не позволяющая увидеть детали. Общее увеличение микроскопа может быть либо недостаточным для того, чтобы соответствующие детали различались глазом, или напротив, слишком большим, что приводит к загрублению изображения.

Рассеянный свет является серьезной помехой для качества изображения, но его можно в достаточной степени регулировать, используя освещение по Кёлеру. Обычно при микроскопии толстых препаратов изображение ухудшается за счет нежелательного света, попадающего из плоскостей, которые находятся не в фокусе. В некоторых новых разработках специально используется очень малая г. р., которую дают сильные объективы. Путем сканирования очень маленьких полей зрения и сохранения их изображений, а также за счет удаления изображений, находящихся не в фокусе, можно в дальнейшем с помощью электроники синтезировать изображения высокого качества, которые нельзя получить иным способом.

Для того чтобы детали образца были видны, они должны быть разрешены в изображении. Увеличение изображения должно быть достаточным, с тем чтобы соответствовать разрешающей способности глаза. Чтобы глаз различал изображение, необходим также достаточный контраст. Методы, позволяющие достичь высокого контраста, в которых используются семь основных видов взаимодействий света с веществом, будут рассмотрены в гл. 2.

Цели световой микроскопии, таким образом, следующие: 1) сделать видимыми мелкие детали и 2) установить, с какой степенью точности изображение копирует препарат.

6. Литература для дальнейшего чтения

1.James, J. (1974) Light Microscopy Techniques in Biology and Medicine. Martinus Nijhoff, The Netherlands.

2.Michel, R. (1964) Die Grundzuge der Theorie des Microscops. Wissenschaft-liche Verlagsgesellschaft MBH, Stuttgart. (Содержит много диаграмм и рисунков, которые легко могут быть поняты не немецкоязычным читателем. Содержит многие расширенные описания экспериментов Аббе и объяснение метода фазового контраста).

3.Petran, M., Hadrausky, M., Benes, J., Kucera.R. and Boyde.A. (1985). Proc. R. Microsc. Soc., 20, 125—129.

4.Amos, W. B. and White, J. G. (1987) Proc. R. Microsc. Soc., 22, 525.

ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ПРОЗРАЧНЫХ ПРЕПАРАТОВ ПУТЕМ ПОВЫШЕНИЯ КОНТРАСТА

А. Дж. Лейси

1. Введение

В данной главе рассматривается ряд широко используемых приемов, позволяющих получить контраст либо между изображением образца и фоном, либо между отдельными деталями изображения. Часть, посвященная отражательной интерференционной микроскопии, написана профессором А. С. Г. Кертисом (A. S. G. Curtis). Здесь лишь мельком затронута флуоресценция, поскольку она является предметом специального рассмотрения в гл. 6. При описании каждой методики рассматриваются ее принципы, практическая процедура и возможности применения, а также даются комментарии к той дополнительной информации о препарате, которую можно получить, используя различные методы усиления контраста. В основном речь будет идти о получении контраста в изображении деталей строения живых клеток. Приводимые в качестве примеров препараты были выбраны для иллюстрации данных методик как наиболее доступные. В последнем разделе сделана попытка проанализировать все методики применительно к одному препарату с тем, чтобы суммировать их и, кроме того» показать, как каждое изображение может быть интерпретировано с точки зрения физико-химических свойств препарата независимо от того, контрастно оно или нет.

Многим биологическим лабораториям доступны теперь микроскопы, позволяющие использовать как проходящий, так и падающий свет. Эти микроскопы дают возможность последовательно изучать один и тот же препарат с помощью различных методов контрастирования, не переставляя его, Обычно препарат вначале просматривается в фазовом контрасте в проходящем свете, а затем простым поворотом рукоятки можно перейти к эпифлуоресценции или другому методу, использующему падающий свет, чтобы рассмотреть детали строения клеток. Одновременно оба метода используют очень редко, поскольку за счет отражения ухудшается изображение, создаваемое проходящим светом, и наоборот. Совместное использование двух методов описано в работе [23].

Светлопольная микроскопия, которая по-прежнему используется наиболее широко, будет рассматриваться в большинстве глав настоящей книги. Она может быть существенно усовершенствована за счет применения различных светофильтров, при этом полностью ее возможности реализуются только при установке освещения по методу Кёлера, описанному в гл. 1, разд. 1.1.

20