- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •Р е ц е н з е н т ы
- •К о л л е к т и в а в т о р о в
- •Оглавление
- •Введение
- •История открытия и разработка метода пцр
- •Механизм полимеразной цепной реакции
- •Праймеры
- •Полимераза
- •Пробоподготовка (выделение днк/рнк)
- •Амплификация
- •Факторы, влияющие на эффективность амплификации
- •Использование «горячего старта» при постановке пцр
- •Приборное обеспечение
- •Регистрация результатов
- •Возможности лабораторной диагностики инфекционных болезней
- •Преимущества пцр перед другими методами клинической лабораторной диагностики
- •Универсальность процедуры выявления различных возбудителей
- •Специфичность
- •Чувствительность
- •Актуальность ответа (быстрота получения результата анализа)
- •Возможность экспертизы
- •Исследуемый биологический материал
- •Локализация возбудителей
- •Правила забора материала и транспортировки клинического материала для пцр-диагностики
- •Кровь, плазма, сыворотка
- •Соскоб с эпителиальных клеток для выявления днк возбудителей инфекций, передающихся половым путем
- •Факторы, влияющие на эффективность выявления урогенитальных патогенных микроорганизмов с помощью нк
- •Правила подготовки больного для пцр-диагностики урогенитальных инфекций
- •Мазок с конъюнктивы, слизистой зева и дыхательных путей
- •Гепатит а (hаv), е (hеv)
- •Гепатит в (hвv)
- •Гепатит d (вгd)
- •Гепатит с (hcv)
- •Использование пцр в пульмонологии и фтизиатрии
- •Применение пцр в урогинекологической практике
- •Основные клинические синдромы и урогенитальные инфекции
- •Генитальный герпес вызывает вирусы простого герпеса I и II типов
- •Криминология
- •Установление отцовства
- •Персонализированная медицина
- •Клонирование генов
- •Онкология
- •Применение пцр в практике службы крови
- •Управление качеством пцр-исследований
- •Преаналитический этап
- •Аналитический этап
- •Контроль качества пцр-исследований
- •Контроль реакции амплификации
- •Внутренний контроль вко
- •Проблема контаминации
- •Действия при возникновении контаминации нуклеиновыми кислотами
- •Постаналитический этап
- •Заключение
- •Вопросы для самопроверки
- •Ответы на вопросы для самопроверки
- •Список литературы
- •Приложение
- •Возможности пцр-диагностики в гуз иоккдц
- •Комплекс исследований на заболевания,
- •Передающиеся половым путем (зппп), 2ж3001
- •Хламидиоз, 2ж3002
- •Туберкулез, 2жз003
- •Гепатит с, 2ж3004
- •Микоплазма гоминис, 2ж3005
- •Трихомониаз, 2ж3006
- •Гепатит в, 2ж3007
- •Уреаплазма, 2ж3009
- •Папиллома (впч с определением онкогенности), 2ж3010
- •Гонорея, 2ж3011
- •Гепатит с количественный, 2ж3012
- •Генотипирование вируса гепатита с, 2ж3013
- •Микоплазма гениталиум, 2ж3015
- •Цмв, 2ж3019
- •Вирус Эпштейна-Барр, 2ж3020
- •Вирус герпеса I-го и II-го типов, 2ж3021
- •Вирус герпеса 6-го типа, 2ж3022
- •Токсоплазмы гондии, 2ж3023
- •Энтеровирус, 2ж3027
- •Гепатит в количественный, 2ж3031
- •Пцр - анализ в клинической лаборатории
- •664079, Г. Иркутск, м-н Юбилейный, 100, к. 302.
Вирус герпеса I-го и II-го типов, 2ж3021
Исследуемый материал: кровь, соскоб, мазок, моча, биоптат, мокрота, отделяемое везикул (пузырьковых высыпаний), спинномозговая жидкость. Забор крови осуществляется в пробирку с антикоагулянтом (ЭДТА). Кусочек ткани объемом примерно 2 мм3, соскоб, мазок или спинномозговую жидкость 0,2 мл поместить в стерильную пробирку типа "Эппендорф" объемом 1,5 мл. Мокрота и моча собираются утром в домашних условиях в одноразовые пластиковые пробирки объемом 10–15 мл.
