Добавил:
kiopkiopkiop18@yandex.ru Вовсе не секретарь, но почту проверяю Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
2 курс / Гистология / Световая_микроскопия_в_биологии_Методы_Лейси_А_ред_.pdf
Скачиваний:
0
Добавлен:
23.03.2024
Размер:
17.26 Mб
Скачать

мастерства профессиональных оптиков, вам не удастся собрать его правильно. Несмотря на все предосторожности, линзы тем не менее

пачкаются. Это столь сильно сказывается на качестве изображения, что делает необходимой их чистку. Относительно чистки трудно дать универсальный совет, так как фирмы-изготовители и другие авторитеты расходятся во мнениях, в частности по поводу выбора растворителей.

Прежде чем дотронуться до стекла, удалите с него всю пыль. Оптическое стекло может быть сравнительно мягким, и его могут легко повреждать абразивные частицы из атмосферы. Если есть возможность, используйте баллон со сжатым газом; при его отсутствии — кисточку с поддувом, которой надо сначала сдуть пыль, а затем слегка почистить поверхность. Никогда не дуйте на линзы ртом, так как капельку засохшей слюны очень трудно потом удалить с оптики.

После удаления пыли протрите слегка поверхность объектива специальной бумагой, используя каждый раз чистый кусок, причем тот, за который не брались руками. Затем слегка подышите на объектив, чтобы на его поверхности образовался тонкий слой дистиллированной воды, после чего вновь аккуратно протрите его. Держите пакет с бумагой для протирки оптики всегда закрытым, чтобы избежать попадания в него пыли. Для протирки оптики всегда используйте только специальную бумагу, так как другие сорта бумаги имеют неподходящую текстуру и могут повредить линзы.

Если загрязнения по-прежнему сохраняются и объектив требует более серьезной обработки, нужно использовать растворители. Для этой цели можно рекомендовать ксилол, этанол, смесь спирт: эфир, перегнанный легкий бензин, специальную «жидкость для очистки линз» и некоторые другие жидкости. Большинство из них отвергается различными авторами из опасения, что они могут повредить либо клей, которым скреплены линзы в оправе, либо пластик, из которого теперь делают блоки линз в объективах. Если у вас есть рекомендации фирмы-изготовителя, то следуйте им, если их нет, вы можете использовать растворы из приведенного выше списка. Лучший способ — это применять минимальные количества растворителя, например несколько раз приложить к линзе смоченную растворителем бумагу для протирки линз, а не наливать растворитель на поверхность линзы, так как при этом он может проникнуть внутрь оправы объектива. Нужно нанести растворитель на кончик скрученной бумаги и часто менять ее. Завершить очистку следует сухой бумагой, при этом можно предварительно подышать на поверхность линзы.

6. Камера для фотомикрографии

Оборудование для фотомикрографии может быть самым разным. В простейшем случае используются применяемые в обычной фотографии простые зеркальные фотокамеры с одним объективом, которые устанавливаются с помощью простейшего адаптера. Существуют специальные фотосистемы, которые можно использовать на любом микроскопе, и наконец — фотосистемы, полностью встроенные в микроскоп. Большинство камер для микроскопов рассчитано на использование стандартной 35-миллиметровой пленки. Для более широкой пленки применяются специальные адаптеры, в том числе система «Поляроид» для «моментального» изготовления отпечатков. Каждая система имеет свои преимущества, и любая может быть использована для изготовления высококачественных отпечатков, но у всех есть свои ограничения.

6.1. Выбор размера пленки

Вообще в фотографии наиболее часто используется 35-миллиметровая пленка, поэтому существует множество различных ее видов, и можно найти подходящую пленку. Учитывая доступность 35-миллиметровой пленки и некоторые другие соображения, ее следует предпочесть во всех случаях, когда конечным результатом работы являются слайды. Вообще она является наиболее популярной при всех видах фотомикрографии.

Информативность записываемого изображения и, следовательно, степень увеличения конечного изображения с негатива сильно зависят от оптической системы микроскопа (разд. 4.2). Таким образом, даже 35миллиметровая пленка, которая раньше считалась в обычной фотографии «узкой», в данном случае позволяет полностью зафиксировать все детали на фотомикрографии среднего качества.

