Работа 25. Изучение влияния рН среды на активность амилазы слюны

Для большинства ферментов имеется определенное значение рН, при котором их активность максимальна. Понижение или повыше­ние значения рН от оптимальной точки для таких ферментов пони­жает их активность. Таким образом, влияние рН на активность фермента может выступать в качестве регулятора ферментативной активности внутри клетки. Для амилазы величина рН оп­тимума действия находится в пределах 6,8-7,0.

Ход опыта

В три пробирки налить по 2 мл 0,1% раствора крахмала. Затем в 1-ю добавить 1 мл 0,1% раствора НСl, во 2-ю - 1 мл дистиллированной воды и в 3-ю - 1 мл 0,1% раствора NaOH. После этого во все пробирки внести по 0,5 мл разба­вленной слюны, взболтать их содержимое и поставить в водяную баню или термостат при 37°С.

По истечении 10 мин пробирки вынуть, внести в каждую по 1 капле 1 % раствора йода и отметить окраску растворов.

Задание: 1. Выполнить опыт.

2. По окраске растворов сделать вывод о влиянии на активность амилазы реакции среды: какая является оптимальной?

3. Где в практике товароведа-эксперта можно использовать это свойство ферментов, в т. ч. амилазы?

Работа 26. Изучение влияния температуры на активность энзимов

На активность ферментов оказывает влияние температура: низкая температура снижает активность, а с ее повышением от мини­мальной до оптимальной активность ферментов увеличивается. Высокие температуры (для большинства ферментов выше 60°С) ингибируют (денатурируют) ферменты.

Оптимальной температурой для действия большинства ферментов является температура тела (36 - 40°С) животных.

Ход опыта

В три пробирки налить по 0,5 мл разбавленной слюны. Затем 1-ю пробирку поставить в стакан со льдом (или холодильник), 2-ю – в термостат или водяную баню при температуре 37C, а 3-ю прокипятить и охладить под водопроводной водой до комнатной температуры. Во все пробирки влить по 1 мл 0,1% раствора крахмала. 3-ю пробирку поставить также в термостат или водяную баню для инкубации. По истечении 10 мин в пробирки внести по 1 капле 1% раствора йода и отметить окраску.

Задание: 1. Выполнить опыт.

2. Сделать выводы о влиянии температуры на активность

амилазы:

а) низкой (1-я пробирка)

б) оптимальной (2-я пробирка)

в) высокой (3-я пробирка).

3. Объяснить механизм действия температуры на активность энзимов.

4. Указать, где в практике товароведа-эксперта можно использовать это свойство ферментов?

Работа 27. Изучение действия активаторов и ингибиторов на активность ферментов

Большое влияние на активность ферментов оказывают активато­ры и ингибиторы - ионы металлов или органические вещества, иногда довольно сложного состава. В роли активаторов ферментов часто выступают различные микроэлементы и водорастворимые ви­тамины - незаменимые факторы питания.

Металлы в роли активаторов в одних случаях могут непрочно связываться с ферментами, в других - входить в их белковую струк­туру, составляя так называемые истинные металлоэнзимы.

Среди веществ, вызывающих торможение какого-либо фермента, большое значение имеют специфические ингибиторы, которые по характеру действия подразделяются на обратимые и необратимые.

В свою очередь, ингибиторы, вызывающие обратимое торможение, разделяют на конкурентные (конкурирующие с субстратом за активный центр фермента) и неконкурентные. Так, например, малонат является конкурентным ингибитором сукцинатдегидрогеназы, ЭДТА - неконкурентный ингибитор; йодацетамид, диизопропилфторфосфат (ДФФ) - необратимые ингибиторы. В качестве специфи­ческих ингибиторов выступают такие соединения, как антибиотики, гербициды, инсектициды, пищевые добавки и др.

Ход опыта

Налить в 5 пробирок по 2 мл 0,1% раствора крахмала. Затем добавить в 1-ю пробирку (контроль) 1 мл воды, во 2, 3 и 4-ю - по 1 мл соответственно 0,1%, 1% и 4% растворы NaCl, в 5-ю - 1 мл 1% раствора СиSО₄. Влить во все пробирки по 0,5 мл разбавленной слюны, перемешать содержимое каждой пробирки и поставить их в термостат или водяную баню при 37°С.

По истечении 10 мин пробирки вынуть, внести в каждую по 1 капле 1% раствора йода и отметить окраску раствора.

Задание 1. Выполнить опыт.

2. Сделать заключение, какое вещество или ион выступа­ют в качестве активатора или ингибитора амилазы?

3. Какое влияние оказывает на действие амилазы разная концентрация NaCl?

4. Указать, где в практике товароведа-эксперта можно использовать активирование и ингибирование ферментов?

5. Объяснить механизм активирования и ингибирования ферментов.