Активность надф-зависимых дегидрогеназ в сердце крыс при аллоксановом диабете и гипогликемии

Стельмах А.Ю. (аспирант)

Кафедра биологической и биоорганической химии ЯГМА

Научный руководитель – д.м.н., проф. Потапов П.П.

Окислительно-восстановительные ферменты, продуцирующие НАДФН2, поддерживают клеточные тиолы в восстановленном состоянии и обеспечивают функционирование ферментативной антиоксидантной системы. При аллоксановом диабете важным повреждающим фактором является увеличение интенсивности перекисного окисления липидов (В.Г.Баранов и соавт,, 1983). Повреждающее воздействие может оказывать и гипогликемия, нередко являющаяся следствием неадекватной терапии сахарного диабета (М.И.Балаболкин, 2000). Нами исследована активность НАДФ-зависимой изоцитратдегидрогеназы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, глютатионредуктазы в сердце, а также интенсивность перекисного окисления липидов (по накоплению малонового диальдегида) при аллоксановом диабете (7-е и 15-е сутки) и инсулиновой гипогликемии, вызываемой на фоне сахарного диабета у крыс. Диабет вызывали однократной инъекцией аллоксана в дозе 125 мг/кг массы, а гипогликемию (вплоть до развития гипогликемической комы, ГГК) введением инсулина (40 ЕД/кг массы).

У животных, обследованных на 7-е сутки после введения аллоксана, изменений исследованных показателей не обнаружено. Накопление малонового диальдегида было значительно (в 1,5-2 раза, Р<0,01) повышено на 15-е сутки экспериментального диабета и у животных, находящихся в состоянии ГГК, вызванной в этот же срок. При ГГК, вызванной у исходно здоровых животных, показатель снижался. Активность глютатиоредуктазы была нормальной при всех условиях эксперимента. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы была снижена только на 15-е сутки диабета. Изоцитратдегидрогеназная активность увеличивалась на 15-е сутки после инъекции аллоксана и при ГГК вызванной у животных диабетом соответственно на 13% (Р<0,05) и 14% (Р<0,05).

Полученные данные могут свидетельствовать о несостоятельности ферментативной антиоксидантной системы при гипогликемии, развивающейся на фоне экспериментального сахарного диабета.

Использование планшетного фотометра для количественной оценки роста микроорганизмов в жидкой питательной среде

Шитов Л.Н. (5 курс, фарм. ф-т), Борисова Н.С. (аспирант)

Кафедра микробиологии с вирусологией и иммунологией ЯГМА

Научный руководитель – д.м.н., проф. Романов В.А.

Для оценки интенсивности роста микроорганизмов широко используются фотометрические методы. Традиционно используемыми приборами являются фотоэлектроколориметры (ФЭК). Результаты, получаемые при использовании данных приборов, характеризуются высокой точностью и хорошей воспроизводимостью, однако при этом невозможен параллельный анализ большого числа проб; велики затраты времени на стерилизацию, очистку и промывание кювет. Перспективным направлением является использование планшетных фотометров (ПФ), нашедших широкое применение в клинической лабораторной диагностике. Это позволило бы значительно сократить затраты времени при фотометрировании большого количества бактериальных культур, поскольку ПФ позволяет в автоматическом режиме параллельно измерить оптическую плотность всех проб, внесённых в лунки. Кроме того, имеется возможность сохранения результатов в памяти фотометра, расчёта количественных характеристик различными способами, вывода на печать и др.

Основными проблемами, возникающими при перенесении стандартной фотометрической методики на ПФ, являются зависимость оптической плотности от объёма пробы, внесённого в лунку, и несоответствие стандартных наборов светофильтров ФЭКа и ПФ.

Целью настоящего исследования является сопоставление результатов, получаемых с использованием ФЭКа КФК-2 и ПФ ЭФОС 9305.

В качестве фотометрируемого объекта использовали суточную бульонную культуру золотистого стафилококка, раствор сравнения – чистый мясо-пептонный бульон. На ФЭКе измерение проводили в кюветах с толщиной слоя 1 мм, на ПФ – в стандартных планшетах (96 лунок объёмом 250 мкл). Светофильтры на ФЭКе: 400 нм, 440 нм, 590 нм; на ПФ: 405 нм, 450 нм, 592 нм.

В лунки вносили различные объёмы образцов; при этом значения оптической плотности, наиболее согласующиеся с показаниями ФЭКа, получены при внесении в лунки 50 мкл исследуемой жидкости. Также определяли характер зависимости оптической плотности от внесённого объёма при различных длинах волн; зависимость, наиболее близкая к линейной, наблюдалась при 450 нм и 592 нм (достоверность аппроксимации 0,98 и 0,88 соответственно). В таблице приведены средние значения оптических плотностей (Dср) и стандартные ошибки средних величин (для семи параллельных измерений).

Длины волн	Dср (ФЭК)	Dср (ПФ)	Стандартная ошибка среднего (ФЭК)	Стандартная ошибка среднего (ПФ)
400 нм (ФЭК); 405 нм (ПФ)	0,189	0,178	0,0019	0,0037
440 нм (ФЭК); 450 нм (ПФ)	0,167	0,174	0,0016	0,0050
590 нм (ФЭК) 592 нм (ПФ)	0,111	0,121	0,0018	0,0026

Таким образом, при использовании ПФ наиболее точная оценка наблюдается при длине волны 592 нм; однако для данной длины волны отмечена гораздо более низкая чувствительность, чем для 405 и 450 нм. Из указанных длин волн предпочтительной является 450 нм, поскольку для неё отмечена наибольшая достоверность линейности фотометрического сигнала.