Камера большого формата необходима, когда используется система «Поляроид» для получения «моментальных» снимков, поскольку в ней размер отпечатка равен размеру кадра на пленке. Эти отпечатки имеют стандартные размеры 3,25Х4,25 дюйма или 5X4 дюйма, их получение более подробно обсуждается в разд. 8.4.

Если микроскоп снабжен широкоформатной камерой, то можно использовать удобную пленку для получения изображений размером до 6X9 см или плоскую пленку размером до 5X4 дюйма. Как та, так и другая пленка может быть черно-белой или цветной. Несмотря на приведенные выше соображения о преимуществах использования 35-миллиметровой пленки, широкий формат имеет некоторое преимущество в том, что при его использовании для достижения того же размера отпечатка требуется меньшее увеличение негатива. Кроме того, различные повреждения на пленке большого формата сказываются на качестве фотографии в меньшей степени, нежели при малоформатной пленке. Поэтому, когда требуется наивысшее качество, используют пленку большого формата. При использовании плоской пленки можно проявлять каждый лист по отдельности, с тем чтобы, немедленно получая результат, при необходимости вносить коррективы в экспозицию.

Пленки больших форматов в расчете на один кадр естественно дороже, чем 35-миллиметровая пленка, что

51

отчасти может быть компенсировано более аккуратным использованием первых. Значительным недостатком записи на широкую пленку является большая по сравнению с 35-миллиметровой пленкой экспозиция при одинаковой чувствительности и других условиях. Это — следствие распространения света из окуляра на большую площадь пленки. Поэтому возможны трудности при записи на широкоформатные пленки изображений с низкой яркостью, например в темнопольной или флуоресцентной микроскопии.

6.2. 35-миллиметровая зеркальная камера с одним объективом

35-миллиметровая зеркальная камера с одним объективом позволяет получать фотомикрографии минимальной стоимости. Она может быть использована в лаборатории и для других целей. Если закупать ее с адаптером и некоторыми принадлежностями к микроскопу, то в сумме это будет стоить вряд ли больше 500 фунтов стерлингов. Удобные адаптеры выпускаются для использования 35-миллиметровой зеркальной камеры

содним объективом фирмами Leitz, Minolta, Nikon, Olympus, Pentax, Zeiss и др. Большинство современных фотокамер снабжено экспонометром, измеряющим поток света, который затем попадает на пленку, — так называемой системой «измерения через объектив». Еще одним преимуществом является простота в обращении

сними для тех, кто пользуется фотоаппаратом; полная система сравнительно дешева, в ней легко разобраться, она содержит минимум оптических и механических деталей. Кроме того, камеру легко переставлять с одного микроскопа на другой.

Ксожалению, 35-миллиметровая зеркальная камера с одним объективом менее удобна для фотомикрографии, чем более совершенное оборудование, по следующим причинам: сложно наблюдать препарат и наводить камеру на резкость; система управления расположена на самой камере и неудобна в обращении; набор выдержек затвора не всегда достаточен для работы. Кроме того, 35-миллиметровая зеркальная камера с одним объективом лишена некоторых усовершенствований, имеющихся на специальном оборудовании для фотомикрографии. Наиболее существенный недостаток связан с зеркалом и спусковым механизмом, которые могут при срабатывании вызывать вибрацию всей системы и служить причиной получения нерезких снимков. Парадоксально, но лучшие результаты получаются при фотографировании с большими выдержками (1 секунда и более), так как при этом быстро затухающая механическая вибрация будет оказывать влияние на камеру в течение только небольшой части времени экспозиции. Тем не менее при достаточном внимании 35-миллиметровая зеркальная камера с одним объективом дает микрографические снимки, неотличимые от тех, которые получаются с помощью специального оборудования. Используя такую камеру в сочетании с дистанционным спуском и автоматической перемоткой пленки, что позволяло не прикасаться к ней при каждом кадре, автор получил более половины всех своих фотомикрографий.

