Иммунные комплексы циркулирующие: методы определения

Методы, основанные на выявлении СЗ и продуктов его расщепления, связанных с иммунными комплексами:

- На клетках линии Raji находятся рецепторы к СЗ. При добавлении исследуемой пробы к клеткам Raji иммунные комплексы, связанные с этим компонентом комплемента, фиксируются на поверхности клеток. Связанные с клетками иммунные комплексы выясняются с помощью меченых антител к иммуноглобулинам.

- Иммунные комплексы, связанные с С3, можно также выявить с помощью меченых антител к С3 или бычьего  конглютинина. Другая группа методов основана на связывании иммунных комплексов с меченым или фиксированным на твердой подложке С1q.

Для получения надежных результатов рекомендуется одновременно несколько методов определения иммунных комплексов. Поскольку результаты определения циркулирующих иммунных комплексов часто противоречивы и малоинформативны, это исследование проводится редко.

44.иммунотипирование используется в медицине при злокачественных опухолях, при различных заболеваниях крови. ?Например, иммунотипирование ALL (моноклональные антитела к В-клеточным антигенам, Т-клеточным антигенам, common ALL -антигенам, Null-антигенам)

Лимфоциты способны синтезировать антитела для защиты организма от хронических инфекций и поддерживают определенный уровень иммунитета при инфекционных процессах.

Пролиферативную активность Т-лимфоцитов оценивают по интенсивности синтеза ДНК в ответ на стимуляцию митогеном (поликлональная стимуляция) или антигеном (моно- и олигоклональная стимуляция). В последнем случае применяются распространенные антигены или аллоантигены. Интенсивность синтеза ДНК оценивают по включению в нее меченных радиоактивным изотопом нуклеозидов, например 3Н-тимидина. Результаты обычно выражают в импульсах в минуту (имп/мин) и в виде индекса стимуляции - отношение радиоактивности стимулированных и нестимулированных лимфоцитов. Митогены стимулируют пролиферацию значительной части Т-лимфоцитов, поэтому результат оценивают обычно через 3 сут. Антиген стимулирует пролиферацию только тех Т-лимфоцитов, которые несут рецептор к нему, поэтому индуцированную антигеном пролиферацию оценивают через 5-7 сут. Для оценки пролиферативной активности Т-лимфоцитов, как и при проведении кожных проб, применяют набор широко распространенных антигенов. У ВИЧ-инфицированных пролиферативная реакция Т-лимфоцитов на распространенные антигены может быть снижена уже на ранних стадиях заболевания. Прогрессирование ВИЧ- инфекции и других иммунодефицитов сопровождается снижением реакции Т-лимфоцитов на аллоантигены, а впоследствии - и на митогены. Отсутствие реакции на митогены свидетельствует о тяжелой недостаточности клеточного иммунитета .

45. Методы выявления клеточных антигенов. Маркеры клеточной активации. Дифференцировочные маркеры лейкоцитов.

Определение поверхностных антигенов лимфоцитов CD ( табл. 18.8 ) широко применяется при обследовании ВИЧ-инфицированных, в диагностике гемоблатозов, и других заболеваний, а также для контроля за приживлением трансплантата и эффективностью иммунотерапии. В настоящее время для определения поверхностных антигенов лимфоцитов применяются моноклональные антитела, меченные флюорохромом, и проточный цитофлюориметр.

Для фенотипирования лимфоцитов человека используют мышиные моноклональные антитела. Моноклональные антитела используют не только для выявления разных типов клеток, но и изучения процессов дифференцировки, созревания, межклеточного взаимодействия и активации лимфоцитов.

Флюорохромы - это вещества, которые поглощают падающий свет определенной длины волны и излучают поглощенную энергию в виде света большей длины волны. В большинстве случаев антитела метят флюоресцеинизотиоцианатом или фикоэритрином. Другие флюорохромы, например техасский красный, родамин, аллофикоцианин, применяются лишь с исследовательской целью.

Проточный цитофлюориметр - прибор, позволяющий быстро оценить состав клеточной популяции по флюоресценции и оптическим характеристикам клеток. С помощью этого прибора можно определить абсолютное и относительное число клеток разных популяций и субпопуляций. К основным преимуществам метода относятся быстрота анализа и возможность одновременной оценки многих параметров клетки; размера, оптической плотности, поверхностных антигенов. Проточная цитофлюориметрия применяется также для анализа ДНК при исследовании клеточного цикла.

В большинстве клинических лабораторий для определения поверхностных антигенов лимфоцитов используют цельную кровь. Суть метода заключается в следующем:

- к небольшому объему цельной крови добавляют меченные флюорохромом моноклональные антитела;

- после инкубации, необходимой для связывания антител с антигенами клеточной поверхности, разрушают эритроциты;

- с помощью проточного цитофлюориметра анализируют клеточный состав пробы.

В клинических лабораториях проточная цитофлюориметрия широко применяется для определения содержания лимфоцитов CD4 при ВИЧ-инфекции.

Проточная цитофлюориметрия становится стандартным методом диагностики гемобластозов, поскольку позволяет определить тип и стадию дифференцировки трансформированных клеток. Этот метод применяется также для выявления других изменений клеточного состава крови и определения активированных лимфоцитов. Результаты проточной цитофлюориметрии, как правило, не позволяют поставить диагноз, но дают важную информацию для его уточнения.

CD44 – пре-Т-клетки. На зрелых лимфоцитах - CD4, CD8, CD3 и Т-клеточный рецептор. CD4 – Т-хелперы, CD8 – Т-киллеры. Рецепторы для взаимодействия с В-клетками, с макрофагами.

CD33 – миелоидные клетки.

CD34 – бласты.

CD14 – моноциты.

CD38 – активированные клетки.

На поверхности В-клеток – В-клеточные рецепторы, представляющие собой молекулы иммуноглобулинов. CD79 и CD19 рядом с В-клет.рецептором. Рецепторы для взаимодействия с Т-клетками, молекулы МНС, рецепторы для интерлейкинов.