2018 ВИР и БИОТ ВЕТ л.з. (методичка)
.pdfПри тихой форме болезни вторая стадия (возбуждения) как бы выпадает,
развиваются параличи и животное погибает.
Гидрофобия проявляется у человека при попытке пить и поднесении к губам стакана с водой у больного возникает судорожное сокращение мышц глотки и гортани, дыхание становится шумным, в виде коротких судорожных вдохов. За-
тем подобные явления возникают при упоминании слова «вода» и при звуке льющейся воды. Также может быть и при дуновении в лицо струи воздуха (аэро-
фобия). После контакта пострадавшего человека с бешеным животным можно за-
медлить развитие инфекции (или даже преду-
предить!) путем незамедлительной обработки раны. Следует некоторое время подождать пока из раны вытечет небольшое количество крови,
затем рану обильно промывают водой с мылом,
обрабатывают спиртом, йодом и накладывают повязку. Промывая рану, необходимо действо-
вать осторожно, чтобы еще больше не повредить ткани. Местная обработка раны приносит наи-
большую пользу, если она проводится в течение часа после укуса. Пострадавшего направляют в медпункт, где проводят иммунизацию сыворот-
кой и антирабической вакциной. Лица, больные бешенством, госпитализируются – им вводят мор- Рисунок 53 - Строение вируса
фин, аминазин, димедрол, помещают в затемнен- |
бешенства. |
|
ное помещение.
Возбудителем болезни является Rhabdoviridae, Lyssavirus, РНК-вирус (ри-
сунки 53, 54, 55). Вирус нейротропный. Вирионы имеют форму пули, спиральный тип симметрии; есть липопротеиновая оболочка с шипиками из гликопротеидов размером 10 нм. Геном - одноцепочечная линейная (-)РНК. Вирион обладает ге-
магглютинирующим свойством.
Вирус бешенства имеет 4 серотипа:
151
-вирус 1 серотипа – выделен в разных частях света;
-вирус 2 серотипа – выделен из костного мозга летучих мышей в Нигерии;
-вирус 3 серотипа – выделен от землеройки и человека;
-вирус 4 серотипа – выделен от лошадей, комаров и москитов в Нигерии и еще не классифицирован.
Все варианты вируса родственны в иммунологическом отношении.
Культивируют вирус путем интрацеребральных заражений кроликов и белых мышей; в культуре фибробластов, перевиваемых культурах клеток; на куриных эмбрионах.
В гниющим патологическом материале вирус сохраняется до 2-3 недель. Низкие температуры консервируют - в течение всей зимы вирус сохраняется в мозге зарытых в землю трупов животных. Высокие темпера-
туры вирус инактивируют: 50 °С - 1 час, 60
°С – 10 мин, 80-100 °С - мгновенно. УФЛ – |
Рисунок 54 - Вирус бешенства под |
5-10 мин. Высушивание – 10 - 14 дней. Ау- |
электронным микроскопом. |
|
толитические процессы и гниение вызывают гибель возбудителя в головном моз-
ге трупов в зависимости от температуры через
5-90 дней.
По устойчивости к химическим дезинфи- |
|
цирующим средствам возбудитель бешенства |
|
относится к устойчивым (вторая группа). Де- |
|
зинфицирующие растворы: растворы 2 % хло- |
|
рамина, 2 % щелочи или формалина, 1 % йоде- |
Рисунок 55 - Вирус бешенства |
|
|
за, 4 % перекиси водорода и т.д. |
под электронным микроскопом. |
Центральная нервная система является избирательным местом нахождения возбудителя бешенства. В наибольшем титре вирус обнаруживают в головном
152
Рисунок 56 - Продвижение вируса бешенства от ворот инфекции до места локализации.
мозге (аммоновых рогах, мозжечке, продолговатом мозге). После поражения ЦНС вирус проникает в кровь и во все внутренние органы, кроме сальника, селезенки и желчного пузыря. Вирус постоянно обнаруживается в слюнных железах и тканях глаз.
Не все укушенные животные или человек заболевают бешенством, т.к. не всегда в рану попадает слюна (например, остается на одежде). Т.к. трудно устано-
вить, в каких случаях вирус бешенства попадает в организм при укусе, а в каких заражения не происходит, то каждый укус собаки следует считать опасным и принимать соответствующие меры.
