10. Простейшие. Положение среди других микроорганизмов. Морфологические особенности. Основные представители.

Простейшие относятся к домену Eukarya, явл одноклет эукариотами. По св-вам они близки к клеткам животных, входят в новые царства – Protozoa и Chromista. Простейшие царства Protozoa – одноклет микроскопические животные, кл кот содержит: ядро с ядерной оболочкой и ядрышком; цитоплазму, состоящую из эндоплазматического ретикулума, митохондрий, лизосом и многочисленных рибосом. Снаружи простейшие окружены мембраной (пелликулой) – аналогом цитоплазматической мембраны клеток животных.

Размеры простейших – от 2 до 200 мкм, форма – округлая, овальная, полулунная, грушевидная и др. При окраске по Романовскому-Гимзе ядро простейших окрашивается в красный, а цитоплазма – в голубой цвет. Простейшие размножаются бесполым путем – двойным или множественным делением (шизогония), а некоторые и половым путем (спорогония). Жизненный цикл простейших характ стадийностью – образованием стадий трофозоита и цисты. По способу питания – типичные гетеротрофные организмы. Дышат всей поверхностью тела.

Движение осуществляется за счет ресничек, жгутиков, псевдоподий.

Основные представители – Саркодовые (Entamoeba coli, Entamoeba histolitica), Жгутиковые (Leishmania tropica, Lamblia intestinalis, Trychomonas vaginalis), Споровики (Toxoplasma gondii, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale, Plasmodium malariae), Инфузории (Balantidium coli)

11. Риккетсии. Положение среди других микроорганизмов. Морфологические особенности. Основные представители.

Сем – Rickettsiaceae Класс – Proteobacteria Порядок – Rickettsiales Род – Rickettsia

Риккетсии занимают промежуточное положение между бактериями и вирусами.

Сходство с бак: строение клет стенки; наличие ДНК и РНК; размножение бинарным делением (удваиваются только через 8-12 часов).

Сходство с вирусами: высокое содержание липидов и низкое –углеводов; облигатные внутриклет паразиты.

Риккетсии – это полиморфные микроорг. Отличаются малыми размерами кл. Есть кокковидны, палочковидные, нитевидные формы. Нитевидные могут распадаться на кокки и палочки. Риккетсии не образуют спор и капсул и не подвижны. Гр-; хорошо окрашиваются по Цилю-Нильсену и Романовскому-Гимзе. Размножаются простым делением.

Представители (патогенные)- R. prowazekii Эпидемический сыпной тиф (вшивый)

R. typhi Эндемический (блошиный) сыпной тиф

R. rickettsii Пятнистая лихорадка Скалистых гор

R. sibirica Североазиатский клещевой риккетсиоз

12. Методы приготовления препаратов для изучения морфологии микробов в живом и в окрашенном состоянии. Этапы приготовления мазка. Простые и сложные методы окраски микробов.

Приготовление окрашенного препарата из культуры микроорг вкл: 1) приготовление мазка, 2) высушивание мазка, 3) фиксацию, 4) окраску. Приготовление мазка. из культуры микроорг, выросшей на поверхности плотной пит среды, на обезжиренное предметное стекло наносит петлей небольшую каплю физ р-ра, располагая её и центре круга, нарисованного с обратной стороны карандашом по стеклу. При работе спиртовка должна находиться прямо перед вами, на удобном для работы расстоянии. Предметное стекло должно находиться в чашке Петри или лотке: категорически запрещается готовить мазки на предметном стекле, лежащем на столе! В правую руку берут бактериологич петлю, в левую - пробирку с культурой. Петлю стерилизуют, внося сё в пламя горелки и вертикальном положении. После того как петля раскалится докрасна, проводят конец петледержателя через пламя. После этого из пробирки вынимают пробку, удерживая её мизинцем правой руки. После обжигания на спиртовке края пробирки вносят петлю, кот охлаждают, прикасаясь к стенкам пробирки, Затем петлей с поверхн среды снимают небольшое кол-во культуры. Не касаясь стенок пробирки, вынимают петлю и закрывают пробирку пробкой над спиртовкой. После этого пробирку с культурой помещают в штатив, культуру на петле вносят в приготовленную заранее каплю физ р-ра, хорошо размешивают и равномерно распределяют по стеклу в пиле небольшого круга или овала 1-1,5 см в диаметре. По окончании приготовления мазка петлю вновь стерилизуют в пламени спиртовки. Для приготовления мазка из бульонной культуры на предметное стекло наносят 1-2 петли исслед материала, стерилизуя петлю перед каждым погружением в бульонную культуру микроорг и равномерно распределяют по стеклу (1 этом случае не требуется предварительного нанесения на стекло физиологического раствора). Высушивание мазка. производится на воздухе Для ускорения высушивания предметное стекло с мазком, обращённым кверху, можно подержать в струе тёплого воздуха высоко над пламенем спиртовки, не внося препарат в пламя. Фиксация мазка, Для этого испол физич и химич методы, Физич метод заключается в фиксации мазка над пламенем спиртовки в течение нескольких секунд мазком вверх (троекратно по 1 сек), Эту операцию проводят достаточно быстро, стараясь не перегреть мазок, т к при перегревании могут произойти изменении морфологии кл, Химич метол фиксации явл более мягким по сравнению с фиксацией на пламени. В кач-ве фиксаторов испол этанол, ацетон, смесь Никифорова (эквивалентное соотношение этанола и эфира), метанол, формалин. После фиксации мазок можно окрашивать. Окраски мазка. Для окраски мазка следуют предписаниям для каждой методики окраски. При окраске простым способом на мазок наносит несколько капель р-ра красителя так, чтобы весь мазок был покрыт им. Краситель оставляют на опред вр. Затем препарат промывают водой и просушивают фильтровальной бумагой.

Исслед микроорг в живом состоянии примен глав обр для изучения формы и подвижности бак, реже при р-ции агглютинации. Для этих целей готовят препараты “раздавл капля” и “висячая капля”

Препарат “раздавленная капля”. жидкость с исслед материалом наносят на предметное стекло и сверху накладывают покровное. Капли материала надо брать такой величины, чтобы они заполняли все пространство между покровным и предметным стеклом и не выступали за края покровного.

Препарат “висячая капля”. необходимо иметь предметное стекло с луночкой. На покровное стекло предварительно наносят каплю жидкости с исслед культурой микроорг. Затем на покровное стекло накладывают предметное стекло, с луночкой посередине, края кот предварительно смазаны вазелином. Предметное стекло слегка прижимают к покровному, в результате чего оба стекла склеиваются. После этого препарат перевертывают покровным стеклом кверху. Получается герметически закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.

Простой метод окраски. Явл одноэтапным и заключается в окраске микропрепарата 1им красителем. Испол основные анилиновые красители: фуксин, генцианвиолет, метиленовый синий в виде водных р-ров или пропитанных красителем фильтровальных бумажек, кот помещают на мазок и смачивают водой. Продолжит окраски составляет 3-5 мин, после чего микропрепарат промывают водой, высушивают и микроскопируют. В препаратах, окрашенных простым методом, можно получить представление о форме, расположении и размерах микробных клеток.

Сложные методы окраски. Сложные (дифференцирующие) методы окраски (по Граму, Цилю-Нильсену и др.) вкл последоват испол неск красителей и дополнит способов обработки препаратов. Эти методы позволяют дифференцировать бак в зависимости от строения их структур, чаще всего поверхностных. Н, метод окраски по Граму позволяет дифференцировать бак по строению их клет стенки: грам+ (фиолетовые) с толстой и грам- (красные) бак с тонкой клет стенкой.

Существуют спец сложные методы окраски, кот испол для выявл структурных компонентов бактериал кл: капсул, цитоплазматических включений, спор, жгутиков.

Техника окраски по Граму в модификации Синёва.

1. На фиксированный препарат наносят 2-3 капли воды и кладут полоску фильтровальной бумаги, пропитанной генцианвиолет. Окрашивают 1-2 минуты.

2. Снимают бумажку, сливают краску и, не промывая водой, налить на препарат р-р Люголя на 1м

3. Сливают р-р Люголя и наливают на препарат спирт с йодом на 30 секунд. Промывают водой.

4. После этого окрашивают мазок водным фуксином в течение 1 минуты.

5. Промывают водой, высушивают препарат фильтровальной бумагой, микроскопируют. В результате окраски грам+ микробы окрашиваются в фиолетовый цвет, грам- в красный.

Окраска по Цилю-Нильсену.

1. На фиксированный препарат помещают полоску фильтровал бумаги, наливают карболовый фуксин Циля и осторожно нагревают на горелке до появл пара, не допуская кипения жидкости. Нагревание повторяют 3 раза.

2. Снимают бумагу, промывают водой.

3. Погружают 3 раза в 5% раствор серной кислоты.

4. Промывают препарат водой и докрашивают метиленовой синью 5 минут.

5. Промывают водой, высушивают препарат фильтровальной бумагой, микроскопируют.