Литература

1. Кульбаев И.С., Ахметова Г. К., Чинтаева Ф.К.,Куттумура­това А.Т.Изменение кишечного лимфотока при локальных термовоздействиях // Регуляция функций лимфатической системы: тр. Ин-та физиол. АН КазССР. Алма-Ата, 1991. С.77-83

2. Кульбаев И.С., Костюшина Н.В. Микрогемодинамика и лимфоток в тонкой кишке собак при действии гистамина на фоне водной нагрузки и гипертермии // Физиол. журн. им. И.М.Сеченова. 1992. Т.78. № 5. С.54-5

3. Капышева У.Н., Колбай И.С., Куанышбекова Г.А., Байдалинов А.И. Зависимость стрессоустойчивости у крыс от типа высшей нервной деятельности // Известия НАН РК. Сер.биол. и мед. 2004. № 2. С. 49-56.

4. Kolbay I.S., Kapysheva U., Akhmetova M., Djusipbekova B., Baidalinov A., Baimbetova A. The relationship between rats resistance to stress, higher nervous activity types and the brain biogenic amines content // ХХХV International Congress of Physiological Sciences. San Diego, 2005. P.33.

5. Hall C.S. Original methods // J.Comp.Psychol. 1934. V.18. Р.385.

6. Симонов П.В. Условные реакции эмоционального резонанса у крыс // Нейрофизиологический подход к анализу внутривидового поведения. М., 1976. - С.6.

7. Rutili G., Granger D.N., Taylor A.E. е.а. Analysis of lymphatic protein data. IV. Comparison of the different methods used to estimate reflection coefficients and permeability – surface area product // Microvasc. Res. – 1982. - V.23. - P.347-360.

Состояние про- и антиоксидантных систем у крыс при однократном действии метил-1-н-1,2,4-триазола

Ш.К. Бахтиярова, И.С. Колбай, Ж.С. Кисебаев, А.Т. Оразова, А. Баимбетова, У.Н. Капышева, А.Е. Бутабаева

Институт физиологии человека и животных ЦБИ КН МОН РК, Центральная лаборатория биоконтроля, сертификации и предклинических испытаний ЦБИ КН МОН РК, г. Алматы, Республика Казахстан

В настоящее время, среди пятнадцати активно используемых космодромов мира, «Байконур» по-прежнему занимает первое место по количеству осуществляемых пилотируемых запусков [1]. 1,1-диметилгидразин (1,1-ДМГ, несимметричный диметилгидразин), известный как ракетное топливо «гептил», а также его производные, являются токсичными соединениями для организмов. Попадая в животный организм через дыхательные пути, кожу, или пищеварительный тракт, эти вещества оказывают негативное влияние на организм. Химический анализ образцов почвы, взятой в местах падения отработанных ступеней или при авариях ракет-носителей, показал, что наряду с 1,1-ДМГ могут отмечаться повышенные концентрации и других производных 1,1-ДМГ, таких как нитрозодиметиламин, гуанидин, метил-1-Н-1,2,4-триазол (триазол) [2].

Проведенный анализ литературы показал, что производные триазола, такие как пирродиазол (1-H-1,2,4-триазол), 3-амино-1H-1,2,4-триазол могут использоваться в качестве пестицидов, характеризующихся высокими значениями LD₅₀ [3]. Однако при этом оставалось малоизученным влияние триазола на состояние про- и антиоксидантных систем, что и послужило основанием для проведения настоящей работы.

Материал и методы исследования. Опыты проведены на 28 здоровых взрослых лабораторных крысах-альбиносах обоего пола массой 190-260 г. Животные 1-й группы служили контролем и им в условиях нембуталового наркоза (4 мг/100 г массы тела) осуществляли одномоментное введение в просвет тонкой кишки 0,1 мл физиологического раствора. Крысам 2-й группы в условиях нембуталового наркоза осуществляли одномоментное введение в просвет тонкой кишки 0,1 мл раствора метил-1-Н-1,2,4-триазола из расчета 10 мг/100 г массы тела животного. У крыс обеих групп через 1 час после введения триазола или физиологического раствора сосудистую систему промывали охлажденным до 6С физиологическим раствором и брали кусочки печени, которые гомогенизировали на холоду с помощью гомогенизатора типа «Ultra Turrax T8» и получали постмитохондриальную фракцию микросом, центрифугируя пробирки при 4С в течение 1 часа при 10000 g.

