107-15

26.Дробные методы стерилизации.

27.Методы частичного обеспложивания.

28.Методы контроля стерилизации.

29.Дезинфицирующие вещества, механизм их действия. Консерванты.

30.Экология микробов. Микрофлора воды, воздуха, почвы. Роль микробов в круговороте веществ в природе.

31.Понятие о санитарно-показательных микроорганизмах. Санитарнопоказательные микроорганизмы для почвы, воды, воздуха.

32.Микробиологические исследования в аптечных учреждениях: объекты, отбор проб, методы исследования. Какие показатели определяются?

33.Источники и пути загрязнения микробами лекарственного растительного сырья. Правила хранения.

34.Исследование лекарственных средств, стерилизуемых в процессе производства. Ход исследования, оценка результатов.

35.Предварительное определение антимикробной активности лекарственных средств: как проводится, оценка результатов.

36.Исследования лекарственных средств, не стерилизуемых в процессе производства: ход исследования. Определение общего количества бактерий и грибов.

37.Выявление и идентификация микробов, наличие которых недопустимо

внестерильных лекарственных средствах: ход исследования, оценка результатов.

38.Антибиотики и химиотерапевтические препараты.

39.Побочные явления при антибиотикотерапии.

40.Лекарственная устойчивость микробов.

41.Бактериофагия.

42.Генетика микроорганизмов. Особенности структуры генома прокариотов.

43.Внехромосомные факторы наследственности.

44.Формы изменчивости микроорганизмов.

45.Применение генетических методов в диагностике инфекционных заболеваний.

46.Достижения генетической инженерии и биотехнологии.

47.Геномная инженерия: методы, достижения.

48.Значение изменчивости микроорганизмов для практической медицины.

Контрольные практические задания по разделу «Физиология микробов. Микробиологические исследования лекарственных средств»

1.Произведите посев материала на жидкую питательную среду для выделения анаэробных микроорганизмов.

2.Произведите посев материала штриховым способом на плотную питательную среду для выделения чистой культуры микроорганизмов.

3.Произведите посев материала по Дригальскому на плотную питательную среду для выделения чистой культуры микроорганизмов.

61

4.Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Эндо.

5.Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Плоскирева.

6.Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Левина.

7.Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Китта-Тароцци.

8.Оцените результаты исследования ферментативной активности бактерий на среде Олькеницкого.

9.Идентифицируйте культуру микроорганизмов по результатам определения биохимической активности на средах Гисса.

10.Оцените результаты исследования активности антибиотиков методом диффузии в агар и методом серийных разведений.

11.Оцените результат исследования чувствительности исследуемой культуры микроорганизмов к антибиотикам диско-диффузионным методом.

12.Оцените результат исследования по определению титра бактериофага на жидкой питательной среде.

Работа студента на практическом занятии

1. Подведение итога по разделу: «Физиология микробов. Санитарная микробиология. Санитарно-микробиологический контроль в фармацевтических учреждениях. Химиотерапевтические препараты. Антибиотики. Бактериофагия. Медицинская биотехнология. Генетика микроорганизмов».

Выполнение контрольных заданий. Ответы на контрольные вопросы.

Занятие 14 Инфекционный процесс. Патогенность и вирулентность микроорганизмов.

Факторы врождённого иммунитета

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения материала необходимо знать:

-понятие об инфекции, формы инфекции;

-понятие о патогенности и вирулентности микроорганизмов, факторы вирулентности и способы их выявления;

-определение понятия иммунитет, виды иммунитета;

-клеточные и гуморальные факторы врождённого (видового) иммунитета.

Исходный уровень знаний

Для усвоения материала студенту необходимо повторить:

-виды симбиоза макро- и микроорганизмов;

-основные группы микроорганизмов

Из курса биологии вспомнить клетки крови, их морфологию; приготовление мазка из крови, фиксацию, окраску.

62

Цель занятия

1. Изучить:

-методы выявления факторов патогенности микроорганизмов;

-особенности и динамику развития инфекционного процесса, формы его проявления, пути передачи.

2. Ознакомиться:

-с основными методами экспериментального заражения и бактериологического исследования трупов животных;

-с клеточными и гуморальными механизмами врождённого иммунитета

(фагоцитоз, лизоцим, комплемент, интерфероны).

3. Освоить методы оценки факторов врождённого иммунитета организма человека.

План изучения темы

1.Инфекционный процесс (определение).

2.Роль микроорганизма в инфекционном процессе.

3.Роль макроорганизма и условий внешней среды.

4.Характерные черты инфекционной болезни.

