20. Методы выделения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий.

Выделение чистой культуры бактерий-аэробов из материала, содержащего смесь микробов, занимает, как правило, 3 дня и производится по следующей схеме:

• 1 день - микроскопия мазка из исследуемого материала, окрашенного по Грамму, для предварительного ознакомления с микрофлорой данной смеси. Посев материала петлей на чашку Петри с питательной средой штриховым методом для получения изолированных колоний. Засеянные чашки помещают в термостат на сутки.

• 2 день - изучение колоний, выросших на чашках, отбор изолированных колоний, описание их и микроскопия мазков из изолированных колоний (окраска по Граму) для проверки однородности микробов в колонии. Пересев изолированной колонии на скошенный агар для получения чистой культуры. Посевы помещают в термостат на сутки.

• 3 день - проверка чистоты культуры, выросшей на скошенном агаре, путём микроскопии мазков, окрашенных по Граму. При однородности исследуемых бактерий выделение чистой культуры можно считать законченным.

Выделение чистых культур анаэробов производится в несколько этапов.

I этап - обогащение. На среде Китта - Тароцци, предварительно прокипяченной в течение 30 минут. После посева среду прогревают 15 минут при 80°С для уничтожения вегетативных форм, споры анаэробов при этом сохраняются.

II этап - получение изолированных колоний. На средах Китта - Тароцци обнаруживается помутнение с пузырьками газа. Выделение чистой культуры проводится по одному из следующих методов:

• а) по Цейсслеру - каплю материала со среды Китт - Тароцци засевают в чашку с кровяным агаром и распределяют материал шпателем, этим же шпателем производят посев во второй и третьей чашках;

• б) по Вейнбергу: каплю материала со среды Китт - Тароцци переносят в растопленный и слегка остуженный сахарный агар, затем набирают в трубки Виньял - Вейона и инкубируют в термостате.

III этап - выделение чистой культуры на среде Китта - Тароцци.

21. Вирусы (история открытия, характеристика). Назовите фамилию учёного, впервые открывшего вирус, какой вирус он открыл. Основные отличия вирусов от других живых существ, размеры вирусов, структура вирусов, этапы репродукции вируса в клетке.

Вирусы – это неклеточные формы жизни, обладающие собственным геномом и способные к воспроизведению только в клетках более высокоорганизованных существ (растений, грибов, животных и человека).

Вирусы существуют в двух формах: Ø внеклеточная, корпускулярная, покоящаяся – вирион;

Ø внутриклеточная (представлена лишь НК), репродуцирующаяся, вегетативная – собственно вирус.

Д.И. Ивановский (1864-1920 гг.) – первооткрыватель вирусов. Будучи сотрудником кафедры ботаники Петербургского университета в 1892 г. при изучении мозаичной болезни табака пришел к выводу, что заболевание вызвано фильтрующимся агентом, впоследствии названным вирусом. В своей диссертации «О двух болезнях табака» Д.И. Ивановский гениально предположил, что обнаруженный мельчайший агент состоит из телец.

В отличие от клеток живых организмов вирусы не имеют клеточной оболочки, органелл, протоплазмы и других компонентов клетки. Все вирусы состоят из двух основных типов молекул –наследственного материала (РНК –рибонуклеиновая кислота или ДНК –дезоксирибонуклеиновая кислота) и белковой оболочки. Жизненный цикл вируса состоит в том, что нуклеиновая кислота проникает в клетку и, используя возможности клетки, нарабатывает свою ДНК или РНК, а также свои белки. Затем вирусные частицы самопроизвольно собираются в инфицированной клетке, разрушая ее, и уже батальоны вирусов продолжают свое развитие.

Размеры вирусов: -мелкие от 20 до 70нм -средние от 80 до 150нм -крупные от 150 и более

Сформированная вирусная частица, находящаяся вне клетки, называется «вирион». Вирион является внеклеточной формой существования вируса.

В центре вириона-нуклеин к-та (вирусный геном). Снаружи нуклеин к-та покрыта белковой оболочкой - капсидом (лат. capsa – футляр, коробка). Капсид как чехлом окружает вирусную нуклеин к-ту. Вирусный геном и капсид вместе образуют нуклеокапсид. Капсид состоит из повторяющихся морфологических субъединиц - капсомеров. Простые вирусы м б как РНК-содержащими, так и ДНК-содержащими. У сложных вирусов наряду с капсидом имеется дополнит оболочка - суперкапсид (пеплос, покрывало). Суперкапсид состоит из двойного слоя липидов и специфич вирусных белков. Суперкапсидная оболочка вируса явл модифицированной цитоплазматической мембраной кл, в кот репродуцировался данный вирус. На поверхности некот оболочечных вирусов располаг шипы или шипики (пепломеры, суперкапсидные белки) - это липопротеиновые или гликопротеиновые выступы.

I гр - вирусы, имеющие спиральный тип симметрии. II гр - вирусы, имеющие кубический тип симметрии. III гр - вирусы, имеющие комбинированный (смешанный, сложный) тип симметрии.

Репродукция вирусов осуществляется в несколько стадий, последовательно сменяющих друг друга:

• адсорбция вируса на клетке;

• проникновение вируса в клетку;

• «раздевание» вируса;

• биосинтез вирусных компонентов в клетке;

• формирование вирусов;

• выход вирусов из клетки.

Адсорбция. Вирус адсорбируется на определенных участках клеточной мембраны —рецепторах. Клеточные рецепторы могут иметь разную химическую природу, представляя собой белки, углеводные компоненты белков и липидов, липиды. на клетке могут адсорбироваться десятки и даже сотни вирусных частиц.

Проникновение в клетку. Существует два способа проникновения вирусов животных в клетку: виропексис и слияние вирусной оболочки с клеточной мембраной.

При виропексисе после адсорбции вирусов происходят инвагинация (впячивание) участка клеточной мембраны и образование внутриклеточной вакуоли, которая содержит вирусную частицу. Вакуоль с вирусом может транспортироваться в любом направлении в разные участки цитоплазмы или ядро клетки. Процесс слияния осуществляется одним из поверхностных вирусных белков капсидной или суперкапсидной оболочки.

«Раздевание». заключается в удалении защитных вирусных оболочек и освобождении внутреннего компонента вируса, способного вызвать инфекционный процесс. «Раздевание» вирусов происходит постепенно, в несколько этапов, в определенных участках цитоплазмы или ядра клетки, для чего клетка использует набор специальных ферментов. В случае проникновения вируса путем слияния вирусной оболочки с клеточной мембраной процесс проникновения вируса в клетку сочетается с первым этапом его «раздевания». Конечными продуктами «раздевания» являются сердцевина, нуклеокапсид или нуклеиновая кислота вируса.

Биосинтез компонентов вируса. Проникшая в клетку вирусная нуклеиновая кислота несет генетическую информацию, которая успешно конкурирует с генетической информацией клетки. Она дезорганизует работу клеточных систем, подавляет собственный метаболизм клетки и заставляет ее синтезировать новые вирусные белки и нуклеиновые кислоты, идущие на построение вирусного потомства.

Реализация генетической информации вируса осуществляется в соответствии с процессами транскрипции, трансляции и репликации.

Формирование (сборка) вирусов. Синтезированные вирусные нуклеиновые кислоты и белки обладают способностью специфически «узнавать» друг друга и при достаточной их концентрации самопроизвольно соединяются в результате гидрофобных, солевых и водородных связей.