлять реакцию организма человека в ответ на контакт с инфекционными агентами, выражающуюся в выработке специфических антител, обнаруживать специфический клеточный ответ, антитела IgG, IgM, IgA, а также антигены некоторых микроорганизмов.

Достоинства. Быстрота анализа, низкая стоимость, возможность стандартизации и автоматизации, достаточно высокая воспроизводимость результатов, высокая пропускная способность. Для определения некоторых микроорганизмов, например, Rubella virus иммунологический подход предпочтительнее других.

Недостатки. Непредсказуемая специфичность, необходимость в дублях при постановке реакции, необходимость наблюдения за титром антител в динамике для уточнения остроты процесса, низкая аналитическая чувствительность, поздняя сероконверсия, особенно актуальная для прямых методов ИФА «серологическое окно», перекрестные результаты ИФА у пациентов с циррозом печени, болезнями соединительной ткани, аутоиммунными заболеваниями, беременных и пожилых, а также (для косвенных методов ИФА) перекрестные результаты ИФА на антитела к другим микроорганизмам, ложноположительная реакция в случае циркуляции антител класса IgG у детей, рожденных от инфицированных матерей, вакцинации и при аутоиммунных заболеваниях.

МИКРОСКОПИЯ

Метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ), прямое выявление как корпускулярных, так и растворимых антигенов при люминесцентной микроскопии. Метод является скрининговым, так как его чувствительность и специфичность при использовании моноклональных антител, содержащихся в качественных импортных наборах, может составлять 60 % и 80 % соответственно. ПИФ недостаточно чувствительна для определения малых количеств элементарных телец, возможны как ложноотрицательные, так и ложноположительные результаты, поэтому этот метод предлагается использовать только как ориентировочный.

ГЕНОТИПИЧЕСКИЙ МЕТОД (ПЦР)

Для установления точного диагноза заболеваний, вызываемых различными инфекционными агентами, все чаще применяются современные методы молекулярной биологии.

Достоинства:

• высокая аналитическая чувствительность и специфичность;

• возможность получения результатов независимо от сложности культивирования микроорганизмов (выявления персистирующих, латентных и рецидивирующих форм инфекций);

• специфичность и математически возможная диагностическая чувствительность;

• возможность контроля эффективности лечения;

• возможность диагностики не только острых, но и латентных инфекций;

• возможность ранней диагностики инфекционных заболеваний у серонегативных пациентов, когда лечение наиболее эффективно;

• возможность диагностики оппортунистических инфекций, часто протекающих на фоне иммунодефицита, вследствие чего постановка диагноза только по результатам серологических исследований затруднена из-за имеющихся несоответствий между параметрами иммунного ответа и протекания заболевания;

• возможность разрешения сомнительных результатов серологических и эпидемиологических исследований;

• возможность выявления наиболее патогенных штаммов инфекционных агентов;

• возможность исследования инфекционности пулированных образцов крови и ее продуктов, применяемых в терапии;

• возможность определения резистентности к лекарственным препаратам;

• возможность диагностики возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов;

• возможность стандартизации и автоматизации анализа;

• возможность увеличения исследуемого образца ДНК в сотни раз;

• возможность проведения объективных качественных и количественных измерений;

• возможность проведения “Multiplex ПЦР” (амплификация в одной реакционной среде нескольких ДНК-матриц с использованием нескольких пар праймеров).

Недостатки:

• перекрестная контаминация от пробы к пробе (в процессе обработки клинических образцов или при раскапывании реакционной смеси), приводящая к появлению спорадических ложноположительных результатов;

• контаминация продуктами амплификации (ампликонами), являющаяся наиболее частой причиной ложноположительных результатов, поскольку в процессе ПЦР-генодиагностики ампликоны накапливаются в больших количествах и очень легко переносятся с аэрозолями и через приборы.