5.Формы проявления инфекционного процесса.

6.Элементы эпидемического процесса.

7.Иммунитет его виды.

8.Врождённые факторы защиты. Фагоцитоз.

9.Противовирусный иммунитет.

После изучения темы студент должен уметь

1.Определять факторы вирулентности микроорганизмов.

2.Оценить факторы врождённого иммунитета организма (гуморальные и клеточные).

Дополнительный материал к занятию

Пирогены (греч. pyr – огонь, жар + genes – порождающий) бактериального происхождения – это эндотоксины грамотрицательных бактерий. В больших дозах эндотоксины вызывают интоксикацию. При внутривенном и внутримышечном введении малых доз отмечается повышение температуры тела, стимуляция фагоцитоза, активация комплемента по альтернативному пути (см. «Иммунитет»), увеличение проницаемости капилляров.

Значение пирогенов в медицине:

1)эндотоксины грамотрицательных бактерий применяются в качестве лекарственных препаратов, вызывающих повышение температуры тела, стимуляцию иммунитета. Это пирогенал, колипироген и другие. В лечебных целях эти средства вводятся внутримышечно или внутривенно;

2)наличие пирогенов недопустимо в лекарственных препаратах, предназначенных для внутривенного введения. Пирогенный эффект может возникать из-за присутствия в лекарственных препаратах бактериальных

63

эндотоксинов, не разрушенных при стерилизации. В связи с этим инъекционные растворы до стерилизации, а также дистиллированная вода, предназначенная для их приготовления, должны отвечать высоким требованиям микробной чистоты. Государственная фармакопея предусматривает определение пирогенности дистиллированной воды и лекарственных средств, стерилизуемых в процессе производства (см. занятие 10).

Контрольные вопросы

Формы симбиоза микро- и макроорганизма. Дайте определение понятия «инфекционный процесс». Назовите условия, от которых зависит возникновение, течение и исход инфекционного процесса. Что такое патогенность микроба? Что такое специфичность и органотропность микроба? Что такое вирулентность микробов. Как её определяют, в каких единицах измеряют?

Задача: расположите микробы в порядке возрастания вирулентности в зависимости от Dlm микроба: 250 млн микробных клеток, 500 млн микробных клеток, 1 млрд микробных клеток.

Каким образом можно понизить вирулентность микробов? Каким образом можно повысить её? Назовите и охарактеризуйте свойства патогенных микробов: адгезивность, инвазивность, антифагоцитарная активность, токсинообразование.

С какими факторами вирулентности связаны эти свойства? Бактериальные белковые токсины и эндотоксины, различия между ними: образование, получение, химическая природа, характер действия, антигенность, действие формалина и тепла. Какой токсин сильнее - с Dlm 0,03 мл или с Dlm 0,001 мл? Анатоксины, их получение и основные свойства. Перечислите токсигенные бактерии. Пирогены бактериального происхождения, их характеристика, применение в медицине; в каких препаратах присутствие пирогенов является нежелательным? Как определяется пирогенность воды и растворов? Влияние состояния макроорганизма и условий внешней среды на возникновение и течение инфекционного процесса. Что такое условно-патогенные микробы и какова их роль в современной инфекционной патологии? Укажите признаки, по которым инфекционные болезни отличаются от неинфекционных. Периоды течения инфекционной болезни. Элементы эпидемического процесса: источник, механизм и пути передачи возбудителя, восприимчивость населения. Что такое факторы передачи возбудителей? Поднятие о спорадической заболеваемости, эпидемии, пандемии, эндемии. Что такое ИСМП? Какие микробы чаще всего их вызывают? Понятие о «госпитальных штаммах», их основные свойства. Экспериментальный метод исследования - в каких целях применяется? Какие животные чаще всего используются в микробиологических лабораториях? Какие меры предосторожности следует соблюдать при проведении исследований? Способы заражения животных.