Вирус герпеса I-го типа практически идентичен вирусу герпеса 2-го типа. Тип болезни – генитальный герпес, или так называемая «простуда» на губах – зависит не от типа самого вируса (ВПГ-I или ВПГ-II), который находится в организме человека, а от того места, где он проживает. В большинстве случаев (80–85%) половой герпес вызван вирусом герпеса II типа (ВПГ-II). В 15–20% генитальный герпес вызван вирусом герпеса I типа (ВПГ-I). После инфицирования вирус попадает в "депо". Если речь идет о «простуде» на губах, то этим депо становится тройничный ганглий, который расположен в полости черепа – «верхнее депо». Во время рецидива вирус выходит по нервам от тройничного ганглия, идет к коже лица, подбородка, ушей, лба, слизистой рта и десен, губ и т.д. В этих местах и возможны рецидивы. При генитальном герпесе «депо» вируса находится в крестовых ганглиях – «нижнее депо» вируса. При рецидиве вирус по нервам от крестцового ганглия спускается к коже гениталий, ягодиц, бедер, лобка, слизистой влагалища, уретры. Внутри организма человека переход вируса из «верхнего депо» в «нижнее» невозможен.
Учитывая, что симптоматика герпеса может быть схожа с симптоматикой других инфекций, передающихся половым путем, одной из главных задач является идентификация заболевания. Для диагностики ВПГ используют следующие методы исследования: полимеразная цепная реакция (ПЦР), выявление антигенов ВПГ.
Путь заражения: половой, воздушно-капельный (очень редко), при первичной инфекции возможна передача вируса через плаценту. С помощью ПЦР можно определить, I-м или II-м типом вируса произошло заражение.
Вирус герпеса 6-го типа, 2ж3022
Исследуемый материал: кровь, соскоб, мазок, моча, биоптат, мокрота, спинномозговая жидкость. Забор крови осуществляется в пробирку с антикоагулянтом (ЭДТА). Кусочек ткани объемом примерно 2 мм3, соскоб, мазок или спинномозговую жидкость 0,2 мл поместить в стерильную пробирку типа "Эппендорф" объемом 1,5 мл. Мокрота и моча собираются утром в домашних условиях в одноразовые пластиковые пробирки объемом 10–15 мл.
В середине 80-х годов группа герпесвирусов пополнилась вирусом герпеса человека 6-го типа. Он был выделен из лимфоцитов крови больных, в связи с чем получил название лимфотропного. ВГЧ-6 репродуцируется в Т-, В-лимфоцитах и макрофагах, в большей степени поражая Т-лимфоциты. Имеет тропизм к глиальным клеткам. Инфекция распространяется воздушно-капельным путем. ВГЧ-6 постоянно обнаруживают в носоглоточной слизи и слюне инфицированных лиц. Возможно заражение при гемотрансфузиях, трансплантации органов, при использовании медицинских инструментов, контаминированных вирусом. Имеются сообщения о случаях заражения наркоманов, а также медицинских работников при случайных уколах иглой, содержащей кровь инфицированных или больных.
Исследования показали, что инфекция широко распространена среди людей. От 60 до 96% здоровых взрослых являются серопозитивными. У подавляющего большинства зараженных ВГЧ-6 формируется латентная инфекция. С этиологической ролью ВПГ-6 связывают заболевания и клинические синдромы: острого лихорадочного заболевания, развитие внезапной экзантемы, мононуклеозоподобного синдрома. С ВГЧ-6 связывают развитие синдрома хронической усталости, для которого характерны: острое гриппоподобное начало с повышением температуры до 38°С, боли в горле, небольшое увеличение шейных, затылочных, подмышечных лимфоузлов, необъяснимая генерализованная мышечная слабость, мигрирующие миалгии, артралгии, расстройства сна, раздражительность, повышенная физическая утомляемость с последующей длительной усталостью. Для диагностики этой патологии используют молекулярно-биологические (ПЦР) и иммунохимические (ИФА) методы диагностики.