В проведенных наблюдениях в микросомах гомогенатов печени с помощью биуретовой методики определяли концентрацию общего белка. Об уровне перекисного окисления липидов судили по содержанию в супернатантах гомогенатов печени конечных (малоновый диальдегид, МДА) и промежуточных (диеновые коньюгаты, ДК) продуктов пероксидации [4]. Также определяли каталазную активность в супернатантах гомогенатов печени [5]. Уровень общей протеолитической активности (ОПА) микросом печени определяли с использованием разработанной нами методики с использованием для осаждения белков этилового спирта [6]. Калибровочную кривую строили с использованием аминокислоты фенилаланин и полученные данные выражали в мкг Фенилаланина (Фен) на 1 мл (для эритроцитов и плазмы), на 1 г ткани (для гомогенатов) на 1 час инкубации. Контроль - протеолитическая активность проб без инкубации.

Полученные результаты статистически обрабатывали с использованием программы Microsoft Excel и изменения параметров с учетом непарного критерия Фишера - Стьюдента считали достоверными при р 0.05.

Результаты исследования и их обсуждения. В проведенных исследованиях зарегистрировано повышение уровня перекисного окисления липидов микросом печени, о чем свидетельствовало накопление в основном диеновых коньюгатов (увеличение на 13,0% (р<0,05) по сравнению с контролем, равным 0,23±0,02 нмоль/мг белка), являющихся промежуточными продуктами липопероксидации (рисунок 1).

Рис. 1. Изменение содержания диеновых коньюгатов (ДК) и малонового диальдегида (МДА) в микросомах печени (нмоль/мг белка), а также каталазной активности (гН₂О₂/мг белка) у крыс после введения триазола в полость кишки

В то же время количество конечных продуктов пероксидации липидов (малоновый диальдегид) увеличивалось в меньшей степени (на 4,3% от фоновых величин, равных 0,47±0,02 нмоль/мг белка), что отражено на рисунке 1, т.е. этот токсикант при однократном воздействии все же вызывал развитие окислительного стресса. Нами зарегистрировано снижение уровня каталазной активности в супернатантах печени – на 9,3% по сравнению с исходными 0,43±0,02 г Н₂О₂/мг белка (рисунок 1).

В проведенных экпериментах зарегистрировано недостоверное снижение уровня общей протеолитической активности (ОПА) микросом печени у крыс при действии триазола (рисунок 2): с 310,20±11,31 мкгФен/г×час на 8,2%. Приведенные результаты свидетельствуют, что триазол при его однократном введении в просвет кишки влияет на состояние клеточных мембран. Эти данные подтверждают предположение о включении защитных механизмов организма, направленных на нивелирование негативного действия триазола, вероятнее всего за счет активации системы антиоксидантной защиты, поскольку действие любого токсиканта связано с развитием на мембранном уровне окислительного стресса. Сопоставление величин снижения уровня каталазной активности микросом печени и накопления диеновых коньюгатов микросом печени показывает, что триазол сам по себе действует на антиоксидантную систему гепатоцитов, вызывая повышение содержания диеновых коньюгатов и снижение активности каталазы.

Рис. 2. Изменение уровня ОПА (мкгФен/г×час) микросом печени у крыс через час после введения в полость кишки триазола

Известно, что протеолитические ферменты можно рассматривать как второй уровень антиоксидантной защиты организма, основная задача которого – освобожение внутренней среды от конформационно измененных под влиянием токсикантов белков, накопление которых может сопровождаться развитием патологий. Учитывая это, подавление под влиянием триазола активности протеолитических ферментов гепатоцитов можно рассматривать как нарушение и этой линии защиты организма.