Мазок с конъюнктивы, слизистой зева и дыхательных путей

Забор материала производится рабочей частью стерильного одноразового аппликатора. Слегка проводят им 1–2 раза по слизистой в местах предполагаемой локализации инфекционного агента. После забора материала аппликатор помещают в стерильную одноразовую пробирку с транспортной средой. Тщательно перемешивают, остатки жидкости на зонде отжимают о стенки пробирки, аппликатор извлекают (выбрасывают в контейнер с дезинфицирующим раствором) или отрезают, оставляя рабочую часть в пробирке с транспортной жидкости. Приготовленную таким образом пробу передают в лабораторию. Максимальный срок хранения материала одни сутки в холодильнике при температуре +4°С – +8 °С.

Моча

Первая порция утренней мочи в количестве 10 мл собирается в специальный флакон или пробирку без консервирующего раствора. Использование домашней посуды вместо специальных контейнеров и пробирок приводит к контаминации проб, получению заведомо ложных результатов и невозможности стандартизации.

Максимальный срок хранения отобранного материала - одни сутки в холодильнике при температуре +4 °С.

Мокрота

Мокроту собирают утром в домашних условиях в одноразовые пластиковые пробирки объемом 10-15 мл после проведенного инструктажа по забору материала в домашних условиях, либо в ЛПУ под контролем медперсонала. Максимальный срок хранения материала одни сутки в холодильнике при температуре +4 °С – +8 °С.

Синовиальная жидкость

Забор материала производится одноразовым шприцом в количестве 1 мл. Отобранный материал помещают в сухую одноразовую пробирку типа “Эппендорф”.

Максимальный срок хранения материала одни сутки в холодильнике при температуре +4 °С – +8 °С.

Другие биологические жидкости

Секрет простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж, слюна забираются по показаниям стандартным способом с использованием стерильного (одноразового) инструментария в количестве 0,1–1,0 мл в стерильные разовые пробирки с плотно закрывающимися крышками.

Секционный материал

Кусочки органов или ткани объемом примерно 2–3 мм³ помещают в стерильную пробирку типа "Эппендорф" объемом 1,5 мл.

Максимальный срок хранения материала одни сутки в холодильнике при температуре +4 °С – +8 °С.

Применение метода ПЦР в медицине

С помощью лабораторных данных 60–80% всех медицинских решений клиницисты принимают по результатам клинико-лабораторных исследований. Лабораторные данные позволяют врачу увереннее проводить разработку плана обследования и лечения пациента, вести наблюдение за эффективностью терапии.

Диагностическое значение ПЦР-исследований в клинике

инфекционных заболеваний

Использование метода ПЦР для диагностики инфекционных заболеваний как бактериальной, так и вирусной природы имеет иногда большое значение для решения многих проблем микробиологии и эпидемиологии, способствует развитию фундаментальных исследований в области изучения хронических и малоизученных инфекционных и наследственных заболеваний. На сегодняшний день практически нет инфекционного агента, которого нельзя было бы выявить с помощью ПЦР (табл. 4).

Таблица 4

Локализация возбудителей и диагностическое значение ПЦР

Показания к проведению ПЦР-исследования	Материал для исследования	Возбудитель
Вирусный гепатит	Кровь, биоптаты печени	Вирусы гепатитов В, С, D, G
Контроль крови и препаратов из нее в трансфузиологии и трансплантологии	Кровь	Вирусы гепатитов В, С, D, G, ВИЧ, герпеса, ЦМВ
Цервицит, эндометрит	Цервикальный соскоб, аспират из полости матки	Сhlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealiticum, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Gardnerella vaginalis, Candida albicans,вирус простого герпеса I, II типов
Сальпингит, периаппендицит	Цервикальный соскоб, биоптаты, полученные при лапароскопии
Бактериальный вагиноз, вагинит, вульвовагинит у девочек	Эпителиальный соскоб из влагалища
Уретрит, простатит	Соскоб из уретры, моча, сок простаты
Эпидидимит	Сперма
Проктит	Соскоб из прямой кишки
Бесплодие, невынашивание беременности, эктопическая беременность	Цервикальный соскоб
Синдром Рейтера	Эпителиальный соскоб из уретры и конъюнктивы
Герпетические поражения гениталий, слизистых оболочек, кожных покровов и др.	Эпителиальный соскоб с пораженного участка, кровь	Вирус простого герпеса I, II, VI типов, вирус Эпштейн-Барра, вирус Варицелла Зостер
Кандиломатоз	Эпителиальный соскоб с пораженного участка	Папилломавирус (HPV)
Пневмония новорожденных, рецидивирующие хронические заболевания верхних отделов дыхательной системы	Эпителиальный соскоб с задней стенки глотки, бронхоальвеолярный лаваж, мокрота	Сhlamydia trachomatis, Сhlamydia pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae, Mycoplasma hominis, Mycobacterium tuberculosis
Конъюнктивит (в том числе у новорожденных)	Эпителиальный соскоб из конъюнктивы	Сhlamydia trachomatis,Neisseria gonorrhoeae, вирус простого герпеса
Цитомегаловирусная инфекция (в том числе внутриутробная у новорожденных)	Кровь, моча, слюна, амниотическая жидкость, биоптаты	Цитомегаловирус
Туберкулез легких	Мокрота, бронхоальвеолярный лаваж	Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis
Туберкулез мочеполовых и др. органов	Моча, соскоб с пораженного участка
Язва желудка, гастрит, дуоденит	Биоптат слизистой	Helicobacter pylori

Особое место в этом ряду занимают вирусные инфекционные агенты и микобактерии туберкулеза. ПЦР открывает поистине фантастические возможности анализа генома человека – выявления дефектных генов, определяющих наследственную предрасположенность к заболеваниям.

Особенности вирусной природы заболевания обуславливают определенные трудности их диагностики, лечения и профилактики. Весьма актуальной проблемой является адекватная этиологическая диагностика вирусных гепатитов. В настоящее время известно как минимум пять вирусов, способность которых вызывать поражение печени доказана. Это вирусы гепатита А, В, С, D, Е. Существуют и другие вирусы, поражающие печень, однако при этом печеночная ткань не является местом первичной репликации вируса и поражения гепатоцитов. К таким вирусам относятся: цитомегаловирус (CMV), вирус простого герпеса (ВПГ), вирус Эпштейна-Барр (EBV) и многие флавивирусы, переносимые членистоногими, например, вирус, вызывающий лихорадку Денге и желтую лихорадку. Этиологическая роль HGV и вируса TTV в развитии хронического гепатита сомнительна. Их способность специфически поражать гепатоциты подвергается сомнению, т.к. в литературе описаны только отдельные случаи вызванного ими гепатита, в то время как частота бессимптомного носительства этих вирусов в популяции очень высока.

Наибольшую угрозу для здоровья населения представляют вирусные гепатиты с парентеральным путем передачи HCV, HВV, НDV.

Эти инфекции характеризуются тяжелым клиническим течением, являясь частой причиной хронического гепатита. Установлено, что длительное персистирование этих вирусов в гепатоцитах является решающим фактором их малигнизации.

Для надежного доказательства вирусного гепатита, в т.ч. “молчащих” форм инфекции, для оценки эффективности терапии применяются молекулярно-биологические методы, обладающие высокой дискриминативной способностью, направленные на поиск специфичных молекулярных маркеров.