Определение понятия «иммунитет». Виды иммунитета в зависимости от способа его формирования. Виды иммунитета в зависимости от агента, против которого он направлен. Характеристика естественной резистентности

64

организма (видовой или индивидуальный, специфический или неспецифический, передаётся ли по наследству). Назовите основные факторы врождённого иммунитета организма. Охарактеризуйте защитные функции кожи, слизистых оболочек, желудочного сока и кишечника, лимфатических узлов, мерцательного эпителия. Автор фагоцитарной теории иммунитета, основные положения этой теории. Какие клетки обладают фагоцитарной активностью? Назовите фазы фагоцитарного процесса. Какими показателями определяют фагоцитарную активность лейкоцитов? Какое различие между завершённым и незавершённым фагоцитозом? При каких заболеваниях наблюдается незавершённый фагоцитоз? Укажите факторы, усиливающие фагоцитоз. Перечислите гуморальные защитные факторы крови. Лизоцим: кто впервые обнаружил лизоцим, в каком материале; химическая природа лизоцима, отношение к нагреванию, где содержится в организме; что происходит с бактериями под действием лизоцима, влияет ли он на вирусы. Комплемент, его химическая структура, отношение к нагреванию, из каких фракций состоит, где содержится в организме; пути активации комплемента; какое животное используется для получения комплемента; почему? При какой температуре и в течение какого времени можно разрушить комплемент; как называется сыворотка, полученная при таком режиме? Противовирусный иммунитет имеет свои особенности - почему? Чем характеризуется врождённый противовирусный иммунитет? Неспецифические противовирусные ингибиторы, их химическая природа, виды, механизм действия. Интерфероны, история открытия и изучения. Что такое интерфероногены, какие лекарственные средства являются интерфероногенами? Какие клетки организма продуцируют интерфероны? Классы интерферонов, их происхождение и действие. Механизм противовирусного действия интерферона, в чём выражается его специфичность. Что собой представляет препарат интерферона, применяемый для лечения; химическая природа, отношение к температуре, условия хранения. Какое действие (кроме противовирусного) на организм оказывают интерфероны? Генно-инженерные интерфероны, их названия, к каким классам относятся?

Задания для выполнения в процессе самоподготовки

1.Заполните таблицу в рабочей тетради «Основные факторы вирулентности микробов».

2.Факторы врождённой защиты организма: название фактора, где содержится, какое действие оказывает?

3.Клетки организма, способные к фагоцитозу.

Работа студента на практическом занятии

1. Изучение факторов вирулентности микробов:

-посмотрите посевы стафилококков и стрептококков на кровяном агаре. Объясните причину образования зон гемолиза вокруг колоний;

-учтите готовый результат опыта по выявлению плазмокоагулазы у стафилококков.

65

2.Определите вирулентность микробов. Перепишите в тетради протокол

ирассчитайте Dlm и LD50.

3.Определите Dlm дифтерийного токсина. Перепишите протокол опыта и укажите Dlm.

4.Ознакомьтесь со способами заражения экспериментальных животных и методикой вскрытия трупа мыши, заражённой культурой микроба, по видеофильму.

5.Опыт по определению бактерицидности желудочного сока.

Цель опыта: определить, оказывает ли желудочный сок бактерицидное действие на дизентерийные бактерии.

Ход опыта. Опыт ставится в стерильных пробирках с соблюдением правил асептики. В опытную пробирку наливают 2 мл желудочного сока, в 1 контрольную пробирку - 2 мл физиологического раствора, в другую - 2 мл желудочного сока. В 1 и 2 пробирки добавляют по 2 капли суточной бульонной культуры дизентерийных бактерий. После этого пробирки помещают в термостат на 30 минут. Затем изо всех пробирок производят высевы на скошенный агар. Посевы ставят в термостат на сутки.

Результат: учтите на следующем занятии. Вывод: сформулируйте.

Опыт определения бактерицидности желудочного сока.

6. Опыт по определению лизоцимной активности сыворотки крови.

Цель опыта: определить, обладает ли нормальная сыворотка крови лизоцимной активностью. Методика опыта основана на способности лизоцима лизировать чувствительный к нему микроб - микрококк.

Ход опыта: в опытную пробирку наливают 0,5 мл инактивированной сыворотки крови в разведении 1:20, в контрольную – 0,5 мл физиологического раствора. В обе пробирки добавляют по 2-3 капли суспензии микрококка, встряхивают.

Результат: отметьте просветление в опытной пробирке. Вывод: сформулируйте.

7.Изучение явления фагоцитоза. Промикроскопируйте и зарисуйте препарат фагоцитоза стафилококков.

8.Изучение незавершённого фагоцитоза. Промикроскопируйте и зарисуйте препарат из гноя больного гонореей.

Занятие 15 Антигены и антитела. Реакции иммунитета

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения материала необходимо знать:

-антигены, способы их получения и практическое применение;

-антитела, их свойства, строение, структурные основы специфичности; процесс антителогенеза;

-реакции иммунитета, механизм, ингредиенты, методы постановки, практическое применение.

66

Исходный уровень знаний

Для усвоения материала темы необходимо повторить структуру простых и сложных белков, структуру иммуноглобулинов, клетки крови и органов иммунной системы; резус-фактор и антитела к нему.