Условно патогенез при бешенстве можно разделить на 3 фазы (рисунок 56): 1. Экстраневральная (около 2 недель) – без видимого размножения вируса в
153
месте инокуляции;
2.Интраневральная – центростремительное размножение инфекции;
3.Диссеминация вируса по всему организму - характеризуется проявлением
симптомов болезни и гибелью животного.
Размножение вируса в сером веществе мозга обуславливает развитие диф-
фузного негнойного энцефалита. Из мозга по центробежным нервным путям ви-
рус попадает в слюнные железы, где размножается в клетках нервных узлов и по-
сле дегенерации выходит в протоки желез, инфицируя слюну. Выделение вируса со слюной начинается за 10 дней до появления первых клинических признаков.
До появления клинических признаков болезни вирус из мозга нейрогенным путем транспортируется в слюнные железы, сетчатку, надпочечники, где тоже репроду-
цируется. Воздействие возбудителя вначале обуславливает раздражение клеток важнейших отделов ЦНС, что приводит к повышению рефлекторной возбудимо-
сти и агрессивности заболевшего животного, вызывает судороги мышц. Затем происходит дегенерация нервных клеток. Смерть наступает вследствие паралича дыхательных мышц.
Большую роль играет иннервация пораженного участка. Чем богаче нервны-
ми окончаниями ткань в воротах инфекции, тем больше возможность развития болезни.
Животные, вакцинированные против бешенства, продуцируют вируснейтра-
лизующие, комплементсвязывающие, преципитирующие антитела. Полагают, что вакцинация вызывает биохимические изменения, снижающие чувствительность нервных клеток к вирусу. Сущность вакцинации сводится к активному накопле-
ния антител к вирусу бешенства, которые нейтрализуют вирус в месте проникно-
вения его в организм до внедрения в нервные элементы или при вынужденной иммунизации нейтрализуют вирус по пути к центральной нервной системе. Акти-
визируются также Т-лимфоциты, ответственные за продукцию интерферона, по-
этому при бешенстве возможно постинфекционная вакцинация. Вакцинный штамм, проникая в нервные клетки раньше полевого штамма, заставляет их выра-
154
батывать интерферон, инактивирующий вирус дикого бешенства и антитела, бло-
кирующие специфические клеточные рецепторы.
Клинически больных животных не лечат! Заболевших животных немедлен-
но изолируют и убивают. После укусов человеку применяют антирабический гамма-глобулин и антирабическую иммунную сыворотку.
В качестве специфической профилактики применяют различные вакцины.
Вакцины живые тканевые (мозговые), эмбриональные (куриные и утиные эм-
брионы) и культуральные (первично-трипсинизированные и перевиваемые куль-
туры клеток ВНК-21/13), инактивированные (84 разновидности антирабических вакцин в 41 стране мира).
Перечень контрольных вопросов:
1.Возбудитель вируса бешенства относится к какому семейству вирусов.
2.Кто открыл вакцину против бешенства.
3.Постановка РИФ.
4.Как выявляют тельца Бабеша-Негри.
5.На каких животных и как осуществляют постановку биологической про-
бы при бешенстве.
6.Схема лабораторной диагностики бешенства.
7.Методы прижизненной диагностики бешенства.
Тема 2.2. Лабораторная диагностика оспы
Цель: изучить методы лабораторной диагностики оспы животных и биологи-
ческие особенности возбудителя
Содержание:
отбор патологического материала при оспе;
вирусоскопия;
биологическая проба;
серологический метод диагностики;
некоторые сведения о вирусе оспы.
155
Некоторые вирусы оспы способны размножаться на хориоаллантоисной обо-
лочке куриных эмбрионов, образуя характерные некротические узелки - оспины.
Также вирусы размножаются и на первичных культурах клеток своего вида жи-
вотных с образованием ЦПД.
В лабораторию посылают содержимое везикул или пустул.
Вирусоскопия. Готовят мазки на предметных стеклах с участка кожи или слизистой с оспенным поражением и окрашивают мазки. Для окраски мазков ме-
тодом серебрения по М. А. Морозову готовят 3 реактива.
Реактив № 1 (жидкость Руге): 1 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл 40 %
формальдегида (формалин) и 100 мл дистиллированной воды соединить в одном сосуде.
