2018 ВИР и БИОТ ВЕТ л.з. (методичка)

При тихой форме болезни вторая стадия (возбуждения) как бы выпадает,

развиваются параличи и животное погибает.

Гидрофобия проявляется у человека при попытке пить и поднесении к губам стакана с водой у больного возникает судорожное сокращение мышц глотки и гортани, дыхание становится шумным, в виде коротких судорожных вдохов. За-

тем подобные явления возникают при упоминании слова «вода» и при звуке льющейся воды. Также может быть и при дуновении в лицо струи воздуха (аэро-

фобия). После контакта пострадавшего человека с бешеным животным можно за-

медлить развитие инфекции (или даже преду-

предить!) путем незамедлительной обработки раны. Следует некоторое время подождать пока из раны вытечет небольшое количество крови,

затем рану обильно промывают водой с мылом,

обрабатывают спиртом, йодом и накладывают повязку. Промывая рану, необходимо действо-

вать осторожно, чтобы еще больше не повредить ткани. Местная обработка раны приносит наи-

большую пользу, если она проводится в течение часа после укуса. Пострадавшего направляют в медпункт, где проводят иммунизацию сыворот-

кой и антирабической вакциной. Лица, больные бешенством, госпитализируются – им вводят мор- Рисунок 53 - Строение вируса

ное помещение.

Возбудителем болезни является Rhabdoviridae, Lyssavirus, РНК-вирус (ри-

сунки 53, 54, 55). Вирус нейротропный. Вирионы имеют форму пули, спиральный тип симметрии; есть липопротеиновая оболочка с шипиками из гликопротеидов размером 10 нм. Геном - одноцепочечная линейная (-)РНК. Вирион обладает ге-

магглютинирующим свойством.

Вирус бешенства имеет 4 серотипа:

151

-вирус 1 серотипа – выделен в разных частях света;

-вирус 2 серотипа – выделен из костного мозга летучих мышей в Нигерии;

-вирус 3 серотипа – выделен от землеройки и человека;

-вирус 4 серотипа – выделен от лошадей, комаров и москитов в Нигерии и еще не классифицирован.

Все варианты вируса родственны в иммунологическом отношении.

Культивируют вирус путем интрацеребральных заражений кроликов и белых мышей; в культуре фибробластов, перевиваемых культурах клеток; на куриных эмбрионах.

В гниющим патологическом материале вирус сохраняется до 2-3 недель. Низкие температуры консервируют - в течение всей зимы вирус сохраняется в мозге зарытых в землю трупов животных. Высокие темпера-

туры вирус инактивируют: 50 °С - 1 час, 60

толитические процессы и гниение вызывают гибель возбудителя в головном моз-

ге трупов в зависимости от температуры через

5-90 дней.

Центральная нервная система является избирательным местом нахождения возбудителя бешенства. В наибольшем титре вирус обнаруживают в головном

152

Рисунок 56 - Продвижение вируса бешенства от ворот инфекции до места локализации.

мозге (аммоновых рогах, мозжечке, продолговатом мозге). После поражения ЦНС вирус проникает в кровь и во все внутренние органы, кроме сальника, селезенки и желчного пузыря. Вирус постоянно обнаруживается в слюнных железах и тканях глаз.

Не все укушенные животные или человек заболевают бешенством, т.к. не всегда в рану попадает слюна (например, остается на одежде). Т.к. трудно устано-

вить, в каких случаях вирус бешенства попадает в организм при укусе, а в каких заражения не происходит, то каждый укус собаки следует считать опасным и принимать соответствующие меры.

Условно патогенез при бешенстве можно разделить на 3 фазы (рисунок 56): 1. Экстраневральная (около 2 недель) – без видимого размножения вируса в

153

месте инокуляции;

2.Интраневральная – центростремительное размножение инфекции;

3.Диссеминация вируса по всему организму - характеризуется проявлением

симптомов болезни и гибелью животного.

Размножение вируса в сером веществе мозга обуславливает развитие диф-

фузного негнойного энцефалита. Из мозга по центробежным нервным путям ви-

рус попадает в слюнные железы, где размножается в клетках нервных узлов и по-

сле дегенерации выходит в протоки желез, инфицируя слюну. Выделение вируса со слюной начинается за 10 дней до появления первых клинических признаков.

До появления клинических признаков болезни вирус из мозга нейрогенным путем транспортируется в слюнные железы, сетчатку, надпочечники, где тоже репроду-

цируется. Воздействие возбудителя вначале обуславливает раздражение клеток важнейших отделов ЦНС, что приводит к повышению рефлекторной возбудимо-

сти и агрессивности заболевшего животного, вызывает судороги мышц. Затем происходит дегенерация нервных клеток. Смерть наступает вследствие паралича дыхательных мышц.