Цель занятия

1. Выработать чёткое преставление:

-об антигенах, их разнообразии, свойствах;

-об антителах, их строении, классах иммуноглобулинов, их роли. 2. Изучить:

-строение и функционирование иммунной системы;

-специфические формы иммунного ответа: клеточный и гуморальный ответы, иммунологическая память, иммунологическая толерантность;

-механизмы взаимодействия антиген-антитело: принципы и методы постановки реакций агглютинации и преципитации.

3. Научиться интерпретировать результаты серологических исследований.

План изучения темы

1.Антигены микробов.

2.Антитела.

3.Реакции иммунитета: реакция нейтрализации токсина антитоксинами, реакция агглютинации, реакция преципитации.

После изучения темы студент должен уметь

1.Определить бактерицидную активность желудочного сока.

2.Поставить реакцию агглютинации на стекле, развёрнутую реакцию агглютинации, реакцию кольцепреципитации в пробирках.

3.Учесть готовый результат развёрнутой реакции агглютинации в пробирках; учесть и оценить реакцию преципитации в агаре.

Контрольные вопросы

Приобретённый иммунитет, отличие его от наследственного (видового, врождённого). Виды приобретённого иммунитета.

Задача. В семье заболел дифтерией ребёнок Валерий, 3 лет. Другие члены семьи не заболели, причём мать переболела дифтерией в детстве, а отец был привит дифтерийным анатоксином. Старшая сестра Наташа, 5 лет, в своё время не была привита дифтерийным анатоксином из-за медицинских противопоказаний, поэтому пришлось провести ей экстренную профилактику с помощью противодифтерийной антитоксической сыворотки. Младший брат, Виталий, 3 месяцев, не заболел, хотя ничем не был привит. В доме есть кошка и собака, они не заболели. Назовите для каждого из членов семьи и для животных вид иммунитета, благодаря которому они не заболели.

Что такое антиген? Какие вещества могут быть антигенами? Полноценные антигены и гаптены, чем они отличаются друг от друга? Структура антигена. Как называется часть молекулы антигена, определяющая

67

его специфичность? Назовите известные вам антигены. Что такое аутоантигены? Антигенное строение микробной клетки. Жгутиковые и соматические антигены; локализация, буквенное обозначение, химическая природа, отношение к температуре, способ получения, практическое применение. Анатоксин, его свойства, применение, получение. Какая ткань составляет иммунную систему организма? Укажите центральные и периферические органы иммунной системы человека. Опишите процесс формирования гуморального и клеточного иммунного ответа. Укажите клетки, которые осуществляют захват и переваривание антигена; клетки, которые взаимодействуют при формировании гуморального иммунитета, клеточного иммунитета; клетки, которые трансформируются и превращаются в плазмоциты, продуцирующие антитела; клетки, стимулирующие этот процесс; клетки, которые угнетают иммунный ответ; клетки, которые убивают опухолевые клетки, и заражённые вирусом клетки. Что такое антитела? Как получить иммунную сыворотку? Как получить сыворотку, которая бы нейтрализовала столбнячный токсин? Против каких антигенов образуются антитоксины, агглютинины, гемолизины? Какие антитела образуются при введении в организм дифтерийного анатоксина? дифтерийных бактерий? Химическая природа и структура антител. Что такое активный центр иммуноглобулина? Перечислите классы иммуноглобулинов, их свойства. Укажите класс иммуноглобулинов, способных проникать через плаценту. К какому классу относятся секреторные иммуноглобулины? Динамика накопления антител. Чем отличается вторичный иммунный ответ от первичного? Как в практической медицине используются знания о динамике иммунного ответа? Что такое реакции иммунитета, каков их механизм, фазы реакции. В каких двух направлениях используют реакции иммунитета? Перечислите реакции иммунитета.

Задача. Поставьте вместо пропущенных слов «анатоксин» или «антитоксин»: _________ является антигеном, _________ является антителом,

__________ создаёт при введении в организм активный иммунитет, __________

создаёт при введении в организм пассивный иммунитет, __________ получают путём иммунизации животных, ___________ получают из токсина при воздействии формалином и теплом, ___________ нейтрализует токсины,

__________ вызывает в организме образование антител.

Реакция агглютинации: что такое агглютинация, что является антигеном, что - антителом; методы постановки, какие контроли ставятся и для чего; как должны выглядеть контроли? Агглютинирующие сыворотки, что они содержат, как их получают, для чего применяются; что такое титр агглютинирующей сыворотки? Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации: что служит антигеном в этой реакции, как его получают, механизм реакции? Что такое эритроцитарный диагностикум? Что такое антительный эритроцитарный диагностикум? Реакции преципитации: что такое преципитация, что служит антигеном; как получить преципитирующую сыворотку? Что такое титр преципитирующей сыворотки? Методы постановки, практическое применение.