Реактив № 2 (протрава): 5 г танина растворить в 100 мл дистиллированной воды и добавить 1 мл жидкой карболовой кислоты (фенола). Чтобы превратить кристаллическую карболовую кислоту в жидкую, ее надо расплавить на водяной бане при 56 °С. Танин следует высокого качества. Для испытания на чистоту 1 г
танина растворить в 5 мл воды и добавить 10 мл 90 % спирта. В течение 1 ч не должно появиться помутнения (декстрин, камель). Не должно быть помутнения
(сахар, соли) и при последующем добавлении 5 мл эфира.
Реактив № 3 (раствор аммиачного серебра): растворить 5 г кристаллического азотнокислого серебра в 100 мл дистиллированной воды. От общего раствора от-
лить в другой сосуд небольшую (примерно десятую) часть. К оставшемуся рас-
твору по каплям добавить крепкий 25 % аммиак. Вначале образуется плотный бу-
ро-черный осадок, который при дальнейшем добавлении аммиака растворяется.
Задача состоит в том, чтобы не довести до полного растворения осадка, а добить-
ся получения слегка мутного (опалесцирующего) раствора. Если это не удалось и раствор стал полностью прозрачным, по каплям надо добавить раствор азотно-
кислого серебра из отлитой вначале части до помутнения основного раствора.
Добавляя по каплям в основной раствор то аммиак, то азотнокислое серебро, надо добиться опалесценции. Полученный опалесцирующий раствор надо развести
156
дистиллированной водой 1:10 и использовать для окраски препаратов. Раствор очень стоек, но его надо хранить в темноте в склянке с притертой пробкой.
Методика окрашивания по М. А. Морозову: обрабатывают препарат реактивом № 1 (жидкость Руге) 3-5 мин, промывают дистиллированной водой; опускают в реактив № 2 (протрава) с подогревом (до появления пара) на 1-2 мин, тщательно отмывают дистиллированной водой; обрабатывают реактивом № 3 (раствор аммиачного серебра) 1-2 мин при легком подогреве до появления темно-коричневой окраски, тщательно отмывают дистиллированной водой; сушат на воздухе и исследуют с масляной иммерсией под микроскопом.
Результат: на желтом фоне мелкие темно- Рисунок 57 - Окраска по коричневые тельца округло-овальной формы, лежа- Морозову.
щие скоплениями, рядами или диффузной массой, но неодиночные. Эти тельца и есть вирионы оспенных вирусов (рисунок 57).
Окрашивать удобно над эмалированными кюветами (18 x 24 см) с положенными на их края «мостиками» (2 пипетки на 1-2 мл, соединенные на обоих концах резиновыми трубками подходящего диаметра). Для каждого реактива нужна своя пипетка.
Достоинства вирусоскопии: быстрота получения ответа, простота и доступность техники исполнения.
Недостатки: дает четкие результаты только при исследовании мазков везикулярной жидкости (при исследовании пустул и корок результаты значительно снижаются), не позволяет дифференцировать разные вирусы оспенной группы и легко отличать вирионы от сходных по форме клеточных элементов.
Биопроба. Ставится на естественно восприимчивых животных и на первичных культурах клеток этих же животных. К вирусам осповакцины, оспы коров и оспы лошадей чувствительны кролики, а эмбрионы чувствительны не только к вирусу оспы кур, но и к вирусам осповакцины, оспы коров, оспы голубей.
157
Все оспенные вирусы дермотропные, и по- |
|
|||
этому экспериментальное заражение ими удает- |
|
|||
ся при введении внутрикожно или в скарифици- |
|
|||
рованную кожу, а также на ХАО эмбрионов. |
|
|||
Методика заражения петуха в скарифици- |
|
|||
рованный гребень - на кожу гребня наносят не- |
|
|||
глубоких (не до крови) царапин с помощью инъ- |
|
|||
екционной иглы или сломанной пастеровской |
|
|||
пипетки с |
последующим |
втиранием в ска- |
|
|
Рисунок 58 - Заражение пе- |
||||
рифицированный гребень суспензии вируса ват- |
туха в скарифицированный |
|||
гребень. |
||||
|
|
|
||
ным тампоном (на палочке) или постриженной зубной щеткой (рисунок 58). |
||||
Петуха можно легко заразить оспой кур |
|
|||
также в перьевые фолликулы - на голени петуха |
|
|||
выщипывают перья и сразу же втирают в обна- |
|
|||
жившиеся фолликулы суспензию вируса (там- |
|
|||
поном или щеткой). Если в исследуемом мате- |
|
|||
риале был вирус оспы кур, то на 5-7-й день по- |
|
|||
сле заражения на гребне появляются характер- |
|
|||
ные оспины, а на голени - типичный для оспы |
|
|||
фолликулит (рисунок 59). В мазках из свежих |
|
|||
оспин или фолликулов нетрудно обнаружить |
|
|||
методом вирусоскопии вирионы вируса оспы. |
|
|||
Заражение кролика в предварительно вы- |
|
|||
бритый и скарифицированный участок кожи не |
Рисунок 59 - Заражение в |
|||
отличается |
от заражения |
петуха в скарифи- |
перьевые фолликулы. |
|
|
цированный гребень.