Большую роль играет иннервация пораженного участка. Чем богаче нервны-

ми окончаниями ткань в воротах инфекции, тем больше возможность развития болезни.

Животные, вакцинированные против бешенства, продуцируют вируснейтра-

лизующие, комплементсвязывающие, преципитирующие антитела. Полагают, что вакцинация вызывает биохимические изменения, снижающие чувствительность нервных клеток к вирусу. Сущность вакцинации сводится к активному накопле-

ния антител к вирусу бешенства, которые нейтрализуют вирус в месте проникно-

вения его в организм до внедрения в нервные элементы или при вынужденной иммунизации нейтрализуют вирус по пути к центральной нервной системе. Акти-

визируются также Т-лимфоциты, ответственные за продукцию интерферона, по-

этому при бешенстве возможно постинфекционная вакцинация. Вакцинный штамм, проникая в нервные клетки раньше полевого штамма, заставляет их выра-

154

батывать интерферон, инактивирующий вирус дикого бешенства и антитела, бло-

кирующие специфические клеточные рецепторы.

Клинически больных животных не лечат! Заболевших животных немедлен-

но изолируют и убивают. После укусов человеку применяют антирабический гамма-глобулин и антирабическую иммунную сыворотку.

В качестве специфической профилактики применяют различные вакцины.

Вакцины живые тканевые (мозговые), эмбриональные (куриные и утиные эм-

брионы) и культуральные (первично-трипсинизированные и перевиваемые куль-

туры клеток ВНК-21/13), инактивированные (84 разновидности антирабических вакцин в 41 стране мира).

Перечень контрольных вопросов:

1.Возбудитель вируса бешенства относится к какому семейству вирусов.

2.Кто открыл вакцину против бешенства.

3.Постановка РИФ.

4.Как выявляют тельца Бабеша-Негри.

5.На каких животных и как осуществляют постановку биологической про-

бы при бешенстве.

6.Схема лабораторной диагностики бешенства.

7.Методы прижизненной диагностики бешенства.

Тема 2.2. Лабораторная диагностика оспы

Цель: изучить методы лабораторной диагностики оспы животных и биологи-

ческие особенности возбудителя

Содержание:

отбор патологического материала при оспе;

вирусоскопия;

биологическая проба;

серологический метод диагностики;

некоторые сведения о вирусе оспы.

155

Некоторые вирусы оспы способны размножаться на хориоаллантоисной обо-

лочке куриных эмбрионов, образуя характерные некротические узелки - оспины.

Также вирусы размножаются и на первичных культурах клеток своего вида жи-

вотных с образованием ЦПД.

В лабораторию посылают содержимое везикул или пустул.

Вирусоскопия. Готовят мазки на предметных стеклах с участка кожи или слизистой с оспенным поражением и окрашивают мазки. Для окраски мазков ме-

тодом серебрения по М. А. Морозову готовят 3 реактива.

Реактив № 1 (жидкость Руге): 1 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл 40 %

формальдегида (формалин) и 100 мл дистиллированной воды соединить в одном сосуде.

Реактив № 2 (протрава): 5 г танина растворить в 100 мл дистиллированной воды и добавить 1 мл жидкой карболовой кислоты (фенола). Чтобы превратить кристаллическую карболовую кислоту в жидкую, ее надо расплавить на водяной бане при 56 °С. Танин следует высокого качества. Для испытания на чистоту 1 г

танина растворить в 5 мл воды и добавить 10 мл 90 % спирта. В течение 1 ч не должно появиться помутнения (декстрин, камель). Не должно быть помутнения

(сахар, соли) и при последующем добавлении 5 мл эфира.

Реактив № 3 (раствор аммиачного серебра): растворить 5 г кристаллического азотнокислого серебра в 100 мл дистиллированной воды. От общего раствора от-

лить в другой сосуд небольшую (примерно десятую) часть. К оставшемуся рас-

твору по каплям добавить крепкий 25 % аммиак. Вначале образуется плотный бу-

ро-черный осадок, который при дальнейшем добавлении аммиака растворяется.

Задача состоит в том, чтобы не довести до полного растворения осадка, а добить-

ся получения слегка мутного (опалесцирующего) раствора. Если это не удалось и раствор стал полностью прозрачным, по каплям надо добавить раствор азотно-

кислого серебра из отлитой вначале части до помутнения основного раствора.