68

Задача. На одежде человека, обвиняемого в убийстве, обнаружено пятно крови. С помощью какой реакции можно определить, человеческая ли это кровь; что в этой реакции будет антигеном и что антителами; какой диагностический препарат нужно иметь в лаборатории для этой реакции, как его приготовляют?

Задача. Как при помощи реакции преципитации определить, является ли доставленный для анализа образец мясом крупного рогатого скота или мясом лошади; какие необходимы диагностические препараты?

Реакция преципитации в агаровом геле: способы постановки, практическое применение.

Задания для выполнения в процессе самоподготовки

Заполните таблицу в рабочей тетради: «Реакции иммунитета»:

Работа студента на практическом занятии

1. Постановка развёрнутой реакции агглютинации.

Цель опыта: определить титр агглютинирующей сыворотки.

Материал: агглютинирующая сыворотка, взвесь бактерий, физиологический раствор.

Ход опыта: взять 6 пробирок. Во все пробирки налить по 1 мл физиологического раствора. Затем в 1 пробирку налить 1 мл агглютинирующей сыворотки, разведённой 1:50. Перенести 1 мл из 1-й во 2-ю, из 2-й в 3-ю, из 3-й в 4-ю, из 4-й в 5-ю, а из 5-й пробирки вылить 1 мл в дезинфицирующий раствор. Добавить по 2 капли антигена во все пробирки. Поставить на 2 часа в термостат, после чего учесть результат.

Результат: отметьте, в каких пробирках произошла агглютинация. Вывод: укажите титр сыворотки.

2.Учтите результат опыта по изучению бактерицидной активности желудочного сока. Сформулируйте вывод.

3.Постановка реакции агглютинации на стекле.

Цель опыта: определить, являются ли антигены бактерий и антитела иммунной сыворотки специфичными друг для друга.

Материал: физиологический раствор, иммунная сыворотка, культура бактерий на скошенном агаре.

Ход опыта: нарисуйте. Результат: отметьте на рисунке. Вывод: сформулируйте.

4.Изучите реакцию пассивной гемагглютинации по таблице и по демонстрационной реакции.

5.Постановка реакции преципитации.

Цель опыта: определить видовую принадлежность белка крови. Материалы: вытяжка из кровяного пятна, преципитирующие сыворотки

против белка человека и белка барана. Ход опыта: таблица.

Результат: отметьте, в какой пробирке произошла преципитация. Вывод: сформулируйте.

69

6.По демонстрационной реакции преципитации в агаровом геле определите токсигенность дифтерийных палочек. Укажите, какие культуры являются токсигенными.

7.Изучите диагностические препараты. Препараты, содержащие антиген: диагностикумы, эритроцитарные диагностикумы. Препараты, содержащие антитела: агглютинирующие сыворотки, преципитирующие сыворотки.

Занятие 16 Реакции иммунитета (окончание)

Цель самоподготовки

После самостоятельного изучения материала необходимо знать о каждой из реакций:

- ингредиенты; - механизм реакции;

- методы и схемы постановки; - практическое применение; - диагностические препараты.

Исходный уровень знаний

Для усвоения материала необходимо повторить материал предыдущих занятий: комплемент и пути его активации; антигены и антитела; механизмы реакций иммунитета.

Цель занятия

1. Изучить механизм и методы постановки реакций: - иммунного бактериолиза и иммунного гемолиза; - реакции связывания комплемента (РСК); - реакции иммунофлюоресценции (РИФ);

- реакций иммуноферментного анализа (ИФА), радиоиммунного анализа (РИА), иммуноблоттинга;

- реакции иммунной электронной микроскопии (ИЭМ).

2. Научиться интерпретировать результаты серологических исследований.

План изучения темы

1.Реакции иммунного бактериолиза и гемолиза.

2.Реакция связывания комплемента.

3.Реакции с использованием меченых антигенов и антител: реакция иммунофлюоресценции, иммуноферментный анализ, иммуноблоттинг, радиоиммунный анализ, иммунная электронная микроскопия.

После изучения темы студент должен уметь

Учесть и интерпретировать результаты следующих реакций:

-РСК;

-РИФ;

70