Из реакций применяют МФА и РДП для выявления антигена.
Лечение. Сыворотки реконвалесцентов и гипериммунных животных слабо эффективны. Лучшее действие оказывают гаммаглобулины.
158
Специфическая профилактика: гидроокисьалюминиевая фармолвакцина против оспы овец, коз; сухая культуральная вирус-вакцина против оспы овец из
штамма НИСХИ; вакцина против оспы кур из вируса оспы голубей.
Этиология. От англ. Рох – пус- |
|
||
тула, |
язва. |
Poxviridae |
|
Chordopoxvirinae, включает 8 родов. |
|
||
Вирионы до 400 нм, видимые в свето- |
|
||
вой микроскоп. Содержит одну моле- |
|
||
кулу двухцепочной ДНК с ковалент- |
|
||
но-замкнутыми концами (рисунки 60, |
|
||
61). |
|
|
|
Культивируют |
на культурах |
Рисунок 60 - Вирус оспы под |
|
|
|
|
|
клеток соответствующего вида живот- |
микроскопом. |
ного, на ХАО куриных эмбрионов.
Устойчивость: в корочках до 1,5 лет, при понижении температуры – не-
сколько лет, при гниении погибают быстро. Дезсредства губительны.
Патогенез Вирус → организм → |
|
септицемия → генерализация кожного |
|
процесса → розеола (красные пятна) - |
|
папула (бугорок, превращение пятен в |
|
узелки) - везикула (пузырьки с серо- |
|
желтой жидкостью) - пустула (содержи- |
|
мое везикул становится мутным и гной- |
|
ным) – круст (корочка). У птиц также |
Рисунок 61 - Вирус оспы под |
|
|
поражаются слизистые ротовой и носо- |
микроскопом. |
вой полостей (серо-желтые наложения, глубоко врастающие в слизистую оболоч-
ку). При геморрагической форме болезни (черная оспа) - многочисленные крово-
излияния внутри оспенных пузырьков, кровавая рвота, понос с примесью крови.
Оспа овец сопровождается опуханием век, поражаются лёгкие и глаза (бель-
мо); при осложнениях - суставы и ЖКТ (хромота и поносы). Оспа свиней харак-
159
теризуется почти одновременным появлением на разных участках тела розеол и папул, быстро превращаются в желтовато-серые пустулы, зудом, поносами. Оспа коров сопровождается снижением удоев и ухудшением качества молока. Сыпь на коже проходит все стадии формирования. Оспины плоские, синевато-чёрные. Ос-
па лошадей проявляется в виде папулёзно-пустулёзного стоматита, везикулёзно-
пустулёзного дерматита и в смешанной форме. Оспа птиц - поражаются внутрен-
ние органы, и птица постепенно худеет и гибнет (без видимых симптомов). У кур
- наросты, часто сливающиеся между собой, возможно вторичное высыпание ос-
пин на непоражённых участках тела.
Иммунитет пожизненный. У переболевших животных вырабатываются ней-
трализующие, преципитирующие, комплементсвязывающие антитела.
Перечень контрольных вопросов:
1.Патологический материал, отбираемый при оспе.
2.Окрашивание мазков методом серебрения по Морозову.
3.Постановка биопробы на кроликах и птицах.
4.Постановка МФА и РДП на оспу.
5.Возбудитель оспы.
6.Культивирование вируса.
7.Устойчивость вируса оспы.
8.Патогенез и клиническая картина оспы у животных.
9.Вакцинация животных против оспы.
Тема 2.3. Определение вируса ящура в реакции связывания комплемента
(РСК)
Цель: изучить методы лабораторной диагностики ящура и биологические особенности возбудителя.
Содержание:
отбор патологического материала при ящуре;
РСК на ящур;
РДСК на ящур;
160