Добавляя по каплям в основной раствор то аммиак, то азотнокислое серебро, надо добиться опалесценции. Полученный опалесцирующий раствор надо развести

156

дистиллированной водой 1:10 и использовать для окраски препаратов. Раствор очень стоек, но его надо хранить в темноте в склянке с притертой пробкой.

Методика окрашивания по М. А. Морозову: обрабатывают препарат реактивом № 1 (жидкость Руге) 3-5 мин, промывают дистиллированной водой; опускают в реактив № 2 (протрава) с подогревом (до появления пара) на 1-2 мин, тщательно отмывают дистиллированной водой; обрабатывают реактивом № 3 (раствор аммиачного серебра) 1-2 мин при легком подогреве до появления темно-коричневой окраски, тщательно отмывают дистиллированной водой; сушат на воздухе и исследуют с масляной иммерсией под микроскопом.

Результат: на желтом фоне мелкие темно- Рисунок 57 - Окраска по коричневые тельца округло-овальной формы, лежа- Морозову.

щие скоплениями, рядами или диффузной массой, но неодиночные. Эти тельца и есть вирионы оспенных вирусов (рисунок 57).

Окрашивать удобно над эмалированными кюветами (18 x 24 см) с положенными на их края «мостиками» (2 пипетки на 1-2 мл, соединенные на обоих концах резиновыми трубками подходящего диаметра). Для каждого реактива нужна своя пипетка.

Достоинства вирусоскопии: быстрота получения ответа, простота и доступность техники исполнения.

Недостатки: дает четкие результаты только при исследовании мазков везикулярной жидкости (при исследовании пустул и корок результаты значительно снижаются), не позволяет дифференцировать разные вирусы оспенной группы и легко отличать вирионы от сходных по форме клеточных элементов.

Биопроба. Ставится на естественно восприимчивых животных и на первичных культурах клеток этих же животных. К вирусам осповакцины, оспы коров и оспы лошадей чувствительны кролики, а эмбрионы чувствительны не только к вирусу оспы кур, но и к вирусам осповакцины, оспы коров, оспы голубей.

157

цированный гребень.

Из реакций применяют МФА и РДП для выявления антигена.

Лечение. Сыворотки реконвалесцентов и гипериммунных животных слабо эффективны. Лучшее действие оказывают гаммаглобулины.

158

Специфическая профилактика: гидроокисьалюминиевая фармолвакцина против оспы овец, коз; сухая культуральная вирус-вакцина против оспы овец из

штамма НИСХИ; вакцина против оспы кур из вируса оспы голубей.

ного, на ХАО куриных эмбрионов.

Устойчивость: в корочках до 1,5 лет, при понижении температуры – не-

сколько лет, при гниении погибают быстро. Дезсредства губительны.

вой полостей (серо-желтые наложения, глубоко врастающие в слизистую оболоч-

ку). При геморрагической форме болезни (черная оспа) - многочисленные крово-

излияния внутри оспенных пузырьков, кровавая рвота, понос с примесью крови.

Оспа овец сопровождается опуханием век, поражаются лёгкие и глаза (бель-

мо); при осложнениях - суставы и ЖКТ (хромота и поносы). Оспа свиней харак-

159

теризуется почти одновременным появлением на разных участках тела розеол и папул, быстро превращаются в желтовато-серые пустулы, зудом, поносами. Оспа коров сопровождается снижением удоев и ухудшением качества молока. Сыпь на коже проходит все стадии формирования. Оспины плоские, синевато-чёрные. Ос-

па лошадей проявляется в виде папулёзно-пустулёзного стоматита, везикулёзно-

пустулёзного дерматита и в смешанной форме. Оспа птиц - поражаются внутрен-

ние органы, и птица постепенно худеет и гибнет (без видимых симптомов). У кур

- наросты, часто сливающиеся между собой, возможно вторичное высыпание ос-

пин на непоражённых участках тела.

Иммунитет пожизненный. У переболевших животных вырабатываются ней-

трализующие, преципитирующие, комплементсвязывающие антитела.

Перечень контрольных вопросов:

1.Патологический материал, отбираемый при оспе.

2.Окрашивание мазков методом серебрения по Морозову.

3.Постановка биопробы на кроликах и птицах.

4.Постановка МФА и РДП на оспу.

5.Возбудитель оспы.

6.Культивирование вируса.

7.Устойчивость вируса оспы.

8.Патогенез и клиническая картина оспы у животных.

9.Вакцинация животных против оспы.

Тема 2.3. Определение вируса ящура в реакции связывания комплемента

(РСК)

Цель: изучить методы лабораторной диагностики ящура и биологические особенности возбудителя.

Содержание:

отбор патологического материала при ящуре;

РСК на ящур;

РДСК на ящур;

160