6.3. Специальная фотомикрографическая камера

Оборудование такого типа рекомендуется использовать для обычной фотомикрографии. Примерами являются системы Leitz MPS 12, Orthomat, Nicon Microflex UFX, Olympus PM 10, Zeiss MC 63 (рис. 3.4),

стоимость которых составляет от 1000 до 7000 фунтов стерлингов. Выпускаемые основными фирмами по производству микроскопов данные камеры могут быть предназначены либо для использования только с микроскопами той же фирмы, либо для установки на микроскопы различного производства.

Рис. 3.4. Специальная фотомикрографическая камера Zeiss MC63, установленная на микроскопе Zeiss Axioplan. Расположенный слева от микроскопа блок управления позволяет контролировать чувствительность пленки, время экспозиции, вносить поправку на реципрокное несоответствие. Кнопка затвора находится вверху справа. Фотография воспроизводится с любезного разрешения фирмы Carl Zeiss (Oberkochen) Ltd.

Возможность установки камер зависит от того, рассчитаны они на стандартный окулярный тубус или на специальные более широкие тубусы, которые неодинаковы у разных микроскопов. Наличие специального

52

посадочного места не позволяет заменять камеру, но зато обеспечивает большую механическую стабильность и защищает от вибрации.

По сравнению с 35-миллиметровой зеркальной камерой с одним объективом специальные фотомикрографические камеры более удобны и предоставляют больше возможностей. С их помощью легче рассматривать препарат и наводить на фокус. В них встроена экспонометрическая система, позволяющая в некоторых моделях переходить от интегрального измерения освещенности к измерению в пятне. Затвор сконструирован так, чтобы уменьшить передачу механической вибрации на остальную часть системы. Протяжка пленки осуществляется» как правило, с помощью электропривода, а ручки управления удобно размещены на панели отдельного настольного блока. Этот блок управления может иметь систему коррекции автоматической экспозиции и другие возможности.

6.4. Микроскопы со встроенными фотосистемами

Эти приборы создают максимум удобств для фотомикрографии, позволяя делать фотомикрографии, не отрываясь от постоянной работы на микроскопе. Их стоимость составляет около 12 000 фунтов стерлингов, в зависимости от входящей в комплект оптики. Примерами таких систем являются Nicon Microphot, Olympus Vanox, Reichert Polyvar и Zeiss Axiophot.

В этих приборах имеется одна или более сменных камер или магазинов для пленки с автоматической протяжкой 35-миллиметровой пленки, или адаптеры для пленок больших форматов. Полная система встроена в массивный металлический кожух, защищающий ее элементы от вибрации и пыли. Наводка на резкость осуществляется при наблюдении через стандартные окуляры, экспозиция контролируется специальной автоматической системой, которая обладает почти такими же возможностями, как и описанная в разд. 6.3. К этим приборам может дополнительно поставляться разнообразная оптика для специальных способов получения контраста. На рис. 3.5 изображен один из приборов такого типа — Olympus Vanox.

6.5. Камера с мехами

Камера этого типа обладает большой гибкостью, но при этом она неудобна для использования. Она предназначена для пленок большого формата и очень полезна при фотомакрографии и для получения фотографий наивысшего качества (разд. 9), но не для повседневной работы. Камера с мехами состоит из очень тяжелого и жесткого штатива, на котором закреплены затвор и матовый фокусировочный экран, соединенный с затвором легкими мехами. И затвор, и экран могут перемещаться вдоль штатива. Фокусировочный экран можно снять и заменить держателем для катушечной пленки, кассетой с пленкой или кассетой для системы «Поляроид».

Рис. 3.5. Большой фотомикроскоп, Olympus Vanox-T. Прибор снабжен двумя •35-миллиметровыми фотокамерами, по одной с каждой стороны, и камерой большого формата. Установлена система для Поляроида (вверху). Непосредственно над окулярами находится гнездо, куда можно подсоединить телевизионную камеру. Фотография воспроизводится с любезного разрешения Olympus Optical Co. Ltd. (Великобритания).

Между мехами и держателями для пленки можно установить призму, так чтобы изображение фокусировалось на экран, установленный в более удобном положении.

Микроскоп устанавливается в основании камеры, затвор опускается к окуляру так, чтобы оптические оси

53