31. Моноклональные антитела. Получение. Использование

Моноклональные антитела – АТ, синтезируемые искусственно полученным клоном плазмоцитов.

При введении в организм животных и человека чужеродных макромолекулярных веществ — белков или полисахаридов (антигенов) в крови появляются защитные белки — антитела, для которых характерна уникальная специфичность. Каждое антитело узнает только свой антиген, точнее, один его эпитоп. Эпитоп состоит из нескольких остатков аминокислот или сахаров, образующих пространственную структуру, характерную для данного белка.Один антиген может содержать много эпитопов, поэтому к одному белку образуется целое семейство различных по своей специфичности антител.

Таким образом, при введении антигена возникает большое семейство антител, направленных к разным его детерминантам и различающихся также внутри группы антител, направленных к одной и той же детерминанте.

Синтез такого разнообразия обеспечивается множеством семейств клонов лимфоцитов, каждое из которых занимается синтезом собственного конкретного АТ. Дело понятное, нужно вырастить отдельные клоны антителообразующих клеток in vitro в культуре тканей, и они будут продуцировать моноклональные антитела, однако не все так просто.

Метод получения моноклональных антител (разработан в 1975 г. Г. Келлером и К. Мильштейном) состоит в слиянии сенсибилизированных лимфоцитов с клетками миеломы для получения клеточных гибридов (гибридом). Гибридомы обладают способностью синтезировать антитела и, в то же время, они представляют собой опухолевые клетки, способные к непрерывной пролиферации.

Этапы получения гибридом:

1) получение миеломной линии, где миелома – злокачественная опухоль плазматических клеток;

2) получение селезеночных клеток от иммунизированного организма (плазмоциты, синтезирующие Ig определенной специфичности);

3) создание условий для слияния клеток;

4) выделение слившихся клеток;

5) отбор интересующего клона, его накопление (in vitro или в организме животного) и использование.

Использование моноклональных антител:

· В научных целях для анализа структуры, генетики Ig.

· Для изучения рецепторов лимфоцитов и их субпопуляций.

· В диагностике многих инфекционных и неинфекционных заболеваний.

· В лабораторных исследованиях

· В лечении некоторых, в т. ч. онкогенных, заболеваний: ведутся активные исследования по использованию моноклональных антител в качестве специфических переносчиков токсических веществ в опухолевые клетки.

32. Морфология микроорганизмов. Морфологические группы бактерий

Морфологические признаки – форма, размеры и взаиморасположение микробных клеток, изучаемых микроскопическим методом исследования.

Морфология м/о изучает их внешний вид, форму и особенности строения, способность к движению, спорообразованию, способы размножения.

Морфологические признаки играют большую роль в распознавании и классификации микроорганизмов. Для научно обоснованной классификации одних каких-либо признаков бывает недостаточно. Поэтому используют комплекс признаков:

-морфологические (форма клеток, размеры, подвижность, размножение, спорообразование, окраска по Граму);

- культуральные (характер роста на жидких и плотных питательных средах);

-физиолого-биохимические (характер накапливаемых продуктов);

-генотипические (физико-химические свойства ДНК).

Морфология бактерий – раздел бактериологии, который изучает форму и взаиморасположение клеток, их структуры, строение бактериальной клетки и ее отношение к красителям.

Для изучения морфологии бактерий применяют специальные оптические приборы – микроскопы. ОДНАКО прижизненная световая микроскопия не позволяет детально оценить форму бактерий и их тинкториальные свойства (окраску). !Для этого применяют световую микроскопию с иммерсионной системой для окрашенных фиксированных мазков.

· Шаровидные (кокковые) бактерии

– если кокки после деления группируются в одной плоскости, то они могу располагаться попарно и называться диплококками (менингококки, гонококки) (часто пневмокко – крупоз. пневмония. На сахарном бульоне пневмококк жает морфологию стрептококков)

– сгруппировавшись последовательно в одной плоскости, кокки соединяются в виде цепочки – стрептококки

– если образуются их скопления в виде «гроздья винограда» – стафилококки

– в результате группировки четырех кокков в 2х взаимно перпендикулярных плоскостях, обр. тетракокки; при группировке кокков в 3х взаимно перпендикулярных плоскостях возникают пакетообразные кокки (в виде кубика) – сарцинии

* у мелких бактерий различия м/д длиной и шириной могут быть незначительными, поэтому по внешнему виду они напоминают кокки. ТАКИЕ ФОРМЫ называются коккобактериями (например, возбуд. бруцеллеза)

· Палочковидные (цилиндрические) бактерии

– концы палочек могут быть ровными, закругленными, срезанными под прямым углом (возбуд. сибирской язвы), заостренными (у фузобактерий), утолщенными на полюсах (возбуд. дифтерии)

– палочковидные бактерии, образующие споры, принадлежат к двум родам – бациллы и клостридии. У клостридий, в отличие от бацилл, диаметр споры превышает диаметр поперечного сечения бактерий. В результате клетки со спорами приобретают форму веретена, барабанной палочки (возбудитель столбняка), ракетки (возбудитель ботулизма)

– нитевидные формы, сохраняют морфологию ветвящихся и переплетающихся стрептобактерий (актиномицеты и лептотрихии – обитатели полости рта)

· Извитые (спиралевидные) формы

– вибрионы (запятая) (холерный вибрион) – имеют два жгутика на одном/двух полюсах клетки

– спириллы – имеют 2-4 витка и жгутики на обоих полюсах клетки (амфитрихии)

а) кампилобактерии

б) хеликобактерии

– спирохеты – имеют 5-12 завитков (возбудитель сифилиса). Движение за счет фибриллярных нитей (периплазматические) из сокр. белка – аналог флагеллина

а) боррелии

б) трепонемы

в) лептоспиры

– часто извитые формы имеют жгутики – фибриллярные образования из сократительных белков флагеллина. Жгутик фиксирован под клеточной стенкой в ЦПМ и обеспечив. активное